内毒素检验讲稿

内毒素检验讲稿第1页，课件共19页，创作于2023年2月细菌内毒素试验试剂：细菌内毒素国家标准品、细菌内毒素工作标准品、鲎试剂、细菌内毒素检查用水主要设备：超净工作台、恒温培养箱、恒温水浴箱、电热干燥箱、旋涡混合器。第2页，课件共19页，创作于2023年2月试验前准备器具处理试验所用器皿需经处理除去可能存在的外源性内毒素。玻璃器皿置电热干燥箱内180℃干烤至少2h或250℃干烤至少30min。塑料器皿置30%双氧水中浸泡4h，再用细菌内毒素检查用水充分冲洗后置60℃烘干备用。第3页，课件共19页，创作于2023年2月内毒素限值的确定输液、输血、注射器具细菌内毒素限值在产品标准中规定，宜尽可能低；推荐输液、输血、注射器具细菌内毒素限量每件不超过20EU；与脑脊液接触和胸内应用医疗器械每件不超过2.15EU。根据每件的限值L及每件器械所用的提取液体积V，就可估算所需的鲎试剂灵敏度λ=L/V第4页，课件共19页，创作于2023年2月试验前准备鲎试剂灵敏度复核试验当使用新批号的鲎试剂或试验条件发生了任何可能影响检验结果的改变时，应进行鲎试剂灵敏度复核试验。试验步骤按《中国药典(二部）附录中“细菌内毒素检查法”规定进行。第5页，课件共19页，创作于2023年2月编号内毒素浓度/被加入内毒素的溶液稀释用液稀释倍数平行管数结果举例A无/供试品溶液——2C2λ/检查用水12482λ1λ0.5λ0.25λ每个浓度均为4管++++++++--------D无/检查用水——2鲎试剂灵敏度复核λc=antilg（ΣX/4）其中X为反应终点浓度的对数值当λc在0.5λ至2λ（包括0.5λ和2λ）时，鲎试剂灵敏度有效第6页，课件共19页，创作于2023年2月试验前准备供试品干扰试验对未知或可疑的供试品初次进行细菌内毒素试验之前应先进行干扰试验，以检验供试品对细菌内毒素试验是否有抑制或增强作用，以及其他影响细菌内毒素试验准确性和敏感性的干扰作用。当鲎试剂、供试品来源、供试品配方或生产工艺有变化或其他任何可能影响细菌内毒素试验结果的试验条件改变时，应重新进行干扰试验。第7页，课件共19页，创作于2023年2月试验前准备每种医疗器械产品应取3批并分别使用不少于两个制造商生产的鲎试剂进行干扰试验。试验步骤按《中国药典（二部）附录“细菌内毒素检查法”中“凝胶法”规定进行。第8页，课件共19页，创作于2023年2月编号内毒素浓度/被加入内毒素的溶液稀释用液稀释倍数平行管数结果举例A无/供试品溶液——2B2λ/供试品溶液12482λ1λ0.5λ0.25λ每个浓度均为4管++++++-+---+----C2λ/检查用水12482λ1λ0.5λ0.25λ每个浓度均为4管++++++++--------D无/检查用水——2干扰试验溶液的制备第9页，课件共19页，创作于2023年2月干扰试验Es=antilg（ΣXs/4）其中Xs为C溶液反应终点浓度的对数值Et=antilg（ΣXt/4）其中Xt为B溶液反应终点浓度的对数值当Es在0.5λ至2λ（包括0.5λ和2λ）及当Et在0.5λ至2λ（包括0.5λ和2λ）时，认为供试液浓在该浓度下无干扰作用第10页，课件共19页，创作于2023年2月试验前准备供试品如对细菌内毒素试验有干扰作用，可选用下列适宜方法排除干扰a)使用更灵敏的鲎试剂对供试液进行更大倍数稀释;b)采用无热原氨基甲烧缓冲液稀释供试液；c)采用无热原氢氧化销或盐酸溶液调节供试液pH值在6.0~8.0范围内；d)采用阳离子缓冲液(MgSO4或MgCl2)稀释供试液以调节离子浓度。第11页，课件共19页，创作于2023年2月确定最大有效稀释倍数（MVD）MVD=cL/λL为限值c为供试品溶液浓度第12页，课件共19页，创作于2023年2月试验方法供试品数量：同一批号至少3个单位供试品漫提介质：细菌内毒素检查用水第13页，课件共19页，创作于2023年2月试验方法供试液制备根据产品标准规定的细菌内毒素限值确定浸提介质体积，选用下列适宜方法制备供试液:a)管类和容器类器具用细菌内毒素检查用水浸泡器具内腔，在(37±1)℃恒温箱中浸提不少于1h；B)小型配件或实体类器具置无热原玻璃器皿内，加入细菌内毒素检查用水振摇数次，在37±1℃恒温箱中浸泡不少于1h；供试液贮存应不超过2h第14页，课件共19页，创作于2023年2月试验方法浸提介质体积计算公式：V=L/λ式中：V—浸提介质体积，单位为毫升(mL);L—产品细菌内毒素限值，单位为细菌内毒素单位每件(EU/件)λ—所用鲎试剂灵敏度标示值，单位为细菌内毒素单位每毫升(EU/mL)第15页，课件共19页，创作于2023年2月编号内毒素浓度/被加入内毒素的溶液平行管数A无/供试品溶液2B2λ/供试品溶液2C2λ/检查用水2D无/检查用水2A为供试品溶液；B为供试品阳性对照；C为阳性对照；D为阴性对照。第16页，课件共19页，创作于2023年2月结果判断37℃±1℃保温60分钟后观察结果D管的结果均为阴性，B、C管的结果均为阳性时试验有效A的2个平行管均为阴性时判定供试品符合规定A的2个平行管均为阳性时判定供试品不符合规定A的2个平行管1管阳性1管阴性时需进行复试。复试时A液需做4管，全部阴性判定为符合规定，否则判定供试品不符合规定第17页，课件共19页，创作于2023年2月试验报告试验报告中宜给出下列信息:a)供试品名称;b)生产批号;c)供试液制备方法;d)细菌