中药制剂的含量测定技术-高效液相色谱法

第三节第六章中药制剂含量测定技术高效液相色谱法外标法可分为工作曲线法、外标一点法、外标两点法。

1.标准曲线法

2.外标一点法

第三节高效液相色谱法

三、含量测定（一）原理(外标法)3、供试品溶液的制备取本品10支内容物，摇匀，精密量取1ml，置50ml量瓶中，加50%甲醇适量，超声处理20min，放置至室温，加50%甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。

本品每1ml含黄芩以黄芩苷（C21H18O11）计，不得少于10.0mg。四、案例（一）双黄连口服液中黄芩苷的测定4、测定分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5µl，注入液相色谱仪，测定，A对=16981.7，A供=38001.8。5、计算6、结果判断本品含黄芩苷的量为11.23mg/ml，符合药典规定。四、案例（一）双黄连口服液中黄芩苷的测定

7、注意事项

系统适应性试验

（1）色谱柱的理论塔板数（n）：

（2）分离度（R）：分离度应大于1.5。（3）重复性：相对标准偏差（RSD）不大于2.0%。（4）拖尾因子（T）：T应在0.95～1.05之间。第三节高效液相色谱法-

8、色谱图及其参数①保留时间tR；②峰高h；④峰宽W；⑤峰面积A。第三节高效液相色谱法色谱图及其参数

9、记录的相关内容

仪器型号、检测波长、色谱柱与柱温流动相与流速对照品批号与含量供试品与对照品的称量溶液的配制过程、进样量、测定数据实验数据等第三节高效液相色谱法第三节第六章中药制剂含量测定技术高效液相色谱法外标法可分为工作曲线法、外标一点法、外标两点法。

1.标准曲线法

2.外标一点法

第三节高效液相色谱法

三、含量测定（一）原理(外标法)五、应用实例三黄片（小片）中大黄素和大黄酚的含量测定第三节高效液相色谱法【处方】大黄300g盐酸小檗碱5g黄芩浸膏21g本品每片含大黄以大黄素（C15H10O5）和大黄酚（C15H10O4）的总量计，小片不得少于1.55mg。【规格】薄膜衣小片每片重0.26g1、色谱条件与系统适用性实验

以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-0.1%磷酸溶液（85：15）为流动相；检测波长254nm；理论板数按大黄素峰计算不低于2000五、应用实例三黄片（小片）中大黄素和大黄酚的含量测定2、对照品溶液的制备分别精密称取大黄素对照品0.02509g和大黄酚对照品0.06286g，置25ml量瓶中，加无水乙醇-乙酸乙酯（2:1）的混合溶液溶解，并稀释至刻度，摇匀，精密量取1ml，置100ml量瓶中，加无水乙醇-乙酸乙酯（2:1）的混合溶液至刻度，摇匀，即得。五、应用实例三黄片（小片）中大黄素和大黄酚的含量测定3、供试品溶液的制备取本品20片，除去包衣，精密称定（W=5.3100g），研细（过三号筛），取约0.26g，精密称定W供=0.2610g，置锥形瓶中，精密加入乙醇25ml，稳定重量，加热回流1小时，放冷，用乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续液10ml，置烧瓶中，蒸干，加30%乙醇-盐酸（10:1）的混合溶液15ml，置水浴中加热水解1小时，立即冷却，用三氯甲烷强力振摇提取4次，每次15ml，合并三氯甲烷液，蒸干，残渣用加无水乙醇-乙酸乙酯（2:1）的混合溶液溶解，转移至25ml量瓶中，并稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。五、应用实例三黄片（小片）中大黄素和大黄酚的含量测定五、应用实例三黄片（小片）中大黄素和大黄酚的含量测定第三节高效液相色谱法4、测定分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10µl，注入液相色谱仪，测定A对（大黄素）=463379，A供（大黄素）=285721A对（大黄酚）=478910，A供（大黄酚）=5380795、计算6、结果判断第三节高效液相色谱法五、应用实例三黄片（小片）中大黄素和大黄酚的含量测定第三节高效液相色谱法五、应用实例三黄片（小片）中大黄素和大黄酚的含量测定第三节第六章中药制剂含量测定技术高效液相色谱法

1.定义

采用高压输液泵将流动相泵入装有填充剂的色谱柱进行分离并测定含量的方法。

2.范围

适当于挥发性低、热稳定性差、分子量大、离子型化合物。第三节高效液相色谱法

3.特点

分离效能高、选择性好灵敏度高、分析速度快适用范围广（供试品不需气化，只需制成溶液即可）流动相选择性大流出组分易收集色谱柱可反复使用等第三节高效液相色谱法一、仪器工作原理（一）仪器的构造第三节高效液相色谱法高压输液系统色谱分离系统数据处理系统进样系统检测系统高效液相色谱仪的构造第三节高效液相色谱法

1.高压输液系统由贮液罐、脱气装置、高压输液泵、过滤器、梯度洗脱装置等组成。

（1）贮液罐（2）脱气装置①超声波振动脱气；②抽真空脱气；③加热回流脱气；④吹氦脱气；⑤真空在线脱气（3）高压输液泵：完成流动相的输送任务（4）过滤器（5）梯度洗脱系统第三节高效液相色谱法

2.进样系统进样器有高压进样阀、六通手动进样阀及自动进样器等装置。3.色谱分离系统色谱分离系统由保护柱、色谱柱、恒温装置和连接阀等组成。4.检测系统

（1）通用性检测器：蒸发光散射检测器（ELSD）示差折光检测器（RID）。（2）选择性检测器：可见-紫外检测器（UV）、二极管陈列检测器（Diodearraydetector）、荧光检测器（FD）、电化