环境卫生学及管理监测课件

2023/7/301医院消毒效果灭菌监测2023/7/302主要内容

一、空气消毒效果监测二、手消毒效果监测三、物品和环境表面消毒效果监测四、使用中消毒液染菌量测定五、无菌医疗用品采样及检查方法六、灭菌质量的监测七、医院消毒、灭菌、环境卫生学监测报告单

2023/7/303医院消毒卫生标准

GB15982—2012

2012年11月1日实施是指不同对象经消毒与灭菌处理后，允许残留的微生物最高限量，并要求不得检出乙型溶血性链球菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌及其他致病菌。一般监测原则是按国家标准执行，标本采集后应尽快进行监测，送检时间不得超过4小时；若样品保存在0-4度条件下，送检时间不得超过24小时。2023/7/304一、空气消毒效果监测

非洁净区域（不属于正负压状态）空气消毒效果监测：（一）采样时间：在消毒处理后与进行医疗活动前进行采样。（二）采样高度:应设在距地面（垂直）80—150cm高度范围内。（三）采样方法：根据其采样原理分：平板暴露法和微生物采样器法。2023/7/305

1、平板暴露法：布点方法（1）室内面积≤30㎡，设置内、中、外对角线3个点，内、外布点部位距墙壁1m处，（一条对角线上取3个点即中心一点、两端距墙壁1m处各取一个点）。盖盖盖2023/7/306（2）室内面积>30㎡，设4角及中央5点，4角布点部位距离墙壁1m处，（东、西、南、北、中五个点，其中东、西、南、北点均距离墙壁1m）。盖盖盖盖盖2023/7/307（3）采样方法：将普通营养琼脂平板（直径9cm)放在室内各采样点处，采样高度为距离地面80—150cm，采样时将平板盖打开，扣放于平板旁，Ⅱ类环境暴露15min、Ⅲ类、Ⅳ类环境暴露5min,盖好立即送检。（4）检测方法：将采样后平皿置37℃±温箱培养48h,然后记录每个平皿上菌落数。2023/7/308洁净手术室静态空气净化效果的监测手术区：Ⅰ级手术台两侧边至少各外推0.9m,两端至少各外推0.4m后（包括手术台）的区域；Ⅰ级眼科专用手术室手术区每边不小于1.2m；

Ⅱ级手术台两侧边至少各外推0.6m,两端至少各外推0.4m后（包括手术台）的区域；

Ⅲ级手术台四边至少各外推0.4m后（包括手术台）的区域；

Ⅳ级不分手术区和周边区。周边区：洁净手术室内除去手术区以外的其他区域。2023/7/309（一）采样时间：洁净手术室房间清洁并擦试消毒后，使净化空调系统达到自净时间并处于开启状态，然后进行测试，室内应无工作人员。

（二）监测人员要求：穿洁净服，戴口罩，手卫生。动作要轻，避免产生二次污染。

2023/7/3010（三）布点顺序：放置培养皿从总平面中最靠里的房间开始布置，依次向外，最后人员撤出。每间房间也是从房间最靠里的点开始布置，最后布置门附近的点，然后人员撤出。收取培养皿的顺序相反，从最外边的房间开始收，每间房间从门附近的培养皿开始收，最先布置的皿最后收，沉降时间略有差别。

2023/7/3011（四）检测方法：将血平板或普通营养琼脂平板（直径9cm)放在室内各采样点处，采样点可布置在地面上或不高于地面0.8m的任意高度上；在手术区检测时应无手术台，当手术台已固定时，检测高度应在台面之上0.25m；在100级区域检测时，采样口应对着气流方向；在其他区域检测时，采样口均向上。采样时将平板盖打开，扣放于平板旁，暴露30min,盖好立即送检.2023/7/3012（五）空白对照：第1次对照为培养皿对照，每监测批次中取1个培养皿做对比试验，培养皿不打开直接培养，用于检测培养皿是否合格。第2次对照为微生物室操作对照，每室或每区取1个对照皿，对操作过程对照试验，方法是模拟微生物检测操作过程，但培养皿打开后应立即封盖。两次对照结果必须为阴性。整个操作应符合无菌操作的要求。

2023/7/3013（六）布点方法

注意：乱流洁净室应尽量避开高效送风口正下方，同时布点位置应避开障碍物。

1、洁净度手术区百级周边区千级设置13个点

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2、洁净度手术区千级周边区万级设置9个点

2023/7/30153、洁净度手术区万级周边区十万级设置7个点2023/7/30164、洁净度手术区十万级周边区三十万级设置5个点2023/7/30175、洁净度十万级设置5个点▲▲▲▲▲2023/7/3018计算方法：采样后的培养皿应37℃条件下培养48h，并计算菌落数。菌落数的平均值均四舍五入选位到小数点后1位。

注意手术区与周边区分别计算。

2023/7/3019卫生部《医院洁净手术部建筑技术规范》

（GB50333-2002）中洁净手术室等级标准（空态或静态）

等级手术室名称沉降法细菌最大平均浓度表面最大染菌浓度空气洁净度级别手术区周边区手术区周边区Ⅰ特别洁净手术室0.2个/30min•φ90皿0.4个/30min•φ90皿5个/cm2100级1000级Ⅱ标准洁净手术室0.75个/30min•φ90皿1.5个/30min•φ90皿5个/cm21000级10000级Ⅲ一般洁净手术室2个/30min•φ90皿4个/30min•φ90皿5个/cm210000级100000级Ⅳ准洁净手术室5个/30min•φ90皿5个/cm2300000级1级眼科专用手术室周边区按10000级要求。

φ90皿为采样直径90mm的培养皿。2023/7/30202023/7/3021（七）平板暴露法结果计算：平板暴露法按平均每皿的菌落数报告：cfu/（皿·暴露时间）。注意事项：Ⅰ类环境在洁净系统自净后与从事医疗活动前采样；百级手术间自净时间为15分钟，万级手术间自净时间为30分钟。Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ类环境在消毒或规定的通风换气后与从事医疗活动前采样。2023/7/3022

2、空气微生物采样器采样法略2023/7/3023（八）结果判断：各类环境空气、物体表面菌落总数卫生标准环境类别范围空气平均菌落数1

物体表面平均菌落数cfu/c㎡cfu/皿cfu/m3Ⅰ类洁净手术室、符合GB50333要求≤150≤5其他洁净场所≤4.0（30min）2Ⅱ类非洁净手术部（室）；产房；导管室；血液病病区、烧伤病区等保护性隔离病区；重症监护病区；新生儿室等。≤4.0（15min）—≤5Ⅲ类母婴同室；消毒供应中心的检查包装灭菌区和无菌物品存放区；血液透析中心（室）；其他普通住院病区等≤4.0（5min）—≤10Ⅳ类普通门（急）诊及其检查、治疗（注射、换药等）室；感染性疾病科门诊和病区≤4.0（5min）—≤10注1：cfu/皿为平板暴露法，cfu/m3为空气采样器法。注2：平板暴露法检测时的平板暴露时间。242023/7/30附：洁净手术室分级等级手术室名称自净时间手术切口类别适用手术提示Ⅰ（100级）特别洁净手术室≤15minⅠ关节置换手术、器官移植手术及脑外科、心脏外科和眼科等手术中的无菌手术Ⅱ（1000级）标准洁净手术室≤25minⅠ胸外科、整形外科、泌尿外科、肝胆胰外科、骨外科和普通外科中的一类切口无菌手术Ⅲ（10000级）一般洁净手术室≤30minⅡ普通外科（除去一类切口手术）、妇产科等手术Ⅳ（100000级）准洁净手术室≤40minⅢ肝肠外科及污染类等2023/7/3025二、手卫生效果的监测方法（一）采样时间：一般要求在接触病人、从事医疗、护理活动前进行采样。（二）采样方法及面积：方法：被检人五指并拢，用浸有无菌生理盐水采样液的棉拭子一支在双手指曲面从指根到指端往返涂擦2次，一只手涂擦面积约30c㎡，涂擦过程中同时转动棉拭子；将棉拭子接触操作者的部分剪去，投入装有10ml采样液的试管内，及时送检。采样面积按平方厘米（c㎡）计算。若采样时手上有消毒剂残留，采样液应含相应中和剂。2023/7/30262023/7/3027（三）检测方法：将采样管在混匀器上振荡20秒或用力振打80次，用无菌吸管吸取1.0ml待检样品接种于灭菌平皿，每一样本接种2个平皿，平皿内加入已溶化的45℃-48℃的营养琼脂15ml-18ml，边倾注边摇匀，待琼脂凝固，置36℃±1℃温箱培养48h，计数菌落数。

（四）计算方法：

细菌菌落总数（cfu/c㎡）=平皿上菌落数×采样液稀释倍数/30×2（采样面积c㎡）。

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（五）结果判断：

《医务人员手卫生规范》手消毒效果应达到如下相应要求：

卫生手清毒监测的细菌菌落总数应≤10cfu/c㎡，

外科手消毒监测的细菌菌落总数应≤5cfu/c㎡。2023/7/3029《医务人员手卫生规范》监测要求医疗机构应每季度对手术室、产房、导管室、层流洁净病房、骨髓移植病房、器官移植病房、重症监护病房、新生儿室、母婴室、血液透析病房、烧伤病房、感染疾病科、口腔科等部门工作的医务人员手进行消毒效果的监测；当怀疑医院感染暴发与医务人员手卫生有关时，应及时进行监测，并进行相应致病性微生物的检测。2023/7/3030三、物品和环境表面消毒效果监测

（一）采样时间：在消毒处理后或怀疑与医院感染暴发有关时进行采样。（二）采样面积：被采物体表面面积＜100c㎡取全部表面；采样面积≥100c㎡，取100c㎡。2023/7/3031（三）采样方法（棉拭子法、压印法两种）

棉拭子法：用5×5cm的标准灭菌规格版，放在被检物体表面，用浸有无菌生理盐水采样液的棉拭子一支，在规格板内横竖往返均匀涂抹5次，并随之转动棉拭子，可连续采样1～4个规格板面积。剪去手接触部分，并将棉拭子放入装有10ml采样液的试管内，立即送检。门把手等小型物体表面则采用棉拭子直接在物体表面按一定顺序涂抹采样，结果计算用cfu／c㎡。若采样物体表面有消毒剂残留时，采样液应含相应中和剂。

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1、步骤

在5×5c㎡规格板内横竖往返均匀涂抹各5次，连续采4个规格板面积

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2、计算方法：

1）规则物体表面菌落总数（cfu/c㎡）=平均每皿菌落数×采样液稀释倍数/采样面积（c㎡）；2）小型物体表面的结果计算，用cfu/件表示。2023/7/30343、结果判断环境类别范围菌落总数cfu/c㎡致病菌＊Ⅰ类层流洁净手术室、层流洁净病房≤5不得检出

Ⅱ类非洁净手术部（室）；产房；导管室；血液病病区、烧伤病区等保护性隔离病区；重症监护病区；新生儿室等。≤5不得检出Ⅲ类母婴同室；消毒供应中心的检查包装灭菌区和无菌物品存放区；血液透析中心（室）；其他普通住院病区等≤10不得检出Ⅳ类普通门（急）诊及其检查、治疗（注射、换药等）室；感染性疾病科门诊和病区≤10不得检出注：＊致病菌指溶血性链球菌、金黄色葡萄球菌。母婴同室、早产儿室、婴儿室、新生儿室及儿科病房的物体表面不得检出沙门氏菌。2023/7/3035四、使用中消毒液染菌量测定

（一）采样时间：采取更换前使用中的消毒剂与灭菌器械保存液；（二）采样量及方法：在无菌条件下，用无菌注射器抽吸1.0ml被检样液，加入9.0ml稀释液中混匀，须加入中和剂以中和被检样液的残效作用。2023/7/3036医院需要常备消毒剂的中和剂消毒剂中和剂含氯（碘）消毒剂

（有效氯或碘0.1%～0.5%)硫代硫酸钠（0.1%～1.0%)过氧乙酸溶液（0.1%～0.5%）硫代硫酸钠（0.1%～0.5%)过氧化氢溶液（1.0%～3.0%）硫代硫酸钠（0.1%～0.5%)醛类消毒剂0.3%甘氨酸洗必泰、季按盐类消毒剂（0.1%～0.5%）Tween80（0.3%)+卵磷脂（0.3%）醇类与酚类消毒剂普通营养肉汤碱类消毒剂等当量酸酸类消毒剂等当量酸酸性氧化电位水硫代硫酸钠（0.5%)+PBS(0.03mol/L)复方消毒剂Tween80+卵磷脂+硫代硫酸钠2023/7/3037（三）检测方法：用无菌注射器抽取1.0ml消毒液，加入9.0ml稀释液中混匀，取1ml接种平皿内，将冷却至40℃-45℃的溶化营养琼脂培养基每皿倾注15ml-20ml，置36℃

±1℃恒温箱培养72h，计数菌落数，怀疑与医院感染爆发有关时，进行目标微生物的检测。

消毒液染菌量（cfu/ml)=平均每皿菌落数×10×稀释倍数2023/7/3038（四）结果判断：使用中皮肤粘膜消毒液染菌量≤10cfu/ml,不得检出致病菌；其他使用中消毒液染菌量≤100cfu/ml,不得检出致病菌；使用中灭菌用消毒液应无菌生长。注意：采样时应无菌操作，正确选用中和剂，采样后1小时内检测。2023/7/3039五、无菌医疗用品采样及检查方法1、采样时间在消毒灭菌处理后，存放时间内采样2、采样量及方法可用破坏性方法对不能用破坏性方法的医疗用品可用浸有生理盐水采样液的棉试子在被检物体表面涂抹采样。被采样物体表面＜100c㎡,取全部表面；被采表面≥100c㎡，则取100c㎡。3、无菌检查:不得检出任何微生物。2023/7/3040六、灭菌质量的监测

压力蒸汽灭菌的监测

过氧化氢低温等离子灭菌的监测

2023/7/3041压力蒸汽灭菌的监测

（一）物理监测法：每次灭菌应连续监测并记录灭菌时的温度、压力和时间等灭菌参数。（二）化学监测法：应进行包外、包内化学指示物监测。采用快速压力蒸汽灭菌程序灭菌时，应直接将一片包内化学指示物置于待灭菌物品旁进行化学监测。2023/7/3042（三）生物监测法：生物指示剂有芽孢悬液、芽孢菌片以及菌片与培养基混装（自含式）的指示管。指示菌株：嗜热脂肪杆菌芽孢（ACTT7953或SSIK31株），菌片含量为5.0×105-5.0×106cfu/片，在121±0.5℃条件下，D值为1.0-1.9min。KT值≤19min,ST值为≥3.9min。2023/7/30431、监测方法为：将生物指示物置于标准试验懈的中心部位。标准试验包由16条41cm×66cm的全棉手术巾制成。制作方法：将每条手术巾的长边先折成3层，短边折成2层，然后叠放，制成23cm×23cm×15cm大小的测试包。经一个灭菌周期后，在无菌条件下取出标准试验包的指示菌片，投入溴甲酚紫葡萄糖蛋白胨水培养基中，经56℃±1℃培养7d（自含式生物指示物按产品说明书执行），观察培养结果。2023/7/30442、采用快速压力蒸汽灭菌程序灭菌时，应直接将一支生物指示物，置于空载的灭菌器内，经一个灭菌周期后取出，规定条件下培养，观察结果。3、监测周期：生物监测应每周监测一次。2023/7/3045（四）结果判断：阳性对照组培养阳性，阴性对照组培养阴性，试验组培养阴性，判定为灭菌合格。阳性对照组培养阳性，阴性对照组培养阴性，试验组培养阳性，则灭菌不合格；同时应进一步鉴定试验组阳性的细菌是否为指示菌或是污染所致。4664762023/7/3048过氧化氢等离子灭菌的监测

一、物理监测法：每次灭菌应连续监测并记录每个灭菌周期的临界参数如舱内压、温度、过氧化氢的浓度、电源输入和灭菌时间等参数。二、化学监测法：每个灭菌物品包外应使用包外化学指示物，作为灭菌过程的标志；每包内最难灭菌位置放置包内化学指示物，通过观察其颜色变化，判定其是否达到灭菌合格要求。

三、生物监测法：

指示菌株：嗜热脂肪杆菌芽孢（ACTT7953）监测周期：应每天至少进行一次灭菌循环的生物监测，监测方法应符合国家的有关规定。

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生物指示菌

生物监测周期压力蒸汽灭菌

嗜热脂肪杆菌芽孢

（ACTT7953）

每周一次

过氧化氢等离子嗜热脂肪杆菌芽孢每天至少一次

2023/7/3050灭菌过程验证装置PCD对灭菌过程有预定抗力的模拟装置，用于评价灭菌过程的有效性。其内部放置化学指示物时称化学PCD，放置生物指示物时称生物PCD。

4．4灭菌质量的监测

4．4．1通用要求

4．4．1．6按照灭菌装载物品的种类，可