SN0169-92出口食品中大肠菌群、粪大肠菌群和大肠杆菌检验方法

受控文件出口食品中大肠菌群、粪大肠菌群和大肠杆菌检验方法SN0169-92ZBX09002受控文件Methodforexaminationofcoliform，fecalcoliformandescherichiacoliinfoodforexport1、主题内容与适用范围本标准适用于出口食品的检验。2、设备和材料；5mL10mL，1mL2.2水浴箱：44.5±0.5℃。2.3培育箱：36±1℃，44.5±0.5℃。2.4冰箱：0～5℃和-15～-20℃。均质器。乳钵和研棒。平皿：直径90mm。天平：感量0.1g。显微镜。稀释瓶：100mL、200mL和500mL三角烧瓶及广口瓶。玻璃珠：直径约5mm。3、培育基及试剂月桂基硫酸盐胰蛋白(胨)(LST)肉汤。(BGLB)肉汤。3.3EC伊红美蓝琼脂(EMB)。养分琼脂斜面。3.7MR-VPKorser结晶紫中性红胆盐琼脂(VRBA)。Butterfield生理盐水。革兰氏染色液。甲基红指示剂。试剂。4、样品制备75％4℃冰箱保存。2～5℃18h45℃15min不同食品样品匀液的制备225mL30cm7s251：10固体和半固体食品225mL8000r/min1：1010-2、10-3、10-4……。从制备样品匀液至稀释完毕，全过程不得超15min。5、大肠菌群的测定大肠菌群MPN值的测定)(LST)1mL。将接种管置于36±1℃培育48±2h。24h48h进一步作证明试验。大肠菌群的证明试验将全部产气管用直径为3mm的接种环移种到煌绿乳糖胆盐(BGLB)肉汤管中。BGLB36±1℃48±2h。记录全部BGLB肉汤管的产气管数。MPNB(补充件)]报告每克(毫升)MPN6、粪大肠菌群测定用直径为3mm的接种环将全部48±2h内产气的LST肉汤管培育物移种于EC肉汤管中。EC30min44.5±0.5℃24±2h。44.5℃44.5℃不产气的产气肠杆菌或其他大肠菌群细菌作阳性和阴性比照。试验阴性。结果报告：按产气管数，查MPN表报告每克(毫升)样品中粪大肠菌群的MPN值。靛基质MRVP枸椽酸盐鉴定(型别)＋＋－－典型大肠杆菌－＋－－非典型大肠杆菌＋＋－＋典型中间型－＋－＋非典型中间型－－＋＋典型产气肠杆菌＋－＋＋非典型产气肠杆菌7、大肠杆菌测定将6.3EC24h平板，36±1℃24±2h。检查平板上有无具黑色中心有光泽或无光泽的典型菌落。如有典型菌落，则从每个平板上至少挑取2236±1℃18～24h。将斜面培育物移种到以下培育基中进展生化试验。色氨酸肉汤：在36±1℃24±2hKovacs0.2～0.3mL，上层消灭红色为靛基质阳性反响。48±2h1mL13mm×100mm0.6mL，40％0.2mL2h，VP48h5基红试验阳性，假设变黄色则为阴性反响。Koser36±1℃96hLST36±1℃48±2h，观看试管中是否产气。物作革兰氏染色。大肠杆菌为革兰氏阴性。7.4.6 大肠杆菌与非大肠杆菌生化鉴别如下：重复试验。IMViCMPNMPN8、大肠菌群固体培育基测定法4计数1mL。1mL(VRBA)10～15mL旋转平皿，将培育基与样液充分混匀。待琼脂凝固后，再加3～4mLVRBA掩盖平板表层。8.2.4翻转平板，置于36±1℃18～24h。0.5mm证明BGLB24h48h，观看产气状况。色，以便排解革兰氏阳性杆菌。结果报告8.2.5板菌落数，再乘以稀释倍数，即为每克(毫升)样品中大肠菌群数。例：10-41mL，在VRBA10010BGLB6100×6/10×10-4/g(mL)＝6.0×105/g(mL)附 A1月桂基硫酸盐胰蛋白(胨)(LST)肉汤(Trypticase)20g氯化钠5.0g乳糖5.0g磷酸氢二钾2.75g磷酸二氢钾2.75g月桂基硫酸钠0.1g蒸馏水1000.0mL20mm×150mm10mL。121℃15minpH6.8±0.2。A2煌绿乳糖胆盐(BGAB)肉汤蛋白胨 10.0g乳糖 10.0g胆粉(oxgall或oxbile)溶液 0.1％煌绿水溶液 13.3mL蒸馏水200mL(20.0g200mL，pH7.0～7.5)，975mL，pH7.40.1％煌绿13.3mL，1000mL，20mm×150mm10mL。121℃15minpH7.2±0.1。A3EC)20.0g3号胆盐或混合胆盐 1.5g乳糖 5.0g磷酸氢二钾 4.0g磷酸二氢钾 1.5g氯化钠 5.0g蒸馏水 1000.0mL。121℃15min，pH6.9±0.1。A4伊红美蓝琼脂(EMB)蛋白胨 乳糖 10.0g磷酸氢二钾 2.0g琼脂 15.0g伊红γ(水溶性) 美蓝 蒸馏水 1000.0mL100mL200mL，15minpH7.1±0.2。使用前将琼脂溶化，于100mL5mL20％乳糖水溶液、2mL2％伊红γ1.3mL0.5％的45～50℃倾注平皿。A5养分琼脂斜面牛肉膏 3.0g蛋白胨 5.0g琼脂 15.0g1000.0mL121℃高压灭菌15minpH7.3。灭菌后摆成斜面备用。A6色氨酸肉汤1000.0mL15min。pH6.9±0.2。A7MR-VP(胨)胨 7.0g葡萄糖 5.0g酸氢二钾(KHPO) 5.0g2 41000.0mL15min，pH6.9±0.2。A8Koser酸氢铵钠(NaNHHPO·4HO) 1.5g4 4 2磷酸氢二钾(KHPO)1.0g2 4酸镁(MgSO·7HO) 0.2g4 2椽酸钠(含2HO) 3.0g21000.0mL10mL，121℃15min。最终pH6.7±0.2。A9结晶紫中性红胆盐琼脂(VRBA)蛋白胨7.0g酵母膏3.0g乳糖10.0g氯化钠5.0g31.5g中性红0.03g结晶紫0.002g15～18g蒸馏水1000.0mL将上述成分溶于蒸馏水中，静置几分钟，充分搅拌，调至pH7.4±0.12min，将45～50℃3h。酸盐缓冲稀释液贮存液 2 4500mL175mLpH7.2。用蒸馏水加至1000mL稀释液 取贮存液1.25mL，，121℃15min。A11氯化钠 8.5g15min。A12色液：结晶紫 1.0g20.0mL1％80.0mL革兰氏碘液：碘 1.0g碘化钾2.0g300mL。沙黄复染液：沙黄0.25g90.0mL染色法将涂片在火焰上固定，滴加结晶紫染液，染1min，水洗。滴加革兰氏碘液，作用1min，水洗。滴加95％乙醇脱色约15～30s，直至染色液被洗掉，不要过分脱色，水洗。氏阴性菌呈红色。A13Kovacs对二甲氨基苯甲醛5.0g戊醇75.0mL 盐酸(浓)25.0mLA14甲基红0.1g500mL。A15Voges-Proskauer(V-P)试剂甲液α-萘酚 5.0g无水乙醇100.0mL 乙液阳性管数阳性管数氢氧化钾40.0g 附 录B1g阳性管数阳性管数0.10.010.0010.10.010.001000＜32009.10013201140026202200039203260103210150116.1211200129.22122702312213340206.2220210219.322128022122223502316223420309.4230290311323136032162324403319233531003.6300231017.233139102113026410315303951107331043111113117511215312120113193131601201132093121153211501222032221012324323290130163302401312033146013224332110013329333>11000.1，0.010.001g。3[0.1g(mL)、0.01g(mL)0.001g(mL)]，30.1