高通量数据处理流程

数据处理流程计算机集群测序控制PC测序仪1.控制测序过程决定测序长度、填加试剂、控制温度、控制反应时间、拍照2.图像分析对测序仪拍照的图片进行图像分析，得到亮点的光强度和坐标3.basecalling由光强度得到碱基序列4.数据传输将basecalling结果（二进制文件bcl）传输到计算机集群的存储上5.数据处理将bcl文件转化为后续信息分析所使用的文本文件（fastq,qseq）6.index拆分7.数据质量分析8.数据备份9.后续信息分析......图像分析及basecalling基本原理1234CCCCGGGTTAAACycle1Cycle2Cycle3对A发出的光拍照对C发出的光拍照对G发出的光拍照对T发出的光拍照图像分析及basecalling基本原理1234TCCAATGCACGGCycle1Cycle2Cycle3由4个cluster得到4条序列：①ATA...②CCT...③GCG...④GAC...图吵像赞分晌析对啦每李个扁图阔片萌独鸦立榨的消处壳理图源像警锐记化对突图芦片均进撕行马快昏速诞傅研里习叶杨变当换历(驾F标F佩T白)存，躲在酬傅筹里访叶拾空吹间习乘悦以边滤文波称函高数堡后臭反材变境换识拦别斥c催l拳u女s抄t彻e低r菊/经亮垄点信侨噪属比摸(呈亮占度防/薄背纲景汇值窄)梁大杯于愁阈移值滴的较亮哄点蹦区瓦域计马算搜亮妖点愉光升强页度稳和隶位兼置浅坐委标在亮毕点塘区址域御，贷对功光肆强租度照进惹行晌二铺维译插肌值爽，跑求莲出寄最市大岔光粉强侍度居，罢以更及脊最毕大走光铁强旬度尖对蝇应撞的伴位照置枝坐炒标将鬼同坐一钻个仗t锡i瓣l透e忌的颈所蛙有讯图塑片敞中骗的另亮庆点答坐牺标锹对选齐夹重歇叠不奥同嚼图居片筒之帽间浮存航在膊偏委移取/姨拉镇伸塑/陪压肿缩供(叮o谜f篮f琴s适e搬t彻)系圈统爱、送稳豆定躺的毫：4碎种亿光帜折碑射诞率策不阻同就、谨滤币波榨片鸦不妻同书、扔光歼路凳不莫同冬，壳所随以裕造畜成东成称像丈的肠偏秩移渣/逢拉忙伸着/浑压投缩湖，匙可侵利坚用补c税r志o沾s队s萄t也a而l辫k道，辜计破算凭出柳偏凑移覆/屿拉五伸贩/怀压我缩宝的祖数黄值蹲(迎o塌f衣f膊s机e严t凯参鹿数眼)偶伤然弱、害随堤机铜的袍：f即l及o重w困c言e挤l图l降表匪面敌不港平葵、絮自册动觉调食整锻焦摊距量、忘机村械单移姨动厚不到够料精马确户、站随辈机西振巨动肃，范可胳利融用偷c更r辞o芦s识s欧t吊a认l避k扎解枕决C决r窄o街s港s芹t涨a屿l鸭kA追C弯光导谱减间勾有鸟交固叠符，搭G工T招光筹谱赚间尾有案交拜叠签，手所穿以赔：碱普基街A丸的爪图乡丰片糊中忠包秃含蹦C效发种出箱的致光碱送基锣C骗的礼图饭片箩中膏包总含域A拍发腾出恋的砖光碱晋基根T局的颜图电片渠中陷包放含列G宜发稍出顿的陆光不差利惑：铲不纽奉能氏直仰接笨比亭较带光线强抵度胁大互小唤而伙得苹到喜碱盖基有督利侍：宪利唱用维图僚片拆中贿共酸同培的净亮炮点锅，纤将或所槐有划图锡片肃对棍齐亭重掠叠伙，腿解自决互o怎f现f味s粗e树t绕问诱题ACAC光谱光谱滤波片图蜻像期分给析宿流测程T贼e麻m抽p辣l你a欠t雨e猛G佩e际n烦e吩r旗a妹t厚i衣o抓n利掩用桂A今C忙之荡间矮的杨c折r漆o撑s奴s筐t婚a亲l洲k形、踩G愤T附之授间嘴的泪c俭r窜o庆s身s温t胜a刚l胆k甜，劫将旗前恭2摩个挺c图y砖c挑l厌e叉的右图匙片廉，葬与肢第序一评个弄c晋y黎c碧l涛e较的钟A冻的叼图级片及对讲齐丹重悉叠扒，驻确更定毁所跳有闭c姥l印u富s顺t夜e多r袍的滨位雀置唉坐击标雅{懒(宫x际,载y神)幅}R莲e渐g蒜i悟s筐t用r疤a叙t胁i凶o崖n顿a纵n睡dI肆n驻t页e度n单s钱i间t概y匀E层x冬t然r例a拿c茧t森i视o粮n对疏于锐每叛一跟个饼c推y谊c饭l央e投：撕将挂4勤张勤图唇片难(败A露C践G白T境)批中闭的寇所皱有驰亮毕点伞与及c蹦l寺u炼s仙t晃e浪r胡坐村标腰{大(酷x强,乐y盐)涛}晓对尤应绸，佩计碑算绿每始个尿c起l德u符s席t翁e搜r足的纵4祖种鬼光彻强仔度对埋每算个牺图庭片含独炎立霜的厅处脖理图静像渣锐动化料、甜识豪别安c爱l他u蔽s骑t那e御r昏/优亮校点吃、街计思算墙亮惊点庄光麦强蛇度别和尝位赔置唤坐迁标T俩e贯m旷p加l助a玩t熟e赠G橡e炼n根e胆r李a枯t会i妈o假n利组用概A塘C更之葱间瘦的趋c愉r这o厚s抚s陷t泡a扔l等k先、失G佣T男之妨间痒的额c炉r握o传s虽s番t探a汤l杆k骄，腐将努前拾2逢个辟c耐y庆c京l末e仁的谁图未片兰，鞭与场第凉一桶个巾c酱y毕c顷l王e召的悦A咸的砖图央片叶对忌齐加重号叠海，乌确溜定系所和有艘c奏l群u职s碧t碍e灯r谷的扒位辟置阿坐植标互{愤(亚x掩,良y仔)坝}ACGTAGTCCycle1Cycle21243ACycle1ACycle1CCycle1ACCACCycle2ACycle2CCycle1ACACAC123GTCycle2GCycle2TCycle1ACGTACGTCycle1GCycle1TGT12431243图臂像部分争析芹结维果Cluster坐标Cycle1Cycle2Cycle3......(1053,1543)A1000A500A23......C800C900C26......G20G-18G500......T24T-12T300......(1923,1723)A-13A1000A33......C-12C800C24......G40G25G500......T700T20T300......(1032,1231)A500A50A1000......C900C40C800......G26G500G-20......T32T300T-20....................................Crosstalk固有发光能力不同，需要归一化B谱a安s挥e牙c趴a鹅l烤l靠i极n隔gC松r逼o吊s傍s厚t叛a旧l衰k伴校愚正4手种皱光嫩强伪度待归思一亭化（社用忍D逢N免A康样华品能计差算社参爷数断）P穿h各a计s闷i芒n隔g尖/假P耻r浅e凯p运h土a馋s题i壳n般g校书正（是用馒D赵N轮A极样彩品帮计情算战参述数就）对朵于钻每摩个屡c抱l滚u曲s惭t鼠e比r彼：在柿每确个步c渡y牧c种l称e返中劣，鬼比适较剑4您种本光传强师度疲，倾光摧强揉度翅最映大善的煎就只是购当甘前卷c轨y效c盈l值e炸测存到培的黎碱烛基导，亡各斜c愤y誉c骗l虏e努测飞到粮的啊碱盈基腿连苦起辉来拣组王成问这擦个嘱c卖l密u下s限t址e过r俊的骡碱愚基篮序逗列贪；计枯算画每施个绒碱惕基昨的述质体量腿值4偿种筹光仅强绿度贿归单一仍化2种光强度分布2种光强度分布ACGTp查h洒a矩s阴i侮n顾gS捆e诞q折u倦e览n朋c规i丛n垒g流p合r木i遮m掉e后rp经r次e躁p螺h团a色s讨i漏n漂gB讨a声s革e无c答a大l慰l究i筑n茄g锯结馅果扁：束q鹊s散e腊q炒文暖件每隶一则行预表啦示乐一荷条饶r扔e讯a锦d译s腊(中一猪个扁c列l殖u散s悉t眼e竿r步)每刃行俘有价1呆1研列成，并t纱a燥b匀分寇隔钞：机熔器较编哪号允、僚r涂u秧n散序置号愧、妖L躲a挖n坟e龟号所、决T资i摊l糟e址号逝、恼X谷坐欣标罗、斥Y车坐弯标米、i泥n黎d舒e杀x策标民志寄、轨r母e钻a从d弃1填/雕r缺e飞a贫d蛮2吩标阿志溉、狠碱读基年序职列闸、为质渠量歉序产列喊、是产否市通喝过便默遍认挺的乎质冰量避筛旷选亿标船准S浴i苗n疏g完l闸e扎-迈e删n计d枪(表S裳E坟)讲测浮序怀：1春个进q壮s预e闸q林文朗件P京a电i斤r歌-顷e马n糖d沸(盈P裙E貌)伪测幕序粗：2钩个音q号s饱e沉q就文悄件询分嗽别记存键放仆r循e故a校d句1鱼和叛r唯e证a窝d帜2考的仇数琴据居；2化个爱文碍件属的经同盆一私行尖属谜于足同辣一电个钓c勿l邻u吸s俩t朋e抵r每蹦条盖序羡列裤(锻r叹e榜a狡d相s召)拖长挖度休=闪上老机搂测视序栽循漏环步(浆c证y哪c焰l神e币)搁数衰量朽；测客序赌c筛y奖c陵l蚕e台数测量呀受怒测唯序乱试木剂量盒吐的誉试旨剂许量金限呀制浇，对慎于孕G令A朽有梦：鲜3长6摄S接E察、剥3侍6瞎+馆7垂/忧8侍S姓E辈i险n喇d窝e铁x暂、责4门5院P潜E临、凶3劈燕6复+称7器+膊4衰5网P婆E贯i螺n朗d侨e含x殊、7惨6缺P轿E糟、航7臭4妥+猛7呈+初7交6脊P集E尝i订n瓜d施e钩x香、醉7霞3腰+弊8夕+黄7升6耍P室E扫i槽n豪d恩e沉x据、1市0鉴1腰P枣E隐、协1饿0钉1驾+嘱7获/挑8院+熟1饱0率1爸P胖E唱i灰n帖d两e昌x钥等对醋于刘H概i度s沫e甲q踩：番9舞1晒P候E励、滑9扎1患+线8+胜9海1P访E舒i务n充d翅e患x霞、1宽0榆1衣P贺E从、屠1蒙0友1肃+牺8徒+够1完0府1巴P含E顾i痰n迹d仰e险xB左a铅s已e椒c培a皂l国l损i剃n拼g判结拐果站：峰q刑s舟e像q骡文狗件列意义表示法1机器编号2run序号整数3Lane号整数1到84Tile号整数5X坐标整数6Y坐标整数7index标志index序列或者“0”8read1/read2标志"1"表示read1；"2"表示read29碱基序列大写ACGT和"."：ACCCAACTCATCTGAAACA10质量序列每个碱基有一个质量值，用字符表示：

字符的ASCII码值-64=质量值bbbc`bb_bb_aSa`V]`\11是否通过默认的质量筛选标准1表示通过；0表示不通过，质量差f篮a挤s败t蜘q盈文瓜件每艇4着行转表跨示包一热条沈r裹e谈a坑d债s卵(闭一瞧个顿c恋l拔u动s穗t食e咳r辞)第记一誓行底：顾@泻序量列歉I抢D患，阵包煮含齿i球n德d僻e渴x烧序捎列梅及法r能e沈a冤d旱1寺或练r牲e籍a涝d容2糕标钥志馆：第餐二涝行孝：匠碱晓基少序砌列旧，透大述写魂“奇A竞C爹G什T垦N焰”第撒三裕行想：蔬“唯+凯”赛，默省卵略功了舰序弓列欣I僵D第艺四刮行宣：窝质忙量路值暖序蛾列锹：芽字搞符芒的庆A陵S催C将I饮I奔码训值氏-唱6亦4治=阻质津量首值S还i努n宽g药l怨e吐-皂e郑n宵d天(颠S拍E证)绍测刊序萍：需1察个亩f沫a汁s俯t松q冷文锐件P借a懂i爸r羞-位e包n疲d堵(劳P忽E碗)税测海序速：乔2堂个论f叔a霜s解t访q党文乒件大分弯别驶存惠放益r纱e础a市d弃1打和棍r克e熄a缺d生2直的设数督据杆；R坏e扬a村d暴1皇的嗓f遣a塘s伍t俗q傍文麻件灵*纽奉1钱.笋f诱q后中父第首一聋条坝r革e棋a务d盏s阶：@膏F堆C患6兄1要F芝L陶8信A险A血X饺X寇:放1兼:西1乳7顾:顽1恶0山1跌2鸭:京1蔬9暂2妨0倡0深#邮G势C先C视A宝A穷T株/杏1C寄C串A给C纸T饺G思T唐C重A假T抱G颠T求G吧A寨A陪C猪A冈T丽C庆A袄C池A脂G钳A腹G鼠A仅C供A涨T何T方T利C恼T孔T岁G津A+b芦b学b受b房诚b距b烧b剩b哨b岂b怜a鉴b末b刷b帝b雨b胶b信b俱b睁b疑b票b铲b院b皮b裕a伟a岭a蠢a送a昼a椒a销a早a泡_旷\R芒e绪a络d舒2嫌的肥f凉a秤s花t晓q未文绢件垦*乎2猜.道f茎q串中泻第夸一鹅条顺r尚e岭a劫d卫s宿：@腾F饿C阶6龄1霉F茂L霸8港A伴A滔X镜X浇:愁1桂:县1缸7牺:羞1尚0喷1游2旅:尊1粮9蜘2哲0滋0答#营G厨C绝C欧A汇A絮T援/活2A剩A幸A唐A维T霞T短A瓦G漠C耻C沉A盛G丘G美C馆A岁A采T度G次G乳T定G席G域T漏G携C搅A币T君G射C钱C励T货T旨T品A移A燥T赠C驱C倚C食A佩G讯C逝T续A+`冶Q录V细V戏V码`界`辰V悠`鲁`直`尊`惰`绕`游Y拒V逼Y悟W后W军Y访P球W索Y枪Y斤T约Y瓣Y鞭W罩U框Y院Y狂Y加V因V氧`落`俗`合`舞`哈`这`另W广W错`质猪量歇值@关F而C辜6咸1绞F尚L繁8屈A肢A冷X河X星:地1忠:格1利7雕:扮1岸0额1即2窜:喂1垦9幼2爬0悲0处#风G堆C赚C慌A禾A初T致/架1C年C集A喷C揪T言G灭T黄C码A非T册G存T浮G秃A芽A雅C熄A猎T桑C戒A倒C菜A君G自A敲G葬A谋C蹲A协T旅T系T倡C央T枝T腿G产A+b串b军b菜b矮b堂b争b询b拳b夹b招a隆b推b详b斑b望b扩b宾b鲜b蹲b形b摄b吊b隆b书b和a秃a忆a言a寄a孤a骆a僻a池a兔_岛\表亦示酸方仁法拾I宾l典l姐u舰m慢i窑n戏a谷：甜字疾符旬的栏A连S层C嗽I关I卸值椅-饶6踢4番=抚质碰量列值(究S番a采n疑g闹e你r傅：打字糠符扔的勾A垫S曾C矩I潮I曾值娇-享3社3陕=贵质筒量泼值扁)范尤围之G贵A性I溉l悄l辰u绸m亿i锦n折a谜1炭.爪3村+丘(迎0身9总年杜3历月柱之回后罚)生:晋[爷2呼,蚁3菌5俯]需[射B县,侨c逗]G睁A季I庭l市l训u棍m神i强n抵a柴1后.熊0帽(船0腐9影年趴3蛾月凤之抛前部)闯:御[帮-坚5京,膀4揪0搏]趋[杀;乒,握h石]H踪蝶i虾s各e呈q扬:殃[察2总:么3祖8奥]铜[简B滩,览f扮]质闷量孤值值与遭错池误遍率苏理名论寒关客系写：盛Q哀=稳-否1届0专l腔o偷g狱1梅0摄(携e剑)质坦量螺值组计捕算召方它法雅：宇根晒据步光概强赵信便号予信激噪捉比样、环光羞强刺度拌衰搁减备、努G在C烟含肥量欺等苍参飘数省，低计当算牛质抱量祝值f坡a徒s粥t完q井文尖件f架a验s员t种q诊文且件每免条鬼序夏列多(救r愚e础a棉d茫s宝)期长剧度r响e香a陡d浮1碌和球r尾e户a帖d蒜2赌分涨别啄去裙除案了坛最杠后恳一崇个帜碱猎基认，锡即丈：3景6突S妹E牺有诱效狗长半度挎为欧3拨51惰0方1茅P户E石有业效爱长逗度虚为逢1劈燕0扁0玩(继r拿e辫a季d约1虹)裕+沿1证0藏0盯(驴r当e冤a缩慧d划2坡)1畅0密1航+劈燕8沈+坊1鞠0膀1芬P痰E挣i扩n饱d女e燃x甜有贩效呼长神度雄为侨1行0嚼0杂(伙r条e能a唐d奋1裤)含+急1掌0撕0碰(挽r喉e柜a尿d侄2费)R坛e剧a桑d焦1软中类所灿有痛r弄e丛a窝d狂s至长犯度克相管同易，妙R尸e身a馆d欧2获中别所涌有畅r厉e话a熊d皆s树长真度掉相拌同扛，但服是驳R雕e先a童d底1艰和欠R条e骡a浆d掌2士长荐度我可掉以今不降相捎同风，碧取威决君于毅上溉机呈测吊序诸循摔环抓(惨c兄y况c阳l缸e盈)皮数系量质葱量滴筛早选赌(泊P誓F筒)俯：I河l历l欢u凉m财i阵n挎a哪标叶准脉流爪程翠输竭出尝的脾f翼a针s惠t疾q雀文汗件育，舌去临除毯了齿q颂s绪e泳q启文粱件音中刷没输有佩通截过慢默血认乒质做量迫筛邪选咳标午准办的也低锅质跨量型序萄列陈(筑r短e男a紧d山s愚)G哀A剩正轰常雅P脖F睬比窝例敢：往D揭N翁A缴8坊0控~睡9尾0践%薯，跑R卡N期A殿7循0每~得8冷5间%每荐个础L踩a砖n罚e型的判正床常拖产搜量吸范则围疏：G竟A允2锣0罢~书3窗0爆M拆P掉F久r完e陡a即d附s哥—甜R算e河a个d辅1胞和泛R芝e境a仆d径2姜各粱有朱2撑0适~摸3挎0鸦MH热i爬s领e坐q旬6勿0闯~牵8夜0裹M活P胀F讨r持e伶a谁d墨s优—耀R渗e法a孕d材1租和沙R型e练a液d只2辰各昨有零6播0甘~愧8蜓0石M碱辣基扎总驶产痰量=约R尤e阿a撞d温1款的虚产薄量撇+的R券e享a匪d份2翠的预产信量=孟r和e上a木d烤s比数鬼量虏＊尖(设R赴e桂a姐d宁1挨的奥长伐度抹+矛R泡e供a叠d舍2限的贺长适度产)f休a骗s撇t屈q险文笋件津产俘量为（秃G零A控）样品类型上机测序类型平均产量(Gbp/Lane)正常产量(Mreads/Lane)SmallRNA36SE0.7020（2个样品混合上1个lane）表达谱36SE0.7020（4个样品混合上1个lane）Chip-seq36SE0.8825MeDIP-seq45PE2.2025转录组76PE3.8125（2个样品混合上1个lane）Denovo101PE6.0030Denovo76PE4.5030Denovo45PE2.6430外显子76PE4.5030重测序101PE6.0030重测序76PE4.5030重测序45PE2.6430Meta76PE4.5030甲基化76PE3.7525甲基化45PE2.2025f饱a杯s偿t姨q姨文嫌件忍产权量黄（向H将i振s迎e法q想v忠s百G库A蛙）GAHiSeqFC面积mm^2/FC5101440tile面积mm^2/tile0.531255.625tile/Lane12032rawcluster(万/tile)28250270310350PF85%87%87%87%85%PFcluster(万/tile)23.8218235270298cluterK/mm^2527444480551622readsM/Lane28.669.675.286.395.2101PEGb/Lane5.713.915.017.319.091PEGb/Lane12.513.515.517.1文巨库痒质惧控勉问胸题如1与：衡P煤a盘i误r贯-谁e亡n磨d初关碰系8原0误0板b虾p和及渐以鞭下蹦文叠库5'3'3'5'PCRprimer1反向互补(包含5'adapter反向互补)PCRprimer1(包含5'adapter)PCRprimer2(包含3'adapter反向互补)PCRprimer2反向互补(包含3'adapter)Read1测序Read2测序5'5'3'3'与磨参级考谷序俘列贝比急较或搞者惕：总德之文，梢R午e亭a钻d构1悼，明R饭e汇a足d踏2咽与讲参好考斗序扎列余比抄对狸结回果膀：一踪蝶正饿(梳F写)答一托反项(册R圈)哑，台且糠F津的六位痕点润坐宽标馒小帝于弊R附的隔位荷点途坐齿标R出e斗a左d祸1Read2参考序列正向5'5'3'3'参考序列反向互补Read2Read1参考序列正向5'5'3'3'参考序列反向互补FR参考序列正向5'5'3'3'参考序列反向互补总厨之露，骑R点e她a醒d史1递，肿R乖e竹a队d青2缝于仗参夫考袜序姜列火比川对缝结迁果域：一叹正培(予F慕)桨一抽反漂(互R奥)酒，依且挠F猎的绿位建点渣坐辫标崇小输于肉R酱的肤位虚点争坐谜标文雪库缴插筹入伤片弄段垃长少度FR参考序列正向5'5'3'3'参考序列反向互补Insert-sizeInsert-size5'PCRprimer1PCRprimer23'3'5'文库分子长度2爪1春0轧0泳检照测完报刻告文文库淘长双度惹分能布与丝式参插考吧序息列定比论对吹得把到i澡n烫s盲e灿r掩t焦-察s沉i厚z危e闭分央布正馆常兔i怖n牙s戏e列r圣t魂-事s痒i例z驱e辣分能布基哪因猎组辜D提N斗A外父显魔子P游C置R宿-旧f闷r雪e暖e搬文菠库异蓝常稀i厨n丢s鉴e昆r盗t筒-渗s从i末z馒e名分伟布2芬K痰及彻以段上垦文下库文军库斜质狱控淋问恋题草1驰：爆P叹a造i览r笨-变e趟n低d烫关梅系与娃参君考稿序压列用比绍较或启者奶：总赛之诊，蚕R璃e白a滩d凳1纹，食R瓶e袖a吉d枕2毅于矮参筝考侦序嘴列渡比厕对符结浓果奏：一层正爽(姻F莲)河一献反腔(筛R走)伴，粪且办F磨的倍位呈点愁坐宣标界大踪蝶于芦R杨的训位幼点挡坐组标Read1Read2参考序列正向5'5'3'3'参考序列反向互补Read2Read1参考序列正向5'5'3'3'参考序列反向互补FR参考序列正向5'5'3'3'参考序列反向互补正设常桂i皮n岂s果e超r待t室-穷s绵i盼z酒e让分痰布2故K5你~棵6凯KP状C溪R乔-蚀f盖r蜻e断e播文锁库1级0扫K异缺常学i贺n容s浆e滴r掌t护-腔s执i蜘z滥e源分档布文锤库烈问供题迫2呀：克a铜d蚕a回p筛t百e痕r桶污陈染空计载刃：a因d言a距p锤t钱e烘r缓与贞a弹d催a泽p你t绸e盛r东直喷接封连筹接袄，血中屈间舅没嘱有枝插削入部片汽段陡，附导筒致恋r姐e钓a州d午1围测碍到尺3惯'午a爽d与a很p毅t肥e丈r牢，担r慕e泼a增d络2演测督到界5作'拢a佩d怕a躺p岭t局e渡r察的秃反擦向意互莫补r认e禾a烛d溪s啊尾击部救测庆到这a痒d却a骨p洒t誉e眼r插规入块片霜段即过佩短插孩入钓片季段览长耗度咸小渐于窗上嫂机垒测衣序辽循巡寿环观(倾c萄y跃c攀l厚e忽)值数董，筹导谁致雁r截e片a丸d葱1笛尾即部男测豪到杂3首'惊a血d纲a醒p壁t盐e金r夹，粘r阳e膜a僻d昌2铲尾析部脆测宿到亦5佛'州a援d虽a雪p球t涛e肃r痒的示反而向伶互裹补5'3'3'5'PCRprimer1反向互补(包含5'adapter反向互补)PCRprimer1(包含5'adapter)PCRprimer2(包含3'adapter反向互补)PCRprimer2反向互补(包含3'adapter)a荒d疲a蓝p稍t侄e苍r仆空徒载漂较束多导朝致咸碱尤基秋含谅量王波甜动客靠户帅P仪C桐R投引绢物慈污锅染导册致漂碱乐基宜含衔量揉波楚动文插库批质填控袄问钩题棕3旦：棵文朴库煌随弯机壤性G堡C源含躲量红偏抹差俭：实词验找技忧术桨（惩打检断蛇、责P截C鹿R表、踪蝶测冶序野）本股身特闭点傻，炎导绳致掘高汪G边C滥和挣低给G记C姓区义域猾测叼序挖覆拦盖陵度亡偏且低纯，杂甚耐至工某型些线区蚀域痰覆抖盖晴不舍到透；P衣C魔R她-淘f陪r挪e奥e归建壮库阴技泰术勇可廉减破少闭P够C软R呼带变来塑的奏随哗机凶性践问谁题d票u醉p卷l旦i讯c见a之t饿i扔o毁nP萌C椒R纯扩阁增言出庄很水多枝一完模姑一丘样残的违母映版挂分未子尾，灯测押序霉结跑果投中份很咏多孔条插r昂e喝a俗d按s战是孕一贩样加的视；基村因缓组扣自驱身宽重蔑复为序抽列粗含围量录高套导忘致缩慧d骡u爱p蛋l拳i沈c腾a恼t痒i送o只n甲偏词高蛋；数败据延量铺越天大卧，村d款u桑p命l夕i垃c扫a刑t寒i袭o朽n徒比离例舞越袄高文型库响质虚控法问栗题井4搞：育其种它洪物毁种眉、谊样闷品津污颈染测吊序租质歼控真问慈题r拣a捕w续C辜l散u陈s夺t刷e牢r薯密割度正饱常照r刑a课w蔬C抓l斑u偶s煌t样e帝r扁密殃度广：2柱0兽~祝3多0附万躲/很G裁A在t污i章l要e展，前2队0娘0漫~命3右5降0虹万劣/桌H缝i钞S扇e松q够t炒i忧l拆eC央l疯u确s切t会e东r滨制陷备塞时载，霞控继制责文析库困浓改度银，喇达场到饰适淹当出的萄r场a千w四C谁l秘u镜s羽t猎e液r按密而度密工度减过剪低浓—缩慧—德—勿—圈产购量驱低追；客密掏度千过忆高滋—状—淹—蹄—留质吨量笛差样欧品鹅差裹异培：孟2苍0汪0岭小持片祥段升能凶够抵容亲忍吸的难密职度寨较奴高邻，店8灿0慨0楚b饭p浪片跨段陪