外源基因的表达检测及遗传特性课件_第1页
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第一章转化外源基因在植物细胞中的表达调控第一节转化外源基因的瞬时表达和稳定表达第二节DNA序列对转化外源基因表达的调控第三节DNA甲基化对转化外源基因表达的调控第四节提高转化外源基因表达的策略第一节转化外源基因的瞬时表达和稳定表达转化外源基因的瞬时表达在合适的条件下,转化的外源基因通常在数小时后就能检测到其表达的产物,并在1-2天内达到最高值,随后又逐渐降低,至十多天后完全消失。这种短时间内的外源基因表达称之为瞬时表达。1外源基因瞬时表达的机制(1)瞬时表达是未整合的外源基因的表达(2)瞬时表达是一种正常的表达方式基因扩增是指细胞内某些特定基因的拷贝数专一性地大量增加的现象。扩增的基因片断游离在细胞核内。2外源基因瞬时表达的影响因素(1)质粒DNA的基因结构;(2)细胞内源核酸酶的影响(3)受体细胞生理状态及其内源Gus酶抑制剂的影响;3外源基因瞬时表达的应用(1)在基因转化研究中的应用①农杆菌转化能力的检测;②优化基因转化条件,选择导入DNA的方法,确定农杆菌共培养的时间等(2)植物基因表达调控的研究①启动子、增强子、内含子、终止子的功能研究②外界因素对基因表达调控的影响;③植物激素的调控机理。转化外源基因的稳定表达所谓稳定表达是指外源基因整合到和基因组DNA分子上,并能稳定地遗传的外源基因的表达。需符合以下条件:(1)表达时间长,无迅速衰退现象(2)DNA已整合到植物基因组中(3)能够传递给后代,并符合分离规律。第二节DNA序列对转化外源基因表达的调控植物基因工程中常用的启动子按作用方式及功能不同可将启动子分为三类:1.组成型启动子组织特异性启动子3.诱导型启动子1.组成型启动子在该类型启动子控制下,结构基因的表达大体恒定在一定水平上,在不同组织部为表达水平也没有明显差异,为此称之为非特异性表达组成型启动子。其特点是:表达具持续性表达量相对稳定;不表现时空特异性;不受外界因素诱导;在结构上存在六聚体花纹序列TGACTG),往往以重复形式出现并被6-8个核苷酸隔开。(1)caMV35S启动子该启动子来自花椰菜花叶病毒(CaMV),其转录产物的沉降系数为35S,故名最近发现35S启动子可以划分为两个区域:从90~+8为A区域,主要负责在胚根、胚乳的根及根组织内表达;从-343~90为B区域,主要负责在胚的子叶及成熟植株的叶组织及维管组织内表达,在B区域内的增强子序列可以提高表达水平。(2)

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