药物分析芳酸类药物的分析课件

第一节、典型药物的分类与性质第二节、鉴别试验第三节、特殊杂质检查第四节、含量测定内容第一节、典型药物的分类与性质第二节、鉴别试验第三节、特殊杂质1第一节典型药物的分类与性质一、苯甲酸类

典型药物（苯甲酸）COOH(Na)COOHNHCH3CH3（甲芬那酸）第一节典型药物的分类与性质一、苯甲酸类（苯甲酸）COOH2（丙磺舒）COOHSO2（CH3CH2CH2)2N主要性质 羧酸与苯环直接相连，具有较强酸性（用于含量测定）； 药物结构中的苯环及其取代基具有特征的紫外和红外吸收光谱（用于鉴别和含量测定）； 苯甲酸及其钠盐的中性溶液与FeCl3试剂反应，生成赭色沉淀； 含硫的丙磺舒受热可分解成亚硫酸盐。（丙磺舒）COOHSO2（CH3CH2CH2)2N主要性质3二、水杨酸类

典型药物COOHOH水杨酸COOHOCOCH3阿司匹林COONaOHNH2对氨基水杨酸钠二、水杨酸类COOHOH水杨酸COOHOCOCH3阿司匹林4双水杨酯COOHOOOH贝诺酯OCOCH3COONHCOCH3OHCOOHFF二氟尼柳双水杨酯COOHOOOH贝诺酯OCOCH3COONHCOCH5主要性质 本类药物的基本结构为邻羟基苯甲酸，能形成分子内氢键，使酸性增强（水杨酸的酸性比苯甲酸强），可用酸碱滴定法测定含量；

邻位羟基的存在使得本类药物在弱酸性溶液中可与三价铁离子生成紫色配合物； 水杨酸酯类结构易水解成游离水杨酸，游离水杨酸类受热易脱羧降解成酚类，故本类药物应检查游离水杨酸与酚类杂质。OHOHO主要性质OHOHO6三、其他芳酸类

典型药物氯贝丁酯ClOCCH3CH3COOC2H5CHCH2CHCOOHCH3H3CH3C布洛芬三、其他芳酸类氯贝丁酯ClOCCH3CH3COOC2H5C7主要性质 与苯甲酸和水杨酸类比较，布洛芬（苯乙酸衍生物）的酸性较弱，溶于中性乙醇后，可用氢氧化钠直接滴定。 氯贝丁酯（苯氧基丙酸酯衍生物）遇光不稳定，易水解，可用两步滴定法测定含量。 布洛芬和氯贝丁酯均具有特征的紫外和红外吸收光谱，可用于鉴别。主要性质8芳酸类药物的结构与性质比较结构共同点：苯环、羧基不同点：取代基不同（如酚羟基、芳伯氨基等）物理性质大多数为固体，具有一定的熔点；游离芳酸类药物几乎不溶于水，易溶于有机溶剂；芳酸碱金属盐及其它盐易溶于水，难溶于有机溶剂；芳酸类药物的结构与性质比较9芳酸类药物的结构与性质比较（续）化学性质芳酸具游离羧基，呈酸性，其pKa在3～6之间，属中等强度的酸或弱酸；-X、-NO2、-OH等吸电子取代基使酸性增强；-CH3、-NH2等斥电子取代基使酸性减弱；邻位取代>间位、对位取代，尤其是邻位取代酚羟基，形成分子内氢健，酸性大为增强。芳酸类药物的结构与性质比较（续）10芳酸类药物的结构与性质比较（续）化学性质（续）芳酸酯可水解利用其水解得到酸和醇的性质可进行鉴别；利用芳酸酯水解定量消耗氢氧化钠的性质，芳酸酯类药物可用水解后剩余滴定法测定含量；芳酸酯类药物还应检查因水解而引入的特殊杂质。芳酸类药物的结构与性质比较（续）11芳酸类药物的结构与性质比较（续）化学性质（续）芳酸碱金属盐易溶于水，水解，溶液呈弱碱性，可用双相滴定法或非水碱量法测定其含量。取代芳酸类药物可利用其取代基的性质进行鉴别和含量测定。具有酚羟基的药物可用FeCl3反应鉴别。具芳伯氨基的药物可用重氮化-偶合反应鉴别、亚硝酸钠滴定法测定含量。芳酸类药物的结构与性质比较（续）12第二节鉴别试验

一、与铁盐的反应

水杨酸及其盐类COOHOH6+4FeCl3COOO2Fe--3Fe+12HCl紫色pH=4~6具酚羟基或水解后产生酚羟基的药物有此反应第二节鉴别试验一、与铁盐的反应COOHOH6+4Fe13补充说明

阿斯匹林加水煮沸使水解后与FeCl3试液反应，呈紫堇色；二氟尼柳加乙醇溶解后与FeCl3反应，呈深紫色；对氨基水杨酸钠加稀盐酸后与FeCl3试液反应，呈紫红色；双水杨酯的稀溶液与FeCl3反应，呈紫色；贝诺酯加氢氧化钠试液煮沸水解后，加盐酸至微酸性后与FeCl3反应，呈紫堇色。强酸性溶液中配位化合物分解补充说明强酸性溶液中配位化合物分解14苯甲酸盐COONa7+3FeCl3+2OH-COO6Fe3(OH)2+7NaCl+2Cl-OOC赭色沉淀苯甲酸盐COONa7+3FeCl3+2OH-COO6F15丙磺舒

加少量NaOH试液使成钠盐溶解后（pH=5.0～6.0），与FeCl3试液反应，生成米黄色沉淀。COOSO2（CH3CH2CH2)2N3Fe丙磺舒COOSO2（CH3CH2CH2)2N3Fe16布洛芬

布洛芬的无水乙醇溶液，加高氯酸羟胺的无水乙醇试液及N,N′-双环己基羧二亚胺（DCC）的无水乙醇溶液，混合，在温水中加热20min冷却后，加高氯酸铁的无水乙醇溶液，呈紫色。紫色CONHFe/3OCHCH2CHCH3H3CH3C布洛芬紫色CONHFe/3OCHCH2CHCH3H3CH3C17氯贝丁酯 氯贝丁酯的乙醚溶液（1→10）数滴，加盐酸羟胺的乙醇饱和溶液与氢氧化钾的乙醇饱和溶液各2～3滴，水浴加热2min，冷却，加稀盐酸使成酸性，加1%FeCl3溶液1～2滴，显紫色。该反应用于羧酸及其酯类的鉴别CONHFe/3OClOCCH3CH3（异羟肟酸铁）氯贝丁酯该反应用于羧酸及其酯类的鉴别CONHFe/3OClO18二、重氮化-偶合反应

贝诺酯加酸水解后产生游离芳伯胺基结构，在酸性溶液中，与亚硝酸钠试液进行重氮化反应，再与碱性β-萘酚偶合生成橙红色沉淀。OCOCH3COONHCOCH3+3H2OOHCOOHNH2·HCl+HO+2CH3COOH二、重氮化-偶合反应OCOCH3COONHCOCH3+319NH2+NaNO2+2HClHON2+

Cl-+NaCl+2H2OHON2+

Cl-HOOH++NaOHN=NHO+NaCl+H2OHONH2+NaNO2+2HClHON2+Cl-+20三、氧化反应

甲芬那酸的硫酸溶液显黄色，并有绿色荧光呈深蓝色，随即变为棕绿色三、氧化反应甲芬那酸的硫酸溶液显黄色，并有绿色荧光呈深蓝色21四、水解反应

（可溶于醋酸铵试液）四、水解反应（可溶于醋酸铵试液）22五、分解产物的反应苯甲酸盐

含硫的药物苯甲酸苯甲酸钠¾®¾+Δ42SOH-Δ¾¾®¾¾®¾+24HNO32SOSONaNaOH3丙磺舒五、分解产物的反应含硫的药物苯甲酸苯甲酸钠¾®¾+Δ42SO23第三节特殊杂质检查

一、阿司匹林中特殊杂质的检查

合成工艺ONaONaCOONa¾®¾ΔCO2OHCOOH¾®¾H+OHCOOH¾®¾乙酰化OCOCH3COOH+（CH3CO)2O+CH3COOH第三节特殊杂质检查一、阿司匹林中特殊杂质的检查ONaO24检查溶液澄清度 未反应的酚类、及其他副反应生成的醋酸苯酯、水杨酸苯酯和乙酰水杨酸苯酯均不溶于碳酸钠试液，而阿司匹林溶于碳酸钠试液。OHOCOCH3（CH3CO)2O（醋酸苯酯）检查OHOCOCH3（CH3CO)2O（醋酸苯酯）25ΔCOOHOHOH+COOOH（水杨酸苯酯）ΔCOOHOCOCH3OH+COOOCOCH3（乙酰水杨酸苯酯）ΔCOOHOHOH+COOOH（水杨酸苯酯）ΔCOOHOCO26水杨酸的检查 水杨酸杂质来源：原料残存（生产过程中乙酰化不完全）水解产生（贮存过程中水解产生） 检查原理：水杨酸在弱酸性溶液中与Fe3+反应呈紫堇色阿司匹林结构中无游离酚羟基，无以上反应限量:原料：0.1%阿司匹林片：0.3%阿司匹林肠溶片：1.5%水杨酸的检查27易碳化物的检查 检查易被硫酸碳化呈色的低分子有机物质。 检查方法：取供试品0.5mg置于含硫酸（95.5%g/g）5ml的比色管振摇使溶解静置15min观察颜色对照液（比色用氯化钴液0.25ml，比色用重铬酸钾液0.25ml，比色用硫酸铜0.40ml，加水成5ml）与对照液比较颜色不得更深易碳化物的检查取供试品0.5mg置于含硫酸（95.5%g/28二、对氨基水杨酸钠中间氨基酚的检查

间氨基酚杂质来源原料残存（间氨基酚为原料）对氨基水杨酸在潮湿空气中，露置日光或遇热受潮时，易脱羧基，生成间氨基酚。COONaOHNH2-CO2H2OOHNH2二、对氨基水杨酸钠中间氨基酚的检查COONaOHNH2-C29双相滴定法原理：利用对氨基水杨酸钠不溶于乙醚，间氨基酚溶于乙醚的性质，使二者分离；在乙醚提取液中加适量水和指示剂（甲基橙），用盐酸滴定；控制盐酸滴定液体积以控制间氨基酚限量；生成的盐酸盐在乙醚中不溶，转溶于水相中。双相滴定法30离子对HPLC法（内标法）色谱条件填充剂：十八烷基硅烷键合硅胶流动相：

磷酸二氢钠液(0.05mol/L)-磷酸氢二钠(0.05mol/L)-甲醇(含氢氧化四丁基铵1.9g)(425:425:150)内标：磺胺溶液（5μg/ml）,用流动相配制。流速：1.5ml/min检测波长：254nm进样量：20μl离子对HPLC法（内标法）31离子对试剂和其他添加剂选用规则

样品中含有-COOH、-SO3H基团时，选用的离子对试剂应是带正电荷的有机胺盐，流动相通常使用甲醇-水；除离子对试剂外，一般还需加入磷酸盐缓冲液，以控制流动相的酸度。从而使这些酸性官能团获得解离；样品中含有-NH2、-NH-基团时，选用的离子对试剂应是烷基磺酸盐或硫酸盐；样品中同时含有-NH2、-COOH，-SO3H等不同性质的基团时，则规则①、②或③选用的离子对试剂和添加剂均为合理。离子对试剂和其他添加剂选用规则32三、二氟尼柳中有关物质的检查

二氟尼柳存在多条合成路线，产品中可能存在多种苯或联苯类合成中间体及副产物，结构和性质相差较大； 使用单一的正相或反相色谱法难以检出有关物质；

《中国药典》（2005）分别采用TLC（正相）和反相HPLC，以自身对照法检查有关物质A和B。三、二氟尼柳中有关物质的检查33有关物质A的检查（自身高低浓度对比法）：吸取5μl点样

精密量取适量加甲醇稀释成浓度为50μg/ml配制本品的甲醇溶液浓度约为10mg/ml对照液吸取5μl点样同一硅胶CF254薄层板以正己烷-二氧六环-冰醋酸（85:10:5）为展开剂，展开后，晾干，置于紫外灯(254nm)下检查有关物质A的检查（自身高低浓度对比法）：吸取5μl点样34供试品对照品判断:控制杂质斑点个数，控制杂质种类；供试品溶液所显杂质斑点不得深于对照溶液的主斑点（或荧光强度）。供试品对照品判断:35优点：以供试品的稀溶液作为对照液，不需要杂质对照品，简单、价廉，还可配成几种限量的对照溶液；缺点：不同物质，不同Rf值比较，准确度较差、直观性较差。优点：36杂质对照品法

判断： 供试品中所含杂质斑点不得超过相应的杂质对照斑点。

优点：

同一物质，同一Rf值比较，准确度高、直观性强。缺点：需要杂质对照品。供试品对照品杂质对照品法供试品对照品37有关物质B的检查

取有关物质A项下的供试品与对照液，照HPLC法测定。

填充剂：十八烷基硅烷键合硅胶

流动相：水-甲醇-乙腈-冰醋酸(55:23:30:2)

检测波长：254nm

进样量：供试品和对照品各20μl

判断： 供试品溶液的色谱图中的各杂质峰面积的和不得大于对照品溶液的主峰面积。有关物质B的检查38四、甲芬那酸中特殊杂质的检查

合成工艺（邻氯苯甲酸）CH3NH2H3CCOOHClCuCOOHNHCH3CH3+（2,3-二甲苯胺）（甲芬那酸）四、甲芬那酸中特殊杂质的检查（邻氯苯甲酸）CH3NH2H339

检查《中国药典》（2005）规定检查“铜”和“有关物质”。“铜”检查法采用原子吸收分光光度法测定，铜含量的限度：0.001%。供试品：加硫酸湿润炽灼至灰化完全取本品1.0g置于石英坩埚加0.1mol/L硝酸溶液溶解，定量转移至25ml容量瓶中，摇匀，即得检查加硫酸湿润取本品1.0g加0.1mo40加0.1mol/L硝酸溶液稀释至刻度，摇匀即得精密称取硫酸铜0.393g置于1000ml量瓶中加0.1mol/L硝酸溶液溶解并稀释至刻度，摇匀标准铜溶液：精密称取标准铜溶液1.0ml，置于25ml量瓶中精密量取10ml置于100ml量瓶中，加0.1mol/L硝酸溶液稀释至刻度，摇匀即得对照品溶液：测定法：

324nm处测定吸光度，A供试品≤A对照品加0.1mol/L硝酸溶液稀释至刻度，摇匀即得精密称取硫酸铜41有关物质检查法《中国药典》（2005）采用高效液相色谱法填充剂：十八烷基硅烷键合硅胶流动相：对照溶液：供试液：用流动相配制成每1ml中含1mg本品溶液用流动相配制成每1ml中含5μg本品溶液0.05mol/L磷酸二氢铵溶液-乙腈-四氢呋喃（40:46:14）有关物质检查法用流动相配制成每1ml中含1mg本品溶液用流动42检测波长：254nm进样量：10μl判断：供试品中如有杂质峰，单个杂质峰面积不得大于对照液主峰面积的1/5;各杂质峰面积的总和不得大于对照溶液主峰面积。检测波长：254nm43五、氯贝丁酯中特殊杂质的检查

合成工艺ClOH缩合，水解CH3COCH3,CHCl3,NaOH（对氯苯酚）（对氯苯氧异丁酸钠）ClOCCH3CH3COONa五、氯贝丁酯中特殊杂质的检查ClOH缩合，水解CH3COC44氯贝丁酯ClOCCH3CH3COOC2H5ClOCCH3CH3COONa酸化HClClOCCH3CH3COOH酯化CH3CH5OH,H2SO4（对氯苯氧异丁酸）氯贝丁酯ClOCCH3CH3COOC2H5ClOCCH3CH45

对氯酚的检查 对氯酚为起始原料，且氯贝丁酯可分解产生对氯酚，其毒性大。《中国药典》（2005）采用气相色谱法检查对氯酚。色谱柱：2m玻璃色谱柱；固定液：甲基硅橡胶（SE-30）；载气：氮气柱温：160℃检测器：氢火焰离子化检测器对照品溶液：0.0025%对氯酚的三氯甲烷溶液对氯酚的检查46供试品溶液：取本品10.0g，加氢氧化钠试液20ml振摇提取分取下层液，用水5ml振摇洗涤，留作挥发性物质检查水洗液并入碱性提取液用三氯甲烷洗涤2次后加稀盐酸使成酸性用三氯甲烷提取2次，每次5ml，合并提取液，并加三氯甲烷至10ml即得供试品中对氯酚峰面积不得大于对照品中对氯酚峰面积供试品溶液：取本品10.0g，加氢氧化钠试液20ml振摇提取47挥发性杂质的检查

《中国药典》（2005）采用气相色谱法检查在合成过程中引入的脂类与其他挥发性物质及残留有机溶剂。色谱条件：同对氯酚的检查供试品溶液：预试溶液：取对氯酚项下经碱液洗涤后的本品适量，经无水硫酸钠干燥即得。称取供试品适量，用三氯甲烷溶解制成每ml约含10mg的溶液，用于调节检测器灵敏度。供试品中各杂质峰面积的和，不得大于总峰面积的千分之五挥发性杂质的检查取对氯酚项下经碱液洗涤后的本品适量，经无水硫48第三节含量测定

一、酸碱滴定法

直接滴定

本类药物中的游离羧基的酸性（pKa3～6），可用碱滴定液直接滴定。COOHOCOCH3+NaOHCOONaOCOCH3+H2O（阿司匹林）第三节含量测定一、酸碱滴定法COOHOCOCH3+N49阿司匹林Ch.P（2005）取本品约0.4g，精密称定，加中性乙醇（对酚酞指示液显中性）20ml，溶解后，加酚酞指示液3滴，用氢氧化钠滴定液（0.1mo1/L）滴定。每lml的氢氧化钠滴定液（0.1mo1/L）相当于18.02mg的C9H8O4。例注：中性乙醇：溶解阿司匹林且防止酯键水解。“中性”是对中和法所用的指示剂而言；优点：简便、快速；阿司匹林Ch.P（2005）例注：50缺点：酯键水解干扰（不断搅拌、快速滴定）、酸性杂质干扰（如水杨酸）；适用范围：不能用于含水杨酸过高或制剂分析，只能用于合格原料药的含量测定；苯甲酸、丙磺舒、水杨酸、二氟尼柳、双水杨酸脂和布洛芬等的含量可采用直接滴定法测定；二氟尼柳：以甲醇-水为溶剂，酚红为指示剂；甲芬那酸：以无水中性乙醇为溶剂，以酚红为指示剂。缺点：酯键水解干扰（不断搅拌、快速滴定）、酸性杂质干扰（如水51水解后剩余滴定法

利用阿司匹林酯类结构在碱性溶液中易于水解的特点，加入定量过量的氢氧化钠滴定液，加热水解，剩余的碱滴定液用硫酸滴定液回滴。2NaOH（过量）＋H2SO4

＝Na2SO4＋2H2OCOOHOCOCH3+2NaOHCOONaOH+CH3COONa（阿司匹林）水解后剩余滴定法2NaOH（过量）＋H2SO4＝Na2S52阿司匹林USP（29）取本品约1.5g，精密称定,加入氢氧化钠滴定液（0.5mo1/L）50.0m1，混合，缓缓煮沸10min，放冷，加酚酞指示液，用硫酸滴定液（0.25mo1/L）滴定剩余的氢氧化钠，并将滴定结果用空白试验校正。每1ml的氢氧化钠滴定液（0.5mol/l）相当于45.04mg的C9H8O4。例注：优点：消除了酯键水解的干扰；缺点：酸性杂质干扰;阿司匹林USP（29）例注：53碱受热易吸收二氧化碳，生成碳酸盐；当用酸回滴定时，酸滴定液的消耗体积减少，致使结果偏高；需在相同条件下进行空白校正。阿司匹林与氢氧化钠反应的摩尔比为1:2。氢氧化钠滴定液（0.5mol/L）相对于阿司匹林的滴定度为：

T=0.5×1/2×180.16=45.04(mg/ml)W：阿司匹林样品称取量；F：硫酸滴定液浓度校正因素；V0、V：分别为空白试验与样品消耗硫酸滴定液的体积（ml）。碱受热易吸收二氧化碳，生成碳酸盐；当用酸回滴定时，酸滴定液的54两步滴定法阿司匹林片 片剂中加有少量酒石酸或枸櫞酸做稳定剂，制剂工艺过程可能产生水杨酸与醋酸，不能采用碱直接滴定法和水解后剩余滴定法，需采用两步法。第一步:中和两步滴定法55第二步:水解后剩余滴定

2NaOH（过量）＋H2SO4

＝Na2SO4＋2H2O第二步:水解后剩余滴定2NaOH（过量）＋H2SO4＝N56阿司匹林片取本品10片，精密称定，研细，精密称取适量（约相当于阿司匹林0.3g），置锥形瓶中，加中性乙醇（对酚酞指示液显中性）溶解后，振摇使阿司匹林溶解，加酚酞指示液3滴，滴加氢氧化钠滴定液(0.1mol/L)至溶液显粉红色，再精密加氢氧化钠滴定液(0.1mol/L)40m1，置水浴上加热15分钟并时时振摇，迅速放冷至室温，用硫酸滴定液(0.05mol/L)滴定，并将滴定的结果用空白试验校正。每lml的氢氧化钠滴定液(0.1mo1/L)相当于18.02mg的C9H8O4。例阿司匹林片例57注：消除了酸性杂质的干扰，降低了酯键水解的干扰;阿司匹林肠溶片和氯贝丁酯采用同法测定;氯贝丁酯：消除供试品中共存的酸性杂质;氢氧化钠与阿司匹林反应摩尔比为1:1；故氢氧化钠的滴定度为：T=0.1×1/1×180.16=18.02（mg/ml)片剂含量测定结果的计算

注：58二、亚硝酸钠滴定法

具芳伯氨基的药物（如氨基水杨酸钠），能在盐酸存在下与亚硝酸钠定量发生重氮化反应，生成重氮盐。可采用亚硝酸钠滴定法测定对氨基水杨酸钠及其制剂的含量。+2HClArNH2+NaNO2+NaCl+2H2OArCl-+NN二、亚硝酸钠滴定法+2HClArNH2+N59三、双相滴定法 芳酸碱金属盐（如苯甲酸钠）易溶于水，呈碱性，可用酸滴定液滴定； 滴定过程中析出的游离苯甲酸微溶于水，具有一定的酸性，使溶液浑浊且形成缓冲体系，滴定终点pH突跃不明显； 苯甲酸溶于有机溶剂，在水相中加入不相混溶的有机溶剂，可将滴定过程中产生的苯甲酸不断萃取出来，降低苯甲酸在水相的量，使终点易于判断。三、双相滴定法60苯甲酸钠取本品1.5g，精密称定，置分液漏斗中，加水25m1、乙醚50ml及甲基指示液2滴，用盐酸滴定液(0.5mo1/L)滴定，边滴边振摇，至水层显橙红色，分取水层，置具塞锥形瓶中，乙醚层用水5ml洗涤，洗液并入锥形瓶中,加乙醚20m1，继续用盐酸滴定液滴定，至水层显持续的橙红色。每1ml的盐酸滴定液(0.5mol/L)相当于72.06mg的C7H5NaO2。苯甲酸钠61注：优点：消除了反应产物的干扰;乙醚的作用：萃取反应生成的苯甲酸，使水相中的中和反应进行到底;滴定中要强力振摇。随着滴定不断进行，苯甲酸不断被萃取入有机溶剂层，使滴定反应完全，终点清晰。注：62四、紫外分光光度法直接分光光度法 贝诺酯的取代苯结构在乙醇溶液中，在240nm处有最大吸收，可用于含量测定。离子交换-紫外分光光度法

氯贝丁酯在226nm处有最大吸收，但对-氯酚等亦有吸收，干扰测定。 氯贝丁酯不发生电离，而对-氯酚等可发生酸性解离，采用阴离子交换色谱分离后，再用紫外-可见分光光度法测定。四、紫外分光光度法63柱分配色谱—紫外分光光度法

经柱色谱分离后，可同时定量测定阿司匹林胶囊中阿司匹林和水杨酸的含量水杨酸的限量测定

固定相：

洗脱液：冰醋酸-水饱和乙醚溶液(1→10)；

测定波长：306nm上层为硅藻土3g和新制FeCl3-尿素试剂2ml的混合物；下层为硅藻土1g和磷酸液（5mol/L）0.5ml的混合物。

柱分配色谱—紫外分光光度法上层为硅藻土3g和新制FeCl3-64注：水杨酸与三氯化铁-尿素生成紫色配位化合物，保留于硅藻土色谱柱上;用三氯甲烷洗脱时，高浓度的尿素使配位化合物移动较慢;以冰醋酸的乙醚溶液洗脱时，紫色配合物解离，水杨酸游离出来，继而被三氯甲烷洗脱。注：65注：在硅藻土-NaHCO3色谱柱中，阿司匹林及水杨酸成钠盐保留在柱上，先用三氯甲烷洗脱除去中性或碱性杂质。再用醋酸酸化，使阿司匹林游离，继而被三氯甲烷洗脱。阿司匹林含量测定

固定相：洗脱液：冰醋酸三氯甲烷(1→10)

测定波长：280nm硅藻土3g和新制NaHCO3(1→10)试剂2ml的混合物；注：阿司匹林含量测定硅藻土3g和新制NaHCO3(1→10)66五、高效液相色谱法

药物制剂中的杂质、辅料及稳定剂，常干扰主成分的含量测定。

《中国药典》（2005）采用HPLC测定阿司匹林肠溶胶囊、栓剂，布洛芬缓释胶囊、口服溶液、糖浆剂等的含量。

填充剂：十八烷基硅烷键硅胶 流动相：1%冰醋酸-甲醇（50:50）

测定波长：280nm五、高效液相色谱法67鉴别水杨酸及其盐类，最常用的试液是（）A.碘化钾B.碘化汞钾C.三氯化铁D.硫酸亚铁E.亚铁氰化钾自测题鉴别水杨酸及其盐类，最常用的试液是（）自测题68阿司匹林片片剂可采用的测定方法为（）A.非水滴定法B.水解后剩余滴定法C.两步滴定法D.柱色谱法E.双相滴定法

阿司匹林片片剂可采用的测定方法为（）69两步滴定法测定阿司匹林片的含量时，每1ml氢氧化钠溶液（0.1mol/L）相当于阿司匹林（分子量=180.16）的量是（）18.02mg180.2mg90.08mg45.04mg450.0mg两步滴定法测定阿司匹林片的含量时，每1ml氢氧化钠溶液（0.70反应摩尔比为1:1T：滴定度，每1ml滴定液相当于被测组分的mg数C：滴定液浓度，mol/LM：被测物的摩尔质量，g/molN：1mol样品消耗滴定液的摩尔数反应摩尔比为1:1T：滴定度，每1ml滴定液相当于被测组分的71采用双相滴定测定法苯甲酸钠的含量，其所用的溶剂体系为（）水-乙醇水-冰醋酸C.水-氯仿D.水-乙醚E.水-丙酮采用双相滴定测定法苯甲酸钠的含量，其所用的溶剂体系为（）72双相滴定法可适用的药物为（）A.阿司匹林B.对乙酰氨基酚C.水杨酸D.苯甲酸E.苯甲酸钠双相滴定法