广西菲牛蛭提取物抗动物血栓形成的作用

广西菲牛蛭提取物抗动物血栓形用损广西菲牛蛭唾液腺分泌物亦富含菲蛭素纤溶酶透明酶、血管扩张剂等多种肽类物质实验室采用离子和凝胶等方法从广西菲牛蛭中分离纯化出富含菲牛蛭素提取物并利用该提取物研物血栓效应，以期开发新型血栓生物制剂。1材料与方法1.1药物：菲牛蛭提取(100ATU／m)，。1.2动物：l.82.5gD重200300g兼用，均为清洁级西医科大学实验动物中心提供。l.3试剂和：按Chandler氏体外血栓形成装置蠕动泵改装的泵轴装一玻璃圆盘，有内径4mil、长250mill径38mm的聚氯乙烯管环，固定器置于自动控温培养箱中。l.4实验方法l.4.1家兔体外栓形成实验：取家兔32为4组1妥钠(30mg／k)血l中各给药(1.50.75、5U个剂量组)在管中注入2l菲牛蛭提取物对照组注人体积生理盐水Chandler氏法使血液在37℃条件下以16rrnin的速度在体外血栓形成仪上旋转10min，制备血栓。用滤纸吸干血栓水分，称栓湿重，湿血栓自然风干6h，为干血栓。l.4.2大鼠血栓形成实验：以60ATU／kg剂量菲牛蛭提取物股静脉注SD大鼠，分别于给药前、给药510、15min从腹主动脉抽血1ml，按上述Chandler氏改良备血栓，观察水对血栓形成的抑用。1.4.3大鼠静脉栓形成实验：采用Reyers法改良制备大鼠静脉模型取大鼠10只随机分成2(水蛭素提物60ATU／kg组和生理盐水对照)组5腹射1%戊巴比妥钠(30mg／k)麻醉后，开腹分离下腔静脉，于左肾下方用线结扎给药组由静脉注射水蛭素对照组给予等量生理盐水20min于结扎处下方2cm血阻断血流纵剖开下腔静脉取出血栓，称湿重干6h称干重。1.4.4家兔动脉形成实验：采用Teruhiko法制备家兔动脉血栓模，取家兔6只，注射1%戊巴比妥钠(30mg／k)麻醉，，在m的聚乙烯管中放一根预先称重的4号手术线3.8的枸橼酸钠浸润管壁后左颈动脉和右颈静脉之术后开放血流后15min，取出手术线称重减去原线重量即为药前血栓湿重注射菲牛蛭提取物，于给药后153045、60min分别测定聚乙烯管术线重量，减去原，即得药后不同时段的血栓湿重，风干6h，称血栓干重并计算制率[抑制率=(对照组血栓重-给药组血栓重量)／对照组血栓重量×100]。1.4.5统计学处：以(x±s)表。2结果2.1菲牛蛭提物对家兔体外形成的影响：大中剂量组与对照组相比菲牛蛭提物对家兔体外血栓形成(P<0.524.～100%小剂量组照组相比差异无学意义(P>0.05)见1。表1菲牛蛭提取物对家兔体外血栓形成的影响(x±s，n=8)组别 剂量 重 湿重率 重 干重率TAU（g）%)/g)()对组 3.±5.7 71±1剂组1.5 0±0** 10 0±* 10剂组075剂组05

5±.7* 3.66±.0 .2

601±1* 23.7±2.9 56与组*P1*P522菲牛蛭提取物对大白鼠栓形成的影响：与对照组比较，给药组药5min对大白鼠半体内血成影响不大(P>0.05)后1015min对大白鼠半体内血成影响差异有统计学意义(P<0.05，血栓的湿重明显减小或完全消(表2)。表2菲牛蛭提取物对大鼠血栓形成的影响(x±s，n=5)组别 量(AUk) 后栓重/g）5n 1in 1in对组 -- 1.±304给药组 60 1.±3.95

1.8±37176±2.*

1.22.80**与组*P1*.523菲牛蛭提取物对大鼠静血栓形成的影响(表3)：表3菲牛蛭提取物对大鼠静脉血栓形成的影响(x±s，n=5)组别 量 栓重 重 血栓率（ATUkg） （mg）（m/mg）)对组-- 72±37药组 60 ±**

26±16 00±** 0与组*P01,P05表3可见大白鼠静注菲牛蛭提取60ATU／kg后大鼠静脉血栓形成率为0，血栓干湿重为0，与对照组比较差异有统计学意义(P<0.01)。2.4菲牛蛭提取物对家兔动脉血栓的溶栓效应(表4、5)。表4菲牛蛭提取物对家兔动脉血栓湿重的影响(x±s，n=6)剂量 前A/g/g)60 3.±679抑率 --

1in2.9±6*39

后3in.647*40

4in1.88±.*33

6in22±9417*.5表5菲牛蛭提取物对家兔动脉血栓干重的影响(x±s，n=5)剂量 前 mg）A/g (m)60 7.1±.7抑制率

1in98±1.536

3in.6.*44

4in48±0.0*39

6in5±16311*.5由以上结果表明60ATU／kg菲牛蛭提取物对大鼠静脉血栓形成有完全抑制为高剂量组，而对于家兔动栓形成抑制率在3O%4O%兔动脉血大鼠静脉血栓重且未见异常反应血。3讨论血栓性疾病是一种严重威胁人类健康的疾病探索预防和治疗血栓性疾病的药物显得十分重要小板功能抑剂和抗凝剂是抗栓治疗的有效办法肝素和华法林在抗凝治疗中已应用了数十年前仍是临床上治疗各种血栓栓塞物但由于这两药物仍有许多局据报道3%的病人使用肝素5d后会出由肝素引起血导血管内血栓形成的因素有很多种但因素是血液血小板黏附和聚集静脉血栓形成主要由于血液凝固动脉血栓形成则主要是血小板在动脉中黏附和聚集小板聚集性过高使心血病发展的重要因素凝血酶在凝血过程中起着至关作用使纤维蛋白原变维蛋白最终使凝块形成凝血酶也是引起血小板的最主要激活剂之一凝血酶在血液凝固过程及血小板激活过程中具有双重作用，对凝血酶抑制剂特别受到重视。抑制血栓的形成一般有3条途径：一是促进纤溶系统对纤维蛋白原或纤维蛋白的降解是抑制功能则是抑制板的聚集、的凝血酶抑制剂对各种血栓性疾病效水蛭素作用机制是它与凝血酶按1:1比例非共价结合形成一种稳定的物，抑制了凝血酶的水蛭素在常温干燥状态下比较稳定其作用不依赖于AT—Ⅲ等血浆辅助因子其抑制形成的浓度远小于其引