丙型肝炎病毒抗体检测标准操作规程

丙型肝炎病毒抗体检测标准操作规程××医院检验科临床免疫室作业指导书文件编号:XXX生效日期：共页第页1.目的建立检测血清中丙型肝炎病毒抗体含量的标准操作规程，保证实验结果的精确性及正确性。2.原理LISA用双抗原夹心法进行检测，用合成HCV多肽抗原或基因重组HCV抗原(包括结构区抗原及非结构区抗原)包被酶联板，以辣根过氧化物酶(HRP)标记抗人IgG，洗涤除去未结合的游离酶，以四甲联苯胺(TMB)为底物，显色测定。2．2·采用电化学发光法进行检测：采用“三明治”法，吸取40μl样本与60μl生物素化HCV抗原以及60μl钌复合体标记的HCV抗原一起孵育，反应形成“三明治”样抗原抗体复合体；再添加包被链霉素的磁珠微粒进行孵育，抗原抗体复合体与磁珠通过生物素和链霉素的作用相结合；将反应液吸入测量池中，通过电磁作用将磁珠吸附在电极表面，未与磁珠结合的物质被去除。然后，给电极加以一定的电压，使复合体化学发光，并通过光电倍增器测量发光强度，通过检测仪的校准曲线得到最后的检测结果。3.标本要求根据试剂盒说明书要求收集存储样本，血清标本采集用标准样本试管或含分离胶的试管，血浆样本采集使用肝素(Li，Na)或K3EDTA，一般来说，标本在2~8℃可稳定7天，－20℃可稳定6个月。4.试剂与仪器4．1·试剂组成和仪器(酶联免疫吸附法)：试剂组成一般如下：包被抗原板、底物A液、用仪器为酶标比色仪。4．2·试剂组成和仪器(电化学发光法)：试剂组成一般如下：链霉亲和素包被的微粒、DTT、生物素化的HCV特异性抗原、Ru(bpy)2＋3标记的HCV特异性抗原、Cal1校准液和Cal2校准液、AntiHCV质控品1和2。采用仪器为全自动电化学发光分析仪。5.操作步骤5．1·ELISA方法(具体操作参照试剂说明书或所在科室制定的SOP)l白孔只加底物和终止液)，可设置外部质控品1孔，用即时纸拍干。指纸拍干。长为450nm，进行相应的比色测定。5．2·电化学发光法(具体操作参照试剂说明书或所在科室制定的SOP)：开机后仪器自y6.校正(电化学发光法)每开启一批新的试剂，需在输入批数据后进行校准，之后按照试剂说明书(如每隔28日或出现结果异常等情况时)需再进行一次校准。校准品在同一次运行中必须重复测定2次，且校准值必须在设定的范围内。如果不在该范围内，则应重新校准。7.质控(电化学发光法)一般采用两种浓度水平的质控品，至少每24h或每一次校准后测定一次。质控间隔期应适用于各实验室的具体要求。质控品检测值应落在设定的范围内，如出现质控值落在范围以8.结果判断8．1·ELISA方法(具体操作参照试剂说明书或所在科室制定的SOP)：终止后测OD值。本的结果以有反应性或无反应性以及cutoff指数形式(标本信号／cutoff)报告。样本的COI值＜0．9判断为无反应性。样本的COI值≥1．0判断为有反应性。所有初次检测有反应性的样本必须重复双份检测。样本的COI值≥0．9且＜1．0判断为临界。所有临界样本必须重复双份检测。如果2次结果均为无反应性，样本可判断为抗HCV阴性。如果重复检测结果均为有反应性或一个有反应性，一个临界，则该样本判断为重复有反应性。重复有反应性的样本必须进行补充实验(如免疫印迹分析或HCVRNA检测)。如果重复检测结果均为临界或9.生物参考区间ELISA方法：阴性；电化学发光法：阴性。10.性能参数具体参见相应的试剂说明书。11.临床意义HCV为单链RNA病毒，主要通过血液及其制品传播，输血后肝炎多数为C型肝炎，母婴传播也有可能。潜伏期35~82天，临床表现类似乙型肝炎，但肝细胞坏死、慢性化和癌变倾向性较大，在重症肝炎中检出率高达50％左右。常与HBV合并感染，当乙型肝炎迁延不愈、活