《基因工程的基本操作程序》 名师获奖

基因工程的基本操作程序三、目的基因的检测与鉴定思维激活1.目的基因能否在真核生物中稳定遗传的关键是什么？如何检测？答案目的基因是否插入受体细胞的染色体DNA上，这是其能否在真核生物中稳定遗传的关键。检测方法是采用DNA分子杂交技术。2.什么是基因探针？如何检测目的基因是否开始发挥功能？答案基因探针是用放射性同位素标记的目的基因的单链DNA片段。从转基因生物中提取mRNA，用标记的目的基因作探针，与mRNA杂交，如果显示出杂交带，则表明目的基因转录出了mRNA，意味着目的基因开始发挥功能。3.检测目的基因是否翻译出蛋白质的方法是什么？其原理是什么？答案抗原—抗体杂交法。原理是抗原能与相应抗体特异性结合。4.检测棉花中导入的抗虫基因是否表达的最简便的方法是什么？答案用叶片饲养棉铃虫，观察棉铃虫是否死亡。应用示例3.目的基因导入受体细胞后，是否可以稳定维持和表达其遗传特性，只有通过鉴定和检测才能知道。下列属于目的基因检测和鉴定的是(

)①检测受体细胞的染色体上是否有目的基因②检测受体细胞是否有致病基因③检测目的基因是否转录出了mRNA

④检测目的基因是否翻译出了蛋白质A．①②③ B．②③④C．①③④ D．①②④问题导析

(1)目的基因的检测首先检测转基因生物的

上是否插入了目的基因。(2)其次检测目的基因是否

。(3)最后检测目的基因是否

。答案CDNA转录出了mRNA翻译出了蛋白质一题多变

判断正误：(1)如果检测出标记基因表达的性状，说明载体已导入受体细胞。(

)(2)检测目的基因是否翻译成蛋白质是目的基因能否在真核生物中稳定遗传的关键。(

)(3)DNA探针用来检测目的基因是否导入。(

)(4)鉴定转化的基因是否成功表达，在分子水平上可应用的方法是抗原－抗体杂交。(

)√××√课堂小结目的基因的获取利用PCR技术扩增人工合成基因表达载体目的基因检测与鉴定对点练习12341.基因工程的基本操作程序有：①使目的基因与载体相结合；②将目的基因导入受体细胞；③检测目的基因的表达是否符合特定性状要求；④提取目的基因。正确的操作顺序是(

)A．③②④①

B．②④①③

C．④①②③

D．③④①②1234解析基因工程的主要操作步骤顺序是：目的基因的获取→基因表达载体的构建→将目的基因导入受体细胞→目的基因的检测和鉴定。答案C2.如图为基因表达载体的模式图，若结构X是表达载体所必需的，则X最可能是()1234A．氨苄青霉素抗性基因B．启动子C．限制酶D．DNA连接酶1234解析启动子是该表达载体所必需的，功能是启动插入基因的转录过程。氨苄青霉素抗性基因可以作为标记基因，但不是必须用它作标记基因。限制酶和DNA连接酶都不是表达载体所需要的。答案B3.下列关于基因表达载体导入微生物细胞的叙述中，不正确的是(

)A．常用原核生物作为受体细胞，是因为原核生物繁殖快，且多为单细胞，遗传物质相对较少B．受体细胞所处的一种能吸收周围环境中DNA分子的生理状态称为感受态C．感受态细胞吸收DNA分子需要适宜的温度和酸碱度D．感受态细胞吸收重组表达载体DNA分子的液体只要调节为适宜的pH即可，没必要用缓冲液1234解析将基因表达载体导入微生物细胞时，需在一定条件(如适宜的温度、pH等)下，将基因表达载体和感受态的微生物细胞混合培养，在培养过程中，可能会影响pH的变化，因此要加入缓冲液，以保持适宜的pH。答案D123412344.1957年，生物学家了解到，病毒感染的细胞能产生一种因子，这种因子能作用于其他细胞，干扰病毒的复制，故将其命名为干扰素；从1987年开始，用基因工程方法生产的干扰素进入了工业化生产，并且大量投放市场。(1)若已知干扰素的氨基酸序列，则获取目的基因的较简单方法是___________；目的基因还可以从_________________文库获取，而从cDNA文库中不一定能得到，原因是___________________。1234解析若已知干扰素是氨基酸序列，则可以通过反转录法获得目的基因；cDNA文库是部分基因文库，因为cDNA是由生物发育的某个时期的mRNA反转录产生的，所以cDNA中不一定有目的基因，最好从基因组文库中获取。答案人工合成法基因组cDNA是由生物发育的某个时期的mRNA反转录产生的(其他合理答案也可)1234(2)用限制酶处理质粒和目的基因后，用___________酶处理，可形成基因表达载体，该载体的化学本质是_____。解析

用限制酶处理载体和目的基因后，将目的基因与载体连接，需要使用DNA连接酶处理，基因与载体的化学本质是相同的，都是DNA。DNA连接DNA1234(3)转基因技术是否成功，需要对受体细胞进行分子水平的检测，首先是检测受体细胞_____________上是否插入了目的基因，这是目的基因能否在真核生物中稳定遗传的关键。检测方法是采用__________________。最后还要检测目的基