熊果酸的含量测定

野蔷薇根中熊果酸的提取工艺研究努尔皮达•阿卜拉江，其买古丽•阿沙木，迪丽努尔•马里克基金项目：国家自然科学基金(基金项目：国家自然科学基金(21165018)项目资助作者简介：努尔皮达，女，(维吾尔族)硕士研究生，主要从事天然产物的研究。联系作者：迪丽努尔.马里克(1964-)，女，教授，主要从事天然产物研究。(pkudilnur@)(新疆师范大学化学化工学院，新疆乌鲁木齐840054)摘要：目的：优选野蔷薇根中熊果酸的超声提取工艺。方法：使用超声波提取法，采用L9(34)正交设计实验，用高效液相色谱法测定熊果酸的含量，确定最佳提取工艺条件。结果表明：野蔷薇根中熊果酸的提取最佳工艺是超声功率为600W，超声频率为工作5s间歇5s，料液比1：25，提取时间为30min，各因素的影响依次为超声波频率>超声波功率〉料液比和提取时间。结论：超声辅助提取野蔷薇根中熊果酸是一种简单、快捷、高效的提取方法。关键词：野蔷薇；熊果酸；超声提取；HPLC法StudyonextractiontechnologyofUrsolicacidinRosamultifloraThunbNURPIDA-Ablajan，QIMANGUL-Hasan，DILNUR-Malik(Schoolofchemistryandchemicalengineeringxinjiangnormoluniversity，Urumqi830054)Abstract:objective:tooptimizetheultrasonicextractionofUrsolicacidinRosamultifloraThumb.Method:byutilizingtheultrasonicextractionmethodandusingtheorthogonaltestofL9(34),withhigh-performanceliquidchromatography(HPLC)todetermineursolicacidcontentandtheoptimumextractionconditions.Theresultsshowthattheorderofeachfactoraffectingtheextractionwasultrasonicfrequency>ultrasonicpower>ratioofliquidtomaterial>extractingtime,andtheoptimumconditionsofextractingursolicacidfromtherootofwildroseswereasfollows:ultrasonicpower600W,ultrasonicfrequencyofrestingfor5sintheworkingperiodof5s,ratioofliquidtomaterial1:25,extractingtime30min,.Conclusion:theultrasonic-assistedextractingofursolicacidfromtherootofwildrosesisasimple,quickwayofextractionwithhighefficiency.Keywords:Rosamultiflora;ursolicacid;UltrasonicExtraction;HPLCmethod熊果酸(Ursolicacid)，又名乌苏酸、乌索酸、a-香树脂醇，是一种弱酸性五环三萜类化合物［1］。熊果酸纯品为白色针状结品(乙醇中结品)，味苦，具有多种生物活性，有镇静、抗炎、抗菌，降低血糖，抗肝炎⑵等多种生物学效应，熊果酸还具有明显的抗氧化功能⑶，所以是一种很有开发价值的植物活性成分，被广泛地用作医药和化妆品原料，日本等国家已经将其作为天然抗氧化剂应用于食品中［3］。新疆野蔷薇（Rosaspp）富含多种人体所需的营养物质［4-5］,有较大开发利用价值，现代研究证明，野蔷薇中含有熊果酸、齐墩果酸等三萜类化合物6］。本文以野蔷薇根为原料，采用近几年兴起的新方法超声波法提取熊果酸，通过研究优化该方法工艺条件，旨在提高熊果酸产率，为进一步开发利用野蔷薇提供参考。材料与方法1.1材料、试剂与仪器野蔷薇根：采自阿勒泰县，粉碎，过筛，备用。熊果酸标准品（中国药品生物制品检定所，批号110709-200304）；甲醇（色谱纯）；超纯水；乙醇（分析纯）。高效液相色谱仪（安捷伦1200LC，美国）；色谱柱（安捷伦公司HC-C184.6x150mm，粒径为5pm）；JY92-2D超声波细胞粉碎机（波新芝生物科技股份有限公司）；旋转蒸发仪（上海亚荣仪器有限公司）。1.2试验方法1.2.1超声波提取样品液的制备精密称取野蔷薇根粉末2g，按一定料液比，加人不同体积分数的乙醇，浸泡4h，于不同超声频率、不同功率下超声处理不同时间，静置放冷，滤过，重复2次，合并滤液，回收溶剂至十，残渣用甲醇溶解定溶于50mL容量瓶中，作为测试样品。1.2.2熊果酸提取率的测定方法色谱条件AgilentHC-C18（4.6mmX150mm，粒径为5pm）色谱柱；流动相为甲醇：水=50:50；流速0.5mL/min；检测波长为278nm；柱温室温；进样量为10pL。标准曲线的绘制精密称取干燥至恒重的熊果酸对照品3.3mg，置于5mL容量瓶中，甲醇溶解并稀释至刻度，得含熊果酸0.66mg/mL标准溶液，置4°C冰箱中保存。用母液依次配置浓度为528pg/mL、396pg/mL、264pg/mL、132pg/mL的标准溶液，进样10pL，测定峰面积。以峰面积平均值为纵坐标，其对应进样质量浓度为横坐标，进行回归计算，得线性方程为：y=39.197x-850.99，相关系数（R2=0.9977）。熊果酸浓度在132〜528pg/mL，线性关系良好。

精密度实验精密吸取熊果酸对照品溶液（52叩g/mL）10四L，进样，连续测定5次，测定熊果酸对照品峰面积的RSD为1.62%（n=5）,结果表明仪器精密度良好。加样回收率试验精密称取已知含量的野蔷薇果皮0.20g,共5份，分别精密加入一定量的熊果酸对照品，按供试品溶液制各方法制备，采用上述色谱条件进行测定，结果表明，其平均回收率为101.8%，表1加样回收率试验结果（n=5）Tab.1Exprimentresultofsampleinjectingrecovery样品序号样品含量/mg加样量/mg测得量/mg回收率/%平均回收率/%RSD/%10.5210.5281.04198.48%20.5420.5281.05096.21%30.5320.5281.04697.35%97.73%1.02%40.5180.5281.03998.67%50.5250.5281.04297.92%1.2.3样品测定取测试样品用0.45pm微孔滤膜过滤，精密吸取10J11，按上述色谱条件进行测定。重复进样三次，取均值，根据回归方程计算熊果酸的量。色谱图见图2。mAU g150100■SO-25:图1熊果酸对照品HPLC色谱图Fig.1HPLCchromatogramofcomparativeursolicacid

七Fig.2HPLCchromatogramofsampleursolicacid图2熊果酸样品HPLC七Fig.2HPLCchromatogramofsampleursolicacid图2熊果酸样品HPLC色谱图上面的图可以看出这两个图的保留时间相等分离效率也比较好，说明在此条件下熊果酸峰与杂质峰能得到较好分离。1.2.4野蔷薇根中熊果酸提取工艺优化正交实验因素水平设计：根据已有的资料和实际情况，选用提取时间(A)、超声频率(B)、超声功率(C)和料液比(D)作为考查因素，以野蔷薇果皮中熊果酸的提取效率为考查指标，选用L16(44)正交表，因素水平见表2。表2实验因素及水平Tab.2Fantorsandlevels水平因素A功率/WB超声频率C时间/minD料液比/g/mL1200工作5s间歇5s101：202400工作6s间歇4s201：253600工作7s间歇3s301：30结果与分析2.1正交试验结果与数据分析用HPLC法测定样品中熊果酸的含量(以每g野蔷薇果皮中含熊果酸mg计)的结果如下表3。表3L16(44)正交试验设计及结果Tab.3ResoutsofL16(44)orthogonaltest试验号超声功率A频率B时间C料液比D提取量mg/g111112.112212221.842313331.657421232.085522311.925623121.731731322.327832131.876933211.749k11.87032.1751.9061.929k21.91371.8811.8921.9667k31.9841.7121.96971.873R0.11370.46270.0780.094由试验结果并通过极差R的大小可知,各试验因素对熊果酸提取率影响的大小次序为：B>A>D>C，即对野蔷薇果皮中熊果酸提取影响最大的因素是超声频率，超声功率和料液比影响次之，超声时间影响最小。最佳提取工艺条件为：A3B1C3D2，，即超声功率为600W，超声频率为工作5s间歇5s，料液比我1：25，提取时间为30min。2.3正交实验结果的验证按2.1正交实验的最佳工艺条件进行1.2.1实验，平行三次，取平均值，得最佳提取条件下熊果酸的提取率为2.426mg/g。结论野蔷薇根中熊果酸的最佳提取工艺参数：超声功率为600W，超声频率为工作5s间歇5s，料液比我2：25,提取时间为30min。。在最优因素水平组合条件下，熊果酸提取率为2.426mg/g。超声辅助提取野蔷薇果皮中熊果酸主要是利用超声波的空化作用，即一定频率的超声波对细胞的破化有助于有效成分的溶出，另外超声波的次级效应，如机械振动、乳化、扩散、击碎、化学效应等也能加速欲提取成分的扩散释放并充分与溶剂混合，有利于提取。采用高效液相色谱法对熊果酸的含量进行分析，建立了快速，简便，灵敏的HPLC测定方法。分析结果表明，该方法简单快速，高效灵敏，重现性好。[1]孟艳秋，陈瑜，王丹.熊果酸的研究进展[J].中国新药杂志.2007,16(1):25〜27⑵王鹏等.熊果酸在药用植物中的分布及药理作用[J].中药材，2000,29(6)：420BalanehruS，NagarajanB.Protectiveeffectofoleanolicacidandurso-licacidagainstlipidperoxidation.BiochemInt，1991，24(5):981-984.梁颂华，周文革.新疆野蔷薇果汁工艺研究.食品与发酵工业[J].2008,28(2):84-86杜英华，陈保国,贾洪斌.刺玫果营养成分的分析测定.内蒙古石油化工[J].2002,28(4):24-25PangNN,MalikeD,LiuHW.SimultaneousDeterminationofMainBioactiveComponentsinRosamultifloraThunb.andTheirFragmentationStudyby