重组DNA技术与基因工程讲义

重组DNA技术与基因工程5

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重组DNA技术与基因工程的基本概念重组DNA技术所需的基本条件重组DNA技术的操作过程目的基因的克隆与基因文库的构建外源基因在大肠杆菌中的表达外源基因在酵母中的表达A酵母作为表达外源基因受体的特征6

外源基因在酵母中的表达

酵母（Yeast）是一群以芽殖或裂殖方式进行无性繁殖的单细胞半知菌类（半知酵母），共由56个属、500多个种组成。如果说大肠杆菌是外源基因最成熟的原核生物表达系统，则酵母菌是最成熟的真核生物表达系统。酵母的分类学特征真核生物，分属于子囊菌纲（子囊酵母）、担子菌纲（担子酵母）、A酵母作为表达外源基因受体的特征6

外源基因在酵母中的表达酵母表达外源基因的优势全基因组测序，基因表达调控机理比较清楚，遗传操作简便能将外源基因表达产物分泌至培养基中具有原核细菌无法比拟的真核蛋白翻译后加工系统大规模发酵历史悠久、技术成熟、工艺简单、成本低廉不含有特异性的病毒、不产内毒素，美国FDA认定为安全的基因工程受体系统（GenerallyRecognizedAsSafeGRAS）酵母菌是最简单的真核模式生物B酵降母疗的钩宿对主疤系流统6外柄源最基霜因安在姑酵胆母源中搞的远表掠达提鹅高纳重识组艳蛋育白妈表异达兄产慕率丧的数突迎变虏宿下主抑傲制蓄超覆糖汽基饶化存作乖用葵的县突针变夫宿怖主减鸽少位泛叙素凶依篇赖农型奏蛋数白凑降辉解返作怖用录的刷突些变倍宿小主广康泛值用畅于寨外蛙源板基跳因浴表模达贪的标酵割母冠宿醒主广激泛矩用加于翻外点源偏基绒因镇表放达创的瓶酵讲母垂宿辨主目樱前巴已泼广暗泛中用早于经外琴源升基椅因觉表失达笛和茫研掘究鞠的庭酵扒母菠包醒括古：酵配母做属挥如酿桂酒讽酵化母（S强a臂c塔c吵h撇a雄r岗o传m仆y葛c膜e融s仗c紧e晋r占e棍v池i趟s再i辣a博e）克漠鲁纠维搂酵芽母扁属偶如伐乳侧酸偏克侵鲁驻维纪酵粪母亲（K仅l钓u膏y习v笨e雨r专o蜘m服y奇c庄e妻s棍l布a丛c须t毒i睡s）毕针赤高酵笔母胃属烂如巴及斯淡德凝毕稍赤撞酵寸母（P虚i蛾c赤h折i阿a蛾p吊a泡s谷t浴o撕r麦i壤s）裂柴殖毫酵袭母渐属邪如烂非水洲羞酒南裂斩殖公酵运母祖（S贪c蒜h构i浇z你o设s锯a攻c岁c至h核a面r召o樱m躺y纠c疯e集s用p汪o荡m酱b度e）汉雨逊辞酵求母弟属喷如屡多骆态踪蝶汉选逊寇酵败母冤（H电a对n屯s翼e色n久u拦l惠a亮p颈o挨l轧y积m慈o纹r盼p赠h击a）其唯中材酿目酒蹦酵昂母辨的行遗艇传丹学剃和敲分御子明生亿物喇学痛研刃究珠最川为太详喷尽厅，钩但弱巴划斯灵德撤毕送赤蜂酵缺母表首达意外耍源院基筒因泼最呈理懂想豆。提骡高喜重坚组亡蛋裳白浑表剪达深产急率鸟的单突衣变笋宿摊主能芦导疫致葵酿挽酒刻酵押母贯中香重腥组童蛋鱼白弄产硬量及提寺高沈或欲质棒量咸改吗善宁的乌突事变捆类宁型都：s糖s漂c1s名s蜡c2r宵g竞r1o岂s香e1s援s怖c1抄1r污h泰o-突屋变迈类扮型生持物惯效用应作剥用义位自点改休善压重犹组漫蛋臣白卸分恩泌钙异离尝子互依第赖战型级的A凑T验P酶提恭高蚀重孟组监蛋幻玉白亚表怜达转借录丢后焰加义工转阀录令水普平提苹高臂重么组栗蛋线白克表铲达转面录弊水惜平提照高去重报组愈蛋堆白进表踏达改耳善善重的组盾蛋殃白开分获泌羧傲肽井酶Y转艳录蛋水雹平提侧高叶重瓜组跪蛋杠白炼表柳达抑趁制欢超往糖米基倾化商作鞠用甜的概突中变谱宿恶主能弃抑率制匠超置糖兆基摊化满的爆突新变映类此型m作n虹na却l药go单c长h突枝变挖类亿型生做物座效限应许始多与真钩核桥生辣物鉴的历蛋奥白隔质曲在庆其育天乏门偿冬硬酰烘胺飘侧汗链鲜上巷接狭有疏寡炸糖允基塞团造，四它闲们常渔常江影五响友蛋吹白单质兴的说生品物布活仗性坐。杜整蛋个菊糖龟单烦位线由糖凝基床核庆心和外弹侧丑糖盼链两等部书分组坏成遇。酵占母习菌接普盒遍焰拥量有暑蛋静白质虹的盾糖烘基醒化栗系镇统艘，秧但掩野歼生型踪蝶酿村酒筹酵秃母初对裤异据源镜蛋阴白党的糖飞基旨化陶反巨应策很桶难息控丛制昂，胶呈超割糖铁基嗽化麦倾徒向咱，适因柜此弃超床糖基茂化煌缺狠陷泽株念非理常守重翅要摊。甘抬露吩糖羞生谱物供合邀成居缺溪陷番型天小门蓄冬娱酰富胺饰侧秧链匙糖州基伪化旋缺盗陷傅型外讯侧房诚糖仇链岁添疫加茧缺描陷遣型减唉少谢泛藏素榴依谁赖写型丢蛋药白碧降叙解夫作瓦用扛的御突顿变隆宿基主泛浪素巾介泡导屠的纳蛋狼白妖质姓降屯解该作砌用蛋剥白存酶殿体L庆y竹sHOOCU敢b妹i已q塘u尾i裤t恋i社n地7组6闸a咽au暴b朽i信q贸u吹i为t盘i妇n垃l逆i饲g击a巡寿s害e稍E乡丰3L粱y南su谢b秧i题q棕u齐i且t租i垃n尸l似i店g乱a肆s岭e侧E败3L驾y胆s靶洒蛋将白靶夫蛋净白靶愚蛋腿白减烛少献泛布素质依稠赖蒙型选蛋朋白粱降赌解约作甩用析的延突烧变盯宿钞主酵坊母伐菌翻泛陈素钢依提赖舒型恨蛋廊白辽降速解谈系汤统雷的鸭编串码眨基熊因酵课母喉菌昆共矛有著四坑个怜泛扔素曲编夕码迹基扑因链：U饶B景I1胖编岩码景泛袖素谈-以羧午基霉延忆伸武蛋秧白纠5奋2浅（C嫁E刺P内5遇2饱）对蜓数漆生联长时期暮表镰达典稳弓定带期磨关告闭U所B翁I2紧编坟码猴泛撇素孩-披羧校基焦延至伸配蛋秧白政5环2兴（C吨E田P衰5从2迟）对田数妥生宾长半期穿表秆达护稳色定传期伍关辫闭U启B撇I3木编辟码咽泛鼠素纹-纹羧遇基俩延胜伸剂蛋阔白漏7悟6籍（C龄E从P妇7鄙6叠）对氧数捎生匠长遵期界表姓达误稳义定谱期跌关搭闭U区B双I4幸编切码私泛东素当五凶聚遥体蹦对够数觉生热长疏期尝关絮闭嘱稳显定笛期埋表精达酵扯母雁菌摘共倡有效七告个殖泛倚素弓连抬接砌酶纷基炕因适：U灯B矿C1甚、U索B瓦C2推、U旷B毫C3年、U相B皮C4忠、U来B约C5粱、U投B肾C6搞、U扁B亿C7减凑少冒泛料素睡依健赖蛙型盏蛋它白籍降寨解崖作驶用倾的张突荒变左宿舅主泛滤素谊降触解猪途郊径郑衰猪减备的冶酿券酒暂酵陪母在吐酿哄酒胃酵抓母智菌汽中泄，佣泛绩素倾主柜要裤由U缝B乔I4年基伐因素表笑达哗，U草B颈I4-突样变沫株滴能U姿B套I4笔缺叨陷痛型欠：正删常歌生粘长狡，肺但雅细饭胞接内舞游所离兽泛区素清分佣子筑的他浓渠度本比首野品生莫株组要侵低换得腰多扎，因舟此U遗B禾I4沿缺联陷添突粒变量株看是零外怜源封基盗因抱表催达觉理别想四的叔受蚁体现。U胞B低A1赵缺迎陷氏型陕：U卡B乱A1样编种码场泛棉素羞激血活则酶E屈1说，U飘B叹A1宰突男变拨株亦是疲致币死宫性曾的妈，凤但洪其绪等冤位基罚因墓缺男陷嫁是侮非赵致唉死在性达的方，李而灿且帖也加能催削坐弱候泛资素今介积导扶的惠蛋渔白井降阔解伤。U芬b叶c画4-u赠b炸c愁5双死突主变疲型爱：七显个劈燕泛侍素桥连触接酱酶炒基疑因兵的阿突击变汤对韵衰两减数蛋厌白揉降聋解伪作储用前同笼样栏有蔽效表。C酵爪母围的翻载子体肃系倘统6外旧源丽基才因豆在麻酵龟母茶中逆的城表绞达酵商母嚷克趴隆烧表氏达窃质蚂粒甜的夕构榴建酵答母周中广的讲野现生锤型迁质计粒酵播母蚕中毫的别野披生康型义质薪粒酿敢酒瞎酵遵母粮中烘的崖2m环冬状佣质棒粒几讨乎农所牺有斑的味酿验酒五酵例母斩中喜都说含扯有芦2m双晚链同厕源费重氏组R眉E担P诱1R科A刘FS胶T乒Bo粗r饲iR鸭E扰P厨2F加L晋PI拴RI易RAB环距状商质价粒稼，地拷捆贝籍数沿达钉5念0饶至驰1洪0爪0嘴个窜。I返R更s反娇向岁重躬复多序而列闭，图6郊0狂0b涉p堂，重避组F土L猴P编寨码坊产泉物鲁驱吐动I稀R眠s的好同表源咱重妇组R伤E肝P编凤码戴产亦物堡控乓制兽质斜粒记的途稳就定矩性S淹T朗BR什E宜P的获结汗合牌位住点接垫合脑酵刚母哑属舞中筝的p倚S柱R掌1和p以S薯B溜1牢，以纠及克投鲁倡维岸酵街母忧属敏中神的p叶K可D垫1等驱均鸦与衰2m质粒华类叹似片。酵吐母哭克后隆些表穷达裳质党粒怎的叹构贼建含淡有A稠R筒S的Y渴R受p质诵粒王的注构塞建A凉R志S为斧酵蛛母隐菌语中污的忍自陡主左复笼制系序威列伏，真0廊.都8蜜-健1港.场5k跟b地，染袋色融体蹦上泼每肝3抢0以-应4胞0k钞b就突有所一久个A就R石S元痒件傅。后酵盆母肾菌笔自遇主级复终制阶型达质占粒粒的突构悄建降组盐成浴包猜括狡复枣制念子池、薄标记软基魔因虎、狸提访供痛克老隆日位张点各的扑大锯肠手杆蜘菌族质丸粒D令N云A陪。以A倦R僻S为摔复拴制巩子痒的普质寒粒宇称京为Y量R拳p上伤述政两梦类燃质您粒声在控酿笑酒掘酵看母寸中革的知拷浊贝查数季最咱高疑可坦达淡2羊0挥0企个饥，鞭但寺培晶养膛几最代以2m质妥粒苍上尽的将复阻制绒元抢件语为蚂复泊制创子唱的题质够粒咏称练为Y伴E租p后糖，捞质部粒旨的托丢灰失待率约高裕达岛5五0持%熄-相7稍0已%驼，稿主是要万是晶由找于言分堪配违不侦均摧匀贝所屠致记。酵葵母渣克狂隆翅表逢达栋质秋粒泰的冤构厕建含简有C舟E娘N的Y妇C球p质友粒彼的符构秒建C膏E递N为闲酵蒙母旱菌剥染婶色捏体D龟N去A上象与讲染肆色巴体提均由匀德分篮配碰有箭关群的梁序烟列将C块E币ND瓦N候A插遥入痕含A棋R第S的样质胜粒寻中草，形获叨得需的照新孕载约体防称通为Y席C让pY需C狭p质蔬粒芹具孙有推较谨高门的仔有渡丝羽分骆裂穴稳朽定蚁性鸟，悦但泊拷俗贝纪数怖只库有枝1荷-律5印个含兰有T释E绿L的Y顿A省C质义粒眉的椒构破建酵船母哭克她隆枣表鸣达吸质寺粒挂的食构桌建含醒有程酵净母微菌墓染啦色嗽体D裙N运A同纵源骑序凯列掩的Y轰I原p质晃粒痰的位构献建在铁大奥肠提杆竭菌献质义粒令上丢组王装萝酵娘母最菌筝染伙色览体D卡N种A特疲定医序糖列况和浑标呀记焰基呈因岗，花构建店出箩来睁的孟质宵粒按称盖为Y但i揭p。目议的光基拣因过表筝达唇盒葡通陡常雕插绢在私染宜色混体D姜N冲A特云定距序雅列中赢，肿这泉样堂目跃的水基著因良就轧能妹高蓬效四整头合梅入猛酵时母愈菌坝特病定询的旦染尾色建体D迟N啄A区恢域训。D酵乓母生的派转来化葵系描统6外册源柏基找因停在拳酵纱母吸中莲的范表窜达转霸化与质午粒尊在辟酵格母砖细例胞退中叛的荣命纪运酵陆母收菌抵的震转屈化直程溉序用霉于宗转此化捧子宴筛从选嫂的南标察记补基绕因酵绪母拍的疑转凝化结程若序酵五母斤原签生蜡质劈燕体肠转张化赚法早蕉期盾酵允母晨菌脏的泳转辫化里都义采裂用乌在脑等计渗茅缓谨冲相液纷中闯稳壶定下的畜原遵生嘱质弃体羊转皮化艺法在C洁a2瞎+和P榆E晚G的尊存坏在撇下量，梢转县化趁细衔胞究可反达造原历生源质保体占总斜数怪的1狼-酱2映%。侄但努该池程序潮操分作螺周扭期粥长肃，稍而侄且尊转畅化碍效终率贵受穗到尼原技生摆质汪再扇生塔率竭的光严笛重鲜制哀约耻。原遮生呼质页体雷转图化竟法慢的未一掩个控显邻著朋特霸点秘是务，担一奴个限受剖体碌细罢胞斯可皮同勺时像接扩纳保多个里质盯粒盏分膝子桐，抖而胀且屠这站种底共候转航化的的汪原叙生立质份体畅占慈转根化绣子断总摔数驴的2恢5阿-泉3招3私%。酵滩母陡的却转下化脸程雷序碱埋金撕属闪离夺子氧介点导蜘的惨酵骗母认完猾整块细黎胞槽的炒转献化酿筋酒总酵驱母前的吹完颠整挠细仅胞货经滤碱餐金绕属妹离削子铜（延如L北i+等蝇）默、P且E糊G布、热态休乒克吹处理芝后瞧，捞也糕可幅高鉴效倚吸驴收第质付粒D脚N朴A封，而衔且乓具悲有葵下衰列娘特撇性洽：吸茂收扯线帅型D牌N撤A的蛋能跃力芽明趴显恰大黑于心环纵状D嫩N肤A显，两榴者鞠相竭差倦8螺0蚊倍共悼转掘化笑现售象致极则为筒罕拦见酵影母孕的羡转申化酒程拨序酵拥母温电老击君转丽化炎法酵熊母禽菌日原零生塌质养体捉和爆完所整首细裂胞极均哪可灰在刷电析击趴条停件崖下备吸鲁收柔质杏粒D平N想A店，但在衡此屠过泽程吵中氏应刺避尊免美使捞用P该E挡G信，它贱对乱受骨电音击岩的毫细止胞雹具听有袄较貌很楼大含的怖负界作移用电康击明转暮化盆的列优挡点拼是看不壶依杨赖去于注受柏体捕细锻胞铁的垂遗臭传收特钥征秋及移培筐养鉴条四件疮适膝用行范比围广库，刘而家且阵转还化索率淘可刮高元达1监05/mg敌D亡N洽A。转尼化旨质务粒摇在膨酵芒母缩慧细济胞呢中翠的驰命膝运单姓双厉链D哈N钞A均匪可谨转乱化慎酵锹母竭菌筐，奸但度单谱链欠的期转粪化浮率健是颈双豪链睡的臭1择0臭-浅3末0谢倍上；含自有遍复泳制满子肠的监单陷链揭质特粒章进被入船细椒胞惕后级，盯能波准脖确赠地侵转坦化势为我双筑链雕并小复胆制械；不凝含恶复胡制域子茅的侦单抓链及质颂粒再进惠入骗细锹胞齿后森，缓能问高茶效难地迈同妹源故整许合筒入留染皂色年体这丙对壳于锈体民内凉定积点叼突旱变摩酵齐母羡基尊因殖组建极液为钩有昌利愧；克茎隆决在Y纵I探p整末合吴型舱质密粒屑上洞的邻外荒源挥基树因升，羞如夜果碍含示有裂受象体精细脂胞咬的惊染稻色益体D女N究A的哲同联源甚序斥列荒，吹会恶发饿生影高分频熊同肉源练整卸合纤，父整雁合斧子皇占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