流式细胞术及在血液病临床应用

流式细胞术及在血液病临床应用流式细胞术（FlowCytometry）流式细胞术是以流式细胞仪为工具，在单细胞分析和分选基础上发展起来的对细胞的物理或化学性质，如大小、内部结构、DNA、RNA、蛋白质等进行快速测量并可分类收集的高技术。是除航天技术以外，美国科学界对人类的又一重大贡献。是受显微镜原理启发而来。流式细胞仪（FlowCytometer）流式细胞仪是测量染色细胞荧光强度的细胞分析仪，是一项综合了激光技术、计算机技术、半导体技术、流体力学、分子生物学等各门学科的新技术“杂交体”。Beckman-CoulterEpicsXLBeckman-CoulterAltra流式细胞仪与显微镜FLOWMICROSCOPE光源激光自然光、灯光、氙(汞)灯对象细胞、生物粒子细胞、生物粒子承载工具鞘液及流动室载(盖)玻片检测信号光学信号形态及染色放大方式

PMT，放大电路目镜X物镜统计计算机，>5000人工，200结果多参数，综合分析简单，单参数流式细胞术工作原理液流系统、光学系统、分选系统、数据处理系统

1.流式细胞仪系统结构液流系统:样本流，鞘液InjectorTipFluorescencesignalsFocusedlaserbeamSheathfluid光学系统：激光光源，分光镜，滤片，散射光和荧光探测器。

分选系统：压电晶体，液流成滴，加电系统，偏转系统。数据处理系统：计算机工作站2.流式细胞术参数流式细胞术是对细胞在激光激发下产生的散射光和荧光信号进行收集与分析，从而得到细胞的理化特性。（1）散射光信号：前向角散射光（FSC）：反映细胞大小侧向角散射光（SSC）：反映细胞粒度前向角散射光（FSC）FALSSensorLaser前向角散射光（FSC）侧向角散射光（SSC）FALSSensor90LSSensorLaser侧向角散射光（SSC）

OpticalDesignPMT1PMT2PMT5PMT4DichroicFiltersBandpassFiltersLaserFlowcellPMT3ScatterSensorSample（2）荧光信号：荧光抗体：膜表面抗原，受体，膜糖蛋白，胞浆抗原荧光染料：DNA，RNA每种荧光染料均有特定的激发波长,并激发后会有发射波长,流式细胞仪检测的即是它特定的发射波长.利用各种不同波长的光学滤片来收集(检测)这些光学信号常用荧光染料的特性荧光染料激发波长(nm)发射波长(nm)用途颜色FITC488525免疫荧光绿色PE(RD1)488575免疫荧光橙色ECD488620免疫荧光橙红PeCy5488675免疫荧光红

PI488620DNA染色橙红PECy7488755免疫荧光深红PerCP488670免疫荧光红

APC488660免疫荧光红荧光素的选择PE最强，适用于弱表达抗原

FITC最便宜，适用于强表达抗原，适用范围广

biotin-avidin不适合弱抗原的检测3.流式细胞术的数据显示方式：直方图：单参数点图：双参数假三维图：双参数等高图：双参数密度图：双参数三维点图：三参数直方图点图等高图，密度图三维点图流式细胞术的样本来源含有生物学颗粒的悬液：单细胞悬液、微生物颗粒悬液、人工微球悬液标本类型：细胞悬液：外周血（溶血）、PBMC、骨髓灌洗液、体腔