基因工程基因操作的工具酶

3.3DNA聚合酶DNA聚合酶：能够催化脱氧核糖核苷酸连续加到双链DNA分子引物链的游离3’-OH末端，使核苷酸发生聚合作用，而不从模板上解离。反应特点：(1)以四种三磷酸脱氧核糖核苷（dNTP）为底物(2)反应需要模板的指导，加入的核苷酸由模板链所决定(3)聚合反应需要有引物存在，且引物要有3’-OH游离基团(4)DNA链的生长方向为5’3’(5)产物DNA链的性质与模板相同（半保留复制）

DNA聚合酶只能在已有的核酸链上延伸DNA链，而不能从无到有开始DNA链的合成。种类：到目前为止，已从E.coli中发现了PolI、PolII、PolIII三种DNA聚合酶。其中PolI和PolII的主要功能是参与DNA的修复过程，PolIII与DNA的复制有关。三种聚合酶中，只有PolI同分子克隆关系密切。3.3.1大肠杆菌DNA聚合酶I（E.coliDNAPolI）

DNAPolI是从大肠杆菌细胞中分离得到的，该酶是由单一多肽组成的球蛋白，MW=109000，直径=65ÅDNAPolI已得到高度纯化，从100kg大肠杆菌中可以分离到约500mg纯化的酶蛋白。每个成熟的大肠杆菌细胞中约有400个分子的PolI。1辈.牛D讲N杨A艇P燥o辩l顶I彻在踪蝶空渔间诵结编构曾上薯有废三宰个纠位林点肌：(拦1揉)胃D普N幅A肆模漂板央结中合呜位鞠点能—之—驱结趟合坚模猪板(祖2装)盘核奏苷挎酸嫂-略磷考酸冷结剩合坊位载点索—蛮—恶结纯合夜引遗物(模3锤)弟d饮N怀T挤P脱结丘合兴位社点剪—丹—附结积合搏底避物2责.鼠D援N雪A磁P茎o垃l宰I趣是呈一侦种忆多秃功鸡能连酶表：(添1库)棍5克’3庆’么的稳聚污合悦酶耻活特性催笔化赛单浪核骑苷盗酸烂逐举个给地杆结栏合粒到柔D渠N疤A猴模罢板体的泼3绒’倘-戒O俱H蒜末体端轧，雅沿央着标引厕物骨的雀3诵’适-吸O现H蔬方亲向吹按许模润板扣顺刃序命从昼5白’3蒸’前延劣伸逐。每客分疗子患D务N比A风p总o志l够I得每毁分亿钟篇可甚以赠催营化耍约忽1哨0奖0免0灿个尖核顿苷夜酸幼的摧聚器合尾。(仓2鼻)坡5暮’3耻’梯的顶外适切汁酶河活道性只调作贝用慎于免双椅链案D左N劣A夕（物d永s跑D揉N酱A塞）结，搬从哨5架’馋端酸切叫割因下屑一齐个稍个识单堪核统苷浓酸窜。(败3寇)膊3愁’5萌’活的宝外炉切怠酶禾活挺性能乞从始游生离帽的针3尚’拘末陆端坛降撒解博单怖链拜D嫁N晴A温（狡s嗽s镇D阳N裤A挑）犯成鬼为含单本核劈燕苷蔽酸眉，衬通故常踢对佳双最链D缝N黎A以不找作蛇用。在膨正谅常装聚冈合城条解件澡下山，祖该浊酶及对劈燕d表s久D质N练A刑的3筒’5深’即外劣切暗酶般活哈性植受饿到颜5央’3迈’屡聚怨合捉酶放活拉性古的圈抑伐制弹。些但饰一黑旦减出矮现肠错策配状碱德基倘时应，挥聚伐合利反泥应兆立选即螺停揪止垒，影由他3秧’5爬’葛外纲切蛇酶饱迅房诚速做除旗去妖错晚误贩进找入纽奉的告核忍苷争酸章，屠然村后租聚东合览反耻应培才裳得尝以沟继金续嚼进或行稿下然去胃。蜘所青以静3增’5价’细核伏酸仿外康切法酶累活拨力祥被榨认沉为厅起扒着茂校叔对呼功尊能圆，致对宅D挠N新A秧复携制巧的考忠盗实第性焰极终为挑重往要突。3宪.E档.单c嫌o捎l扭iD命N类A债P粒o扁l拍I市在荡基谷因酿工乐程礼中贤的鞠用纪途薄:(聪1站)可坑用恢于斥填汪补纽奉d为s臭D僚N访A喇上枕的耗缺眉口钞，与以漠便即有攻效四地母进伸行件D管N买A稳重早组(像2固)伞用牧于侍D秆N盼A波序摧列者分谜析(农3吴)霉用功于趟制泉备趋D贡N全A涨探咽针在相D裳N些A陕分渡子堪的手单弃链伞缺踩口利上锐，陕D摊N框A铅聚凑合婚酶架I引的傅5殖’3臂’袍核冷酸察外拉切浑酶灯活成性谣和掀聚两合梨作励用凑可神以宋同辉时泉发母生芹。难当容外较切应酶未活妥性复从诞缺乌口怀的歪5帐’振一秃侧辆移拳去之一睬个嫁5议’吃核围苷纷酸狠后在，胶聚紧合轧作倘用骄就味会养在畅缺混口剖的苦3石’士一蛾侧引补斤上替一生个怠新报的壁核吊苷澡酸互。漠随亩着酿反逐应久的叮进驻行尚，兄5吗’驼一谅侧录的跑核怎苷遮酸精不韵断释地秧被侦移都去义，攀3缘瑞’扑一命侧延的寄核沈苷屿酸贴又笋按反序悠地灿增奏补鲜，转于袜是技缺赞口繁便摸沿挥着肥D臭N膝A致分息子没按付合拘成和的悟方披向近移锹动粗—熊—缺钉口厌平犬移（培N挤i抵c贷k膜T寸r肤a伤n疑s犹l顽a吊t砍i兵o压n具）泄。应哨用绝缺冲口什平唉移培法擦制耕备前D惨N蕉A银杂帽交克探里针狭，动其塘典侮型扶的旬反伶应放体姑系葡是拒：毒在俗2锤5l睬总岩体福积默中介含向有畜1g弯纯兔化撕的贸特豆定仓的秩D影N锁A缎片旗段筛，棒并兵加尿入露适讨量遭的垮D笛N备a雹s蚕e衰I搭、贫p隔o菜l傲I堤、浴3税2Pd筝N羡T殿P服和每未蛇标蠢记籍的熟d罪N末T到P欧。脱筛氧暗核校糖勇核艇苷喇酸秀酶源I饮（摆D象N士a驻s粘e述I黎）细是脉一管种怎内仁切仰酶饺，偷它惊能针够盼水父解纯单押链恰或纷双青链直D愤N融A焰，糕形跌成耻带榴有路5夜’恢-漂磷很酸支末逼端值的副单百（卫寡奶）宫核演苷涂酸帜。由敏于3照2Pd倚N毁T氧P裳比陆较课昂姑贵局，溜所折以企一俘般泻都泳采猴用容低兰浓粱度绑的3仗2Pd券N隔T疮P悲（寺2m纺o各l安/山L油）胁和域高精浓坑度会的混未斜标留记攻的低d哗N拾T盗P懂（键2睁0m燃o茂l杜/智L粪）少。沫而蓝且勺就愧大兼多扎数言实隔验旨的私要合求止，艇使鲜用虎一步种3岔2Pd困N困T裹P增就永足鼻够高了阵，番其脾他度3唇种汽均堂可拴采车用暗未谎标拣记晓的皆d沉N亮T名P患，速或乡丰是者用皂适摊量萌的衡未套标弄记凉的扒d距N取T价P王稀额释黑每袜种3撞2Pd泪N火T杰P滤。改挺变栗反舍应仅体侦系柿中瞎D守N器a确s弊e亩I位的榆数托量欠，艰可境以浮控耳制3徐2Pd贱N增T弊P睁的员参艳入采程将度嘴，走一条般沙希毙望品有悠3冰0膀%剩左根右勾的3客2Pd办N遮T罢P碎参鹿入辱D专N否A湿链抖。3葱.痛3担.忠2异大庙肠敢杆险菌弓D饶N茧A贪聚樱合锄酶攻I功的松K此l锦e岩n匀o蜡w炕片决段（E伤.挺c端o荣l础iD尘N谅A尊P宇o细l污I衬K完l豆e凳n刺o泡w市f板r盏a锁g高m漠e笨n傻t兔）用寺蛋晴白递酶概将伐D毅N皮A堂P筒o秤l毅I扎作呆有巨限喘水耐解饲，增可捏得晨到构分乌子鸟量匪为焦7浅5漆0吊0还0徒d昼a秧l凑和玻3毛6储0冰0邀0愤d蜓a破l双的削两塘个条片敞段钉，梁大漏片职段纷即结称捧为脸K定l本e梯n兄o乏w宿片车段摩，殃它讽具刊有国5究’3品’袍的妙聚碧合咳酶膏活禁性继和卷3斜’5炸’闸的数核群酸扁外迅切腹酶损活语性击，途但工失滤去售了锣全驱酶勿的辆5回’3炮’论的粥核堂酸知外番切带酶油活快性饿。K围l皱e旬n吨o住w绵聚稼合上酶钓可购以扭标粘记猴D澡N代A科片确段锄末培端谷（辣5物’武延预伸磁末现端志）和。对殊于通限鸭制倍性乡丰核安酸脊内幕切慈酶E车c斑o滔R闻I切捐割弓后酷形尤成右的型5宁’呜延尼伸妇末钞端没可腰用钩3济2Pd才A伐T蜓P岸标分记御：而B宋a虚m驼H忍I火切跌割浅后捆形蝴成欺的议5具’候延盆伸习末拔端看可被用淡3酷2Pd垂G惑T肚P疾标歌记：3巩.艘3众.局3羞T4D盏N耗A赖聚尸合防酶是卷从俱T4噬辞菌鼠体趟感杂染泪的文大绑肠市杆伟菌汇中趣分欲离薪纯洋化领的稼一踢种掌特奶殊踢的蚊D飞N纤A愉聚数合写酶异。1忌.搞T4D逮N指A改聚院合枪酶辉也疯是蜜一固种鼻多耐功单能闯酶悲：(打1尖)搭5钢’3麦’艰的泛聚晕合但酶贿活房诚性(俯2握)捕3刻’5砌’锦的华外厉切蜓酶盐活纹性其屯外厕切弓酶伯活将性峡比E椒.屋c醒o籍l付iD认N穗A候P梨o革l徐I拳的哥活陈性抖高留2轰0敢0丙倍冰。(曲3迈)取妥代测反四应刊活鸦性如搏果沉在殃反攻应欺混最合勒物敏中桑仅岂存滥在花一惰种丙d蓄N钥T居P监，厌则铸此根酶凯的输3盛’5火’蛋外湾切姥酶辛活韵性耐将停从d话s廉D移N烧A吵的救3骑’顷末喇端秧降招解灭，芽直帝到暑互煎补木于济这饶个荐d谢N叫T董P翼的丝式碱萍基励出蜂现挂为举止出，浓然栏后胳在浆这想一执位慎置中发如生辆取货代禁反馆应管。2焦.殃T4D御N皮A节聚家合铜酶页在除基财因薄工嗽程脂中菠的袜应每用(宇1庭)字以球填商充害反转应江标盏记重带掩有鸭5拼’女延居伸摆末页端垄的构d崇s既D湖N傅A俩片吼段(果2盛)菊将线D土N另A踏的汇3脆’鹿延勺伸出末售端恰切堆成柿平翁末晨端(宏3毫)搅以舞取永代随反桂应疼标传记娃带行有袖3备’彻延锡伸京末存端盲或渠平胳末愈端逢的督d强s吼D勿N衬A怪片拳段(单4亏)立以刷部平分放消早化幕d保s昨D足N弹A厘法担标袖记圾D伏N质A的片杂段土作问为暖杂创交雷探牲针运（跳链圆特蝴异禁的优探常针玻）3毫.丙3孝.训4恳逆疤转帐录场酶是原一绞种耕有刺效精的痒转纲录止R福N杨A鼻成搅为孕D柄N治A际的栏酶势，桃又栋称主R经N韵A肯依桂赖患的念D帽N季A骑聚辛合丽酶掘，盐其甲产踢物职D椒N膊A撑称牲c沿D卵N墨A期，谈即荷互息补闷D答N柔A厌。1淹.籍逆猫转离录谦酶处也唇是缴一民个滴多喘功蛇能眨酶泳：(盆1忽)裳R绕N温A闭依钳赖千的工D浆N讲A纪聚侧合加酶以丧R膝N乡丰A活链峰为附模点板由，中以磨带青有窗3欲’动-抢O轻H偏末屯端沈的禾D帖N遇A彼片轿段暴为隆引掠物朗，啊沿貌5唯’3薪’逆方者向变合体成杆D召N尊A掀链浮。几毒乎罪所今有摄真伙核撤生杆物捧的腾m完R熊N找A症分灶子固3环’淘末伙端僵都挠有性一洁段集P日o李l厌y逗A狱，陶故棒加隐入肢寡典聚溜d御T非后甘，磨m闻R野N灰A胀就掩可华以歪成蛮为同逆拒转买录龄酶瘦很乌好产的阁模目板群，刊由广此俯可瓦合岸成悠c千D辽N洁A绕。(矛2庄)球D尿N弟A值依援赖搞的锦D债N早A垫聚岭合口酶以国s社s匹D桃N阀A本为炕模毕板萌，惰以损带希有悬3屋’矮-显O懂H投末地端虹的归D始N畜A着片酿段什为饮引完物刮，旧沿盆5隔’3锹’符方榴向广合跨成妹D罚N筐A属链毒。可轨在根新番合酿成免的贿D珠N严A土链采上桑合及成效另怕一步条蠢互燃补妥D析N叔A戴。(垫3街)铸外雀切旨R秀N说A抹酶秩活猪性底菌物叙是烦R想N垃A守-听D狐N营A厅杂牧交抵分体子规中鉴的星R剂N亚A民链燥，帮其建水菠解势方夫向件有搂两具种史：*欢从秃R缩慧N搏A竞链温5巩’挽末嫩端滑外匪切匪：制称踏5框’3勇’漂外配切铜R假N敬A沉酶*域从航R并N丈A杯链累3挎’仆末啊端梳外悉切足：担称极3荐’5灶’盖外掀切倾R很N堤A灿酶2招.侨逆洪转减录桂酶绢在滤基警因芒工插程若中淋的菊应母用胆：主脂要寇用乞途汁是漏转啊录期真件核逼生拴物呼的建m密R卫N疗A殖成叉为枯c坐D悟N晌A虑，享从总而陶制烂备党基吊因拌片担段漏。3捞.划商慎品阵化厌的寺逆请转拳录内酶钻有爽两掩种州：(岁1袜)答禽努成筒髓融细忙胞初瘤降病家毒景（呀A冻M萍V订）帝逆配转段录环酶(昆2拣)攻M烛o誉l其o扰n膊e救y也鼠妹白丝式血搬病期病康毒桨（倦M殿o蜻-臂M杰L迁V拼）林逆熟转剃录虫酶A夜M竭V绸逆薪转戴录呈酶薯虽交能归更混有穗效慈地产拷垄贝司复隔杂搅的块m凡R佣N厉A减，祸但炊它捐有厨很析强腿的捡外蒙切惑R惊N谨A盯酶宝活卷性假。护而抱M酱o辈-绸M重L荷V卵逆娱转誉录携酶骑的冈外叠切先R争N箩A强酶窄活妄性帖较育弱阶，福更目有唤利折于蝴制励备镰全漂长膊的跃c芝D姨N漠A纠。两即种征逆祥转建录婆酶盏均光无躬3品’5泼’靠外顽切繁D氏N撕A每酶笼活退性侮，链故狡不秒具赠备滚校翅对策功歪能碗，斑在糟高牛浓话度职d意N谊T些P明和来M旨n2殿+存台在尚下赶，盏容迟易音出臭现浑核痒苷宵酸拔错掘误怎掺顺入酿。3颂.精4由D占N无A私和盈R旅N瘦A株的殖修简饰饭酶3败.殿4金.良1肆核揉酸绳酶题S材I1懂.阵作容用咸特死点爱：此艇酶挥是统从皆米轻曲宪霉忧（A挂s滨p殃e棉r厨g象i重l蝴l蚂u吊s砌o溉r跌y归z常a吗e）宾中握提族取薄的档，智可迷降很解意s造s辅D甩N佛A软或仪s势s影R里N馒A泥，捐又抽称饮单电链纺特趴异罪性骑酶屈，改其预降口解戏产雄物付是招5秀’副-待磷梢酸颜末鱼端盐的粱单趟或仙寡坊核别苷补酸敏片晋段罪。核轻酸障酶疑S饥I曾对屈D泡N忘A昨底辱物妄的闪活喊性驻比性对衔R御N象A部强治。奇高宽浓典度抵的虾核咳酸感酶茄S队I制可吨从剂缺息口跑（上n茄i骡c陪k载）树或俱小芳裂舟缝叔（愚g灵a塘p浇）反处教降苦解摩d驶s兴D戏N链A费。2克.尿作拴用句条演件闲：需毁要盯Z名n2董+作膝为吊辅薯助睬因恰子赔，史最踪蝶适燥p研H念是扮4毙.闪5亏，锦这矿是以与肠基罚因挤工晌程科的嘱其药它扒工丘具恶酶忍不明同容的才两提个唉特寇点韵。3榴.喉在象基艇因巴工锁程杀中并的胁应园用测：由禽于毫核惜酸遗酶副S蜡I税能粒从捡D忘N锐A稻片蒙段链中麻切再除呜单稳链五尾鼓巴雀，遗因垂而侄在册质再粒怎的债重毯建急和疫D冤N膏A雁重蛇组蒙中品被骗广英泛稻使园用谎。切教除竿单汇链吸粘续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