血液样本的采集与处理方法

血液样本的采集与处理方法一、血液样品采集方法

(一)采血的物品准备采样箱、针头、塑料试管、5ml或10ml注射器、离心管、离心管架、酒精棉球、干棉球、(猪嘴套)、不干胶标签、签字笔、记号笔、采样单、乳胶手套、防护服防护帽、一次性手套、一次性鞋套等物品。（二）、各种动物采血方法1、家禽血液采血方法：翼下静脉采血、心脏采血、跖骨内侧静脉采血、右侧颈静脉采血

采血方法的选择，主要取决于采血的目的、所需血样或血清的数量以及家禽的种类、年龄等。凡用血量较少的检验如血液涂片、鸡白痢全血平板凝集验等，可刺破冠、脚蹼皮下静脉等组织，以吸管或毛细吸管直接取新鲜的血液；用中量血时可从颈、翅静脉血管采集；当需血量较多时可以从心脏采集。雏鸡（1～30日龄）、水禽可采用跖骨内侧静脉采血法，成鸡（30日龄以上）可采用翅内侧翼下静脉采血法。

（1）翼下静脉采血法此法适宜于30日龄以上的家禽，尤其是成鸡，不适用于雏禽和水禽。雏禽翼下静脉较细，且水禽羽毛丰厚，采血时须拔去绒羽会造成皮下毛细血管血液渗出，不易看清静脉位置，另外翅内侧皮肤松软，血管位置不容易控制，采血时容易滚针，造成翅部瘀血，影响其活动及采食，也容易造成感染，影响经济效益。将被采鸡只翅膀展开，露出腋窝，将羽毛拔去，即可见到明显的翼根静脉，翅静脉是由翼根进入腋窝的一条较粗静脉。用75%酒精消毒皮肤，抽血时用左手拇指、食指压迫此静脉向心端，血管即努张。右手拿注射器，针头由翼根向翅膀方向沿静脉平行刺入（约与皮肤呈15°角）血管内，即可抽血。★持针时手要稳，进针不宜过深，如刺穿血管，则很快引起皮下血肿，导致采血失败。（2）跖骨内侧静脉采血法优点：①易于保定，血管位置明显，血管不易滚动；②各个日龄的禽只均适用，尤其适用于水禽和雏禽。助手一手固定两翼根部，另一手固定一脚，使禽侧卧，禽脚朝向采血者。采血者左手固定另一脚，按住跖骨内侧的静脉，使腿部静脉突起，常规消毒后，右手持注射器与跖骨皮肤呈10°角顺血管方向进针取血。跖骨内侧静脉采血是向心方向采血，采血时要注意进针角度不能太大，回抽活塞的速度也不能过快。对日龄很小的雏禽，术者用左手中指及无名指夹住左腿，暴露跖骨内侧静脉，方法同上。雏禽的血管细小，血流量很少，所以在抽血的过程中要特别缓慢。◆趾静脉采血：鸭、鹅仰卧保定，用手将两脚固定，使趾部不动。◆先将鸭侧卧保定,抓住鸭的小腿,在最上一个腿趾,跗关节上方,有一小腿静脉。（3）右侧颈静脉采血法左手以食指和中指夹住家禽头部，并使头偏向左侧；常规消毒后，以拇指轻压颈椎根部以使静脉充血怒张。右手持注射器，挑破皮肤，倾斜30°左右角刺入静脉取血液。右侧颈静脉较左侧粗，故常采用右侧。（4）心脏采血法心脏采血对心脏损伤较大，也易伤及其他脏器，造成内脏出血，影响正常生长，甚至会造成死亡，特别是雏鸡，常因针头刺破心脏和肝脏导致出血过多而死。心脏采血虽然较有难度，但是采血速度快、血量多、效率高，尤其适用于需要多量血液时采用。①4周龄以内雏鸡：先用手固定鸡的翅膀，使鸡胸骨脊朝上，用手指触摸鸡的心脏三角区，胸骨的前端，两侧锁骨融合成“V”字形的地方（鸭、鹅两锁骨的联合处较圆），能摸到心脏搏动最明显的地方用酒精棉消毒后，以9-13号针头（5ml注射器），呈45度角刺入2-3厘米至心脏，即可采得心血。★但要保持针尖指向胸腔中线，不宜偏斜（否则会刺伤肺组织），直至刺入心房，即可缓慢抽取血液。鸡心脏采血应在嗉囊空虚时进行，较为方便。②助手右手抓住鸡双腿，左手握住两翅膀，使鸡右侧卧，左侧面向上，放在小桌或小凳子上。术者自龙骨突起前缘引一直线到翅基，再由此线中点向髋关节引一直线，此线前1／3和中1／3的交界处有一凹陷，即是心脏采血进针的部位，食指触摸该处可感觉心跳（15日龄内雏鸡更明显）；或找出由胸骨走向肩胛部的皮下大静脉，心脏约在该静脉分支下侧。局部拔毛，常规消毒，用7＃~9＃针头的采血器从肋骨间隙垂直进针，一般刺入2～3cm如不回血可调整进针深度,直至回血为止。若调整几次后仍不回血,可抽出针头,在附近重新垂直刺入,切不可在鸡胸腔内任意调整针头方向乱刺。若刺入心脏,可在1min内采血3mL以上。2、猪采血方法猪血液样品的采集方法采血位点猪的类型针头规格采血量方法评价前腔静脉≤45kg45-133kg成年猪20号（38mm）18号（65mm）16号（90mm）不限量可能损害迷走神经；可用真空管颈静脉所有年龄猪20号（38mm）不限量难采，可用真空管耳静脉成年猪20号（25mm）或用刀片1-2ml易形成血肿，血样易污染尾成年猪20号（25mm）5-10ml要有经验，可用真空管眼眶脉窦≤18kg18~54kg＞54kg至成年猪20号（25mm）16号（38mm）14号（38mm）5-10ml采样慢；不雅观；易造成采血后框内出血而压迫眼球股静脉采血法因其容易污染形成静脉炎而淘汰挠头静脉采血法隐静脉采血法（1）、前腔静脉采血①熟悉猪前腔静脉的解剖学位置及解剖学特点要想做到准确进针,首先就要了解猪前腔静脉的解剖学构造,充分掌握理论知识是进行该技术练习的第一步。位置：前腔静脉是汇集头、颈、前肢和部分胸壁血液的静脉干。在胸前口处由左、右腋静脉和左、右颈内、外静脉汇合而成，位于气管和臂头动脉总干的腹侧，在心前纵隔内向后延伸，注入右心房。采血部位就在一肋骨与胸骨柄结合处的前侧方呈两个明显凹陷窝。根据解剖学位置判定,针头刺入方向呈近似垂直并稍向中央及胸腔方向，刺入深度依猪体大小而定，一般在2.0一6.0厘米，依此而选用适宜的16—20号针头。一般30kg以下猪宜用9#25mm(一次性注射器常配的针头)，30kg以上猪宜用12#×38mm针头。特点：猪前腔静脉离头部越近,则离皮肤越浅,静脉越细,越向胸部静脉越粗,离皮肤越深。1周龄猪直径约5mm,成年猪约1cm。采血时应根据猪的大小、肥瘦程度选择适当的进针部位。如小猪采血部位太靠前,则会由于血管太小很难扎中,因此,小猪采血部位应略微靠后,而中大猪由于血管比较大,如果太往后,针头就无去扎到血管,所以,大猪采血部位应略微靠前。根据实践经验,一般30kg以下的小猪进针部位应在两前肢与气管交汇处,30kg以上的中大猪进针部位可选在颈部气管两侧的低凹处。②方法:根据猪的大小确定站立提鼻法、手握前肢倒提法还是仰卧保定猪只。由助手将保定绳套于猪口腔上颌(在犬齿之后)行站立保定，将头向上拉起约30。角，头部偏向左侧，采血部位为颈部下方最低凹处，即两前肢腋窝与气管交汇处(在颈下部沿中线伸延之间)。采血部位先用酒精棉球消毒，采血员手持注射器，进针前可先用拇指轻轻下压以固定血管避免滑动，针头偏向气管约l5。角方向刺入血管，轻拉注射器活塞即见血液流入针管，抽取所需血量即可。★无论是前腔静脉还是从颈静脉采血均以选择右侧为宜。因为右侧的迷走神经分布到心脏和膈的分支较左侧少。如果迷走神经被意外刺中，猪会表现出呼吸困难、全身发绀和抽搐。实际上，操作熟练后，针头有没有扎中，凭手是可以感觉得到的，当针头扎破静脉壁时，可以感觉得到轻微的“卜”的一声。②、注意事项A做好保定按照猪体大小，采用不同保定方式。保定后要使猪体相对稳定，不再左右摇动。（采用站立保定，使金属环保定，要将头部向前牵引，并稍稍抬高，使头颈和体躯呈直线状，这样两侧胸前凹陷窝会充分暴露）。B找准进针部位保定后，要选择最佳采血点，即为猪两侧胸前凹陷窝。凹陷窝可用目测，也可用手指沿胸骨柄两侧触摸（胸骨柄最高点至第一肋骨间Icm处有一凹陷的感觉），要掌握在左右两侧凹陷处进行，进针时要掌握好一定的方向、角度和深度。特别是对仔猪采血时，不能太猛、太深，以免刺伤心包或心脏。如针头未扎入血管，可轻轻上下移动针头，直至针筒流入血液为止。但须注意的是，进针后摆动不要过大或反复多次进针，以免损伤血管造成血肿或伤及气管。（2）、耳静脉采血：将猪站立或横卧保定，耳静脉局部按常规消毒处理。一人用手指捏压耳根部静脉处或用胶带于耳根部结扎，使静脉充盈、怒张（或用酒精棉反复于局部涂擦以引起其充血）；术者用左手把持猪耳，将其托平并使注射部位稍高；右手持连接针头的注射器，沿耳静脉使针头与皮肤呈30～45o角，刺入皮肤及血管内，轻轻抽活塞手柄如见回血即为以刺入血管，再将注射器放平并沿血管稍向前伸入；解除结扎胶带或撤去压迫静脉的手指采血即可。★耳部有静脉和动脉，动脉血清少，耳中部的血管是动脉，尽量不采此血管。（3）、腋(臂)静脉采血保定方法:将猪侧卧保定,由助手往后用力扳住猪身体上方的前肢,使之极度向后伸展,即可暴露术部。采血部位:在猪前肢极度向后伸展的情况下,腋部皮肤绷紧在腋窝前方隐约可见1条前后走向的血管(皮下脂肪薄的猪更明显)术者一手按住向心端,一手持采血器成15°角进针,回抽采血器,如果回血即为刺入,可在1min内采血3mL以上。★此法多用于架子猪。3、牛、羊（1）采集少量血液，可容易地在耳背静脉采取。穿刺部剪毛消毒，涂以少量的油脂，以使血液呈滴状，便于采集。（2）牛、羊颈静脉采血：将动物保定，稍抬头颈，于颈静脉沟上1/3处交界部剪毛消毒，一手拇指按压采血部位下方颈静脉沟血管，促使静脉怒张，另一手执针头，垂直刺入，血液顺器壁流入容器内，防止气泡产生，待血量达到要求后，拔下针头，用消毒棉球按压针眼，轻按止血。（3）牛尾静脉采血：固定动物，使牛尾往上翘。在离尾根10cm左右中点凹陷处(第4、5尾椎骨交界中点凹陷处)，先用酒精棉球消毒，然后将采血针头垂直刺入（约1cm深）针头触及尾骨后再退出1mm进行抽血，采血结束，消毒并按压止血。4、注意事项：1凡采血时,采血器针头的斜面一定在进针时背对血管,即进针时针尖的斜面朝外,朝向术者。当抽血时,可适当调整针尖斜面方向。（进针时针尖斜面朝外容易刺进血管。抽血时,调整针尖斜面角度,可以避免针尖斜面贴紧血管内壁而不出血液,从而误导术者,误以为刺穿血管或没有刺入血管。）2当回抽采血器太快,太猛时,针尖斜面最容易紧贴血管内壁而抽不出血液。二、血清分离（一）动物血容量和允许采血量种类全血量（毫升/公斤体重）血量占体重百分比（%）一次性最大安全采血量（毫升/公斤体重）受检血液量（毫升）鸡95.5±24.08.80-10.09.901.00猪69.4±11.55.00-6.006.605.0-10.0山羊71.0±14.06.0-7.06.602.0-20.0绵羊58.0±8.506.00-7.006.605.0-20.0乳牛57.4±5.006.00-7.007.7010.0-20.0（二）、制备血清样品的步骤一般如下：1．核对实验室所需血清量，确定所需采血量。2．将采取的血液样品试管呈最大斜面倾斜，并置室温或37℃3．用光洁而干燥的竹签将血凝块从管壁徐徐剥离并继续加温，促使血清析出。4．待大部分血清析出后，中速(2000-2500转/分)离心5min，分离血清。5．分离血清用头子尖而细的玻璃吸管特血清吸移到另一清洁而干燥的试管里，贴上标签。6．检查血清是否溶血，剔除溶血的血清样品。★引起溶血的常见原因是：采血用的注射器或试管不干净；用注射器抽血后未卸下针头而将血液撼力注入试管中；强力摇动血液或血液离心速度过高；冷藏温度过低；采血时压迫静脉过久等等。★防止溶血的方法：采血用的注射器、针头、试管等器具必须清洗干净；采血后卸下针头再将血液沿管壁徐徐注入试管内；不要过多过早剥动血凝块；低温能使红细胞脆性增大，应将血液放于37℃中预温半小时后再用竹签将血凝块从管壁剥离，并继续加温，使血清析出，如果不能及时检测，血液应放于4℃保存。（三）、注意事项1、对制备血清的动物进行采血时间宜在早晨空腹时和午后进行。此间所采集的血液所析出的血清质量好于其它时间所采集的血清质量。2、采集的血液在36小时内必须将血清析出。之后析出的血清将因血红细胞溶血进入血清内而使血清呈淡红色。影响血清的质量，进而影响对动物重大疫病的实验室诊断的准确性。3、尽量不采动脉血，不但不易出血清，且易混凝。4、因为材质不同，塑料试管要比注射器针管析出的血清量多。5、一般情况下，在5d内测定的血清样品可放置于4℃的冰箱中冷藏保存；样品待检时间超过1周的，需－156、血清从低温冰箱取出后，最好经4℃冰箱、室温、37血清物理性状血清混浊，呈灰或者淡黄色半透明状，严重者呈蛋黄不透明；部分血液不凝集，表面析出胶冻样物质并凝结；高速离心后，表面附一层白色油乳状物质，-20℃冻存后呈现不溶或溶解后分层。推测发病原因主要有以下几点：★使用高能低蛋白饲料及其育成期未合理限饲，碳水化合物会加速乙