药物的含量测定方法与验证

药物的含量测定方法与验证第1页，课件共55页，创作于2023年2月药物的含量指药物中所含的主成分的量，是评价药物质量的重要指标。定义第2页，课件共55页，创作于2023年2月基础目标基于化学或物理学原理的含量测定药物的含量测定基于生物学原理的效价测定本章的目标含量测定生物检定法，微生物检定法，酶法第3页，课件共55页，创作于2023年2月药物的含量测定三种分析方法特点特点特点适用于准确度与精确度要求较高的样品测定容量分析法光谱分析法色谱分析法操作简单、结果准确，耐用性高，但专属性差简便快速、灵敏度高，有一定的准确度，但专属性稍差灵敏度与专属性都高，有一定的准确度，但结果需要对照品适用于灵敏度要求较高，样本量较大的分析项目适用于专属性和灵敏度要求较高的复杂样品第4页，课件共55页，创作于2023年2月第一节定量分析方法的分类与特点一、容量分析法定义亦称特点适用范围滴定法将已知浓度的滴定液（标准物质溶液），由滴定管滴加到被测药物的溶液中，直至滴定液与被测药物反应完全（通过适当方法指示），然后根据滴定液消耗的浓度和被消耗的体积，按化学计量关系式计算出被测药物的含量。通过指示剂颜色变化，或者电子设备的电位或电流突变来指示滴定终点1、方法简便易行：所用仪器价廉易得，操作简便快速2、方法耐用性高：影响测定的试验条件与环境因素少3、测定结果准确：误差低于0.2%，满足准确度高样品4、方法专属性差：对相近杂质干扰缺少选择，适用于主成分含量较高的样品分析广泛应用于化学原料的测定，较少应用于药物制剂的测定。第5页，课件共55页，创作于2023年2月容量分析法有关计算滴定度：每1ml规定浓度的滴定液所相当的被测药物质量。《中国药典》用毫克（mg）表示。例如：用碘量法测定维生素C的含量时，《中国药典》规定：每1ml碘滴定液（0.05mol/L）相当于8.806mg的维生素C（C2H8O6）第一节定量分析方法的分类与特点第6页，课件共55页，创作于2023年2月被测药物滴定液滴定度计算滴定液反应的质量被测药物反应的质量被测药物的摩尔质量滴定液的摩尔质量第一节定量分析方法的分类与特点容量分析法有关计算第7页，课件共55页，创作于2023年2月示例一计算Vc的滴定度T碘量法测定Vc含量[M(C6H6O6)=176.13]，C(I2)=0.05mol/LMb=0.05mol/L11MA=176.13第8页，课件共55页，创作于2023年2月示例二异烟肼的滴定度溴酸钾法测定异烟肼含量[M(C6H7N3O)=137.14]，C溴酸钾=0.01667mol/Lab第9页，课件共55页，创作于2023年2月直接滴定法间接滴定法在实际工作中，滴定液的浓度可能与药典规定的浓度并不一致，所以应该进行校正直接滴定法

×规定摩尔浓度第10页，课件共55页，创作于2023年2月直接读取药典规定自己标定取样量直接滴定法的含量计算方法第11页，课件共55页，创作于2023年2月第一节定量分析方法的分类与特点容量分析法定义亦称特点适用范围滴定法将已知浓度的滴定液（标准物质溶液），由滴定管滴加到被测药物的溶液中，直至滴定液与被测药物反应完全（通过适当方法指示），然后根据滴定液消耗的浓度和被消耗的体积，按化学计量关系式计算出被测药物的含量。通过指示剂颜色变化，或者电子设备的电位或电流突变来指示滴定终点1、方法简便易行：所用仪器价廉易得，操作简便快速2、方法耐用性高：影响测定的试验条件与环境因素少3、测定结果准确：误差低于0.2%，满足准确度高样品4、方法专属性差：对相近杂质干扰缺少选择，适用于主成分含量较高的样品分析广泛应用于化学原料的测定，较少应用于药物制剂的测定。第12页，课件共55页，创作于2023年2月生成物滴定法间接滴定法剩余量滴定法被测药物与化合物A作用生成化合物B，再用滴定液滴定化合物B也称回滴法，本法先加入定量过量滴定液A与药物作用，再用滴定液B与剩余的滴定液A反应，然后再进行含量计算第13页，课件共55页，创作于2023年2月先计算T间接滴定法的生成物滴定法注意滴定度T的计算正确求a和b再计算含量第14页，课件共55页，创作于2023年2月示例三葡萄糖酸锑钠的含量测定0.3g供试品＋水100ml＋盐酸15ml＋碘化钾试液10ml密塞，振摇后暗处放置10min碘量法Sb5+——2S2O32-本法先用葡萄糖酸锑钠与碘离子反应生成碘，再用碘与硫代硫酸钠反应生成碘离子，相当于是用硫代硫酸钠滴定葡萄糖酸锑钠，因此要找出它们两者的量反应关系，也就是a和b请读取请校正第15页，课件共55页，创作于2023年2月间接滴定法的剩余量滴定法也称回滴法，先加入定量过量滴定液A与药物作用，再用滴定液B与剩余的滴定液A反应，然后再进行含量计算计算的关键在于求出滴定液A应用于药物反应的实际量第16页，课件共55页，创作于2023年2月计算的关键在于求出滴定液A应用于药物反应的实际量间接滴定法的剩余量滴定法常涉及化学反应、加热、分取等操作等步骤，使测定误差显著增加空白试验校正没有药物存在时的滴定，方法步骤与有药物存在时相同计算公式相应修正如下：没有药物存在时，滴定液A全部与滴定液B反应浓度校正作用药物存在时，剩余滴定液A全部与滴定液B反应第17页，课件共55页，创作于2023年2月示例四司可巴比妥钠的含量测定

取本品约0.1g，精密称定，置250ml碘瓶中，加水10ml，振摇使溶解，精密加溴滴定液(0.05mol/L)25ml，再加盐酸5ml，立即密塞，并振摇1min，在暗处放置15min后，注意微开瓶塞，加碘化钾试液10ml，立即密塞，摇匀后，用硫代硫酸钠滴定液(0.1mol/L)滴定，至终点时，加淀粉指示液，继续滴定至蓝色消失，并将滴定得的结果用空白试验校正。本法用溴与司可巴比妥钠反应，再用硫代硫酸钠反滴定溴，属反滴定法，并用空白试验校正,滴定液A为溴，B为硫代硫酸钠，含量计算只需先求溴滴定度，再求出硫代硫酸钠空白试验V0体积与样品测定体积Vs第18页，课件共55页，创作于2023年2月示例四司可巴比妥钠的含量测定已知：司可巴比妥钠M=260.23;司可巴比妥钠与溴反应摩尔=1:1；W=0.1022g；硫代硫酸钠浓度校正因子=1.038；供试品滴定Vs=15.73ml;空白试验滴定V0=23.21ml;

第19页，课件共55页，创作于2023年2月间接滴定法的剩余量滴定法本公式适用于空白校正情形见上例本公式适用于没有做空白校正情形见下例第20页，课件共55页，创作于2023年2月示例五剩余碘量法测定异烟肼含量

异烟肼在弱碱性溶液中，加定量过量的碘滴定液(0.05mol/L)氧化，反应完成后，酸化，剩余碘滴定液用硫代硫酸钠滴定液(0.1mol/L)滴定(以淀粉为指示剂)。第21页，课件共55页，创作于2023年2月习题非那西丁含量测定

精密称取本品0.3630g加稀盐酸回流1小时后，放冷，用亚硝酸钠液（0.1010mol/L）滴定，用去20.00ml。每1ml亚硝酸钠液（0.1mol/L）相当于17.92mg的C10H13O2N，请计算非那西丁的含量。

第22页，课件共55页，创作于2023年2月药典收载红外分光度法本章讲叙第一节定量分析方法的分类与特点二、光谱分析法火焰光度法紫外可见分光度法荧光分析法原子吸收分光光度法紫外可见分光度法荧光分析法第23页，课件共55页，创作于2023年2月紫外可见分光度法基于物质对紫外区(200~400nm)和可见光区(400~760nm)的单色光辐射建立起来的光谱分析法基础朗伯-比尔定律第24页，课件共55页，创作于2023年2月紫外可见分光度法特点本法紫外区须选用石英比色皿，比色皿一般为1cm，吸光度在0.3~0.7之间为宜，选用最大吸收光波长。1、简便易行：使用的仪器价格比较低廉，操作简单，易于普及2、灵敏度高：本法灵敏度可达10-7~10-4g/ml，适用于低浓度试样分析3、准确度较高：误差在2%~5%之间，适用于对测定结果的准确度要求较高的样品4、专属性较差：本法通常不受一般杂质的干扰，但对结构相近的有关物质缺乏选择性。较少应用于原料药的含量测定，可用于制剂的含量测定，更多的应用于药物制剂的定量检查适用范围第25页，课件共55页，创作于2023年2月有机溶剂通常均具有很强的末端吸收。以空气为空白（空白光路中不置任何物质）测定溶剂的吸光度溶剂的吸光度在220～240nm范围内不超过0.4，在,41～250nm范围内不超过0.2，在251～300nm范围内不超过0.1，在300nm以上不超过0.05。紫外可见分光度法对溶剂的要求第26页，课件共55页，创作于2023年2月紫外可见分光度法4种方法对照品比较法比色法吸收系数法计算光度法含量测定方法第27页，课件共55页，创作于2023年2月紫外可见分光度法含量测定方法对照品比较法分别配制供试品溶液和对照品溶液,对照品溶液中所含被测药物的量应为供试品溶液中被测成分规定量的100±10%,所用溶剂量两者相同,在规定的波长下测定吸光度。按下式计算结果第28页，课件共55页，创作于2023年2月紫外可见分光度法含量测定方法对照品比较法第29页，课件共55页，创作于2023年2月1.317=M3H2O/M=375.85/285.34示例1：取盐酸吗啡片20片，精密称定，研细，精密称取适量（约相当于盐酸吗啡10mg)置100ml量瓶中，加水溶解至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液15ml，置50ml量瓶中，加0.2mol/L氢氧化钠25ml，用水稀释至刻度，摇匀，UV法测定。另取吗啡对照品适量，精密称定，用0.2mol/L氢氧化钠稀释至每ml中约含20μg的溶液，同法测定。计算，结果乘以1.317，即得C17H19NO3·HCl·3H2O的含量。(规格5mg)A样×20/1000×100×50/15×1.317×片重

A对×称样量×5×100%标示量（%）=第30页，课件共55页，创作于2023年2月紫外可见分光度法含量测定方法吸收系数法溶液片剂g/mlmg转化单位E值的大小反映了药物对某一波长光的吸收能力，也反映了测定反应的灵敏度。采用E法测定含量时，一般取三位有效数字表示，E值小于100的一般不宜采用。第31页，课件共55页，创作于2023年2月

第32页，课件共55页，创作于2023年2月双波长分光光度法（复方磺胺类药物的测定）三点校正法（维生素A的）解线性方程组法等使用时应注意，当在吸收曲线的陡然上升或下降的部位测定吸光度时，波长的微小变化可对测定结果造成显著影响。紫外可见分光度法含量测定方法计算分光光度法第33页，课件共55页，创作于2023年2月在药物分析中应用的比色法：酸性染料比色法（含氮碱性药物如：硫酸阿托品片、氢溴酸东莨菪碱片的测定）四氮唑比色法、异烟肼比色法蛋白质的双缩脲反应（硫酸软骨素的测定）总黄酮、总生物碱的测定（中药制剂）

紫外可见分光度法含量测定方法比色法第34页，课件共55页，创作于2023年2月药典收载红外分光度法本章讲叙第一节定量分析方法的分类与特点二、光谱分析法火焰光度法紫外可见分光度法荧光分析法原子吸收分光光度法紫外可见分光度法荧光分析法第35页，课件共55页，创作于2023年2月特点：

灵敏度高：可达10-10～10-12g/ml

荧光自熄灭：要求低浓度下测定易受干扰：须做空白试验

荧光弱的药物可衍生化后测定荧光分析法荧光法测定的是物质分子的发射光谱。在一定条件下，物质的浓度与其荧光（也称发射光）强度成正比关系。荧光分析中，药物的浓度与相应的荧光读数之间的线性范围较窄，故(Rx－Rxb)/(Rr－Rrb)应在0.5～2，如超出此范围，应调节溶液浓度后再测定。第36页，课件共55页，创作于2023年2月第一节定量分析方法的分类与特点三、色谱分析法HPLC高灵敏度：最低检出浓度可达10-15~10-12g/ml高专属性高效能与高速度特点第37页，课件共55页，创作于2023年2月HPLCNP-HPLC

Normalphasehighperformanceliquidchromatography据固定相与流动相极性RP-HPLC

Reversedhighperformanceliquidchromatography第38页，课件共55页，创作于2023年2月HPLC色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶、C8柱、氨基柱、氰基柱等。流动相：甲醇-水（或缓冲盐）、乙腈-水（或缓冲盐）、四氢呋喃-水（或缓冲盐）。洗脱力强弱依次为四氢呋喃乙腈甲醇水色谱柱：硅胶柱流动相：正己烷-异丙醇；正己烷-乙醇；正己烷-二氯甲烷等。洗脱力强弱依次为乙醇异丙醇二氯甲烷正己烷色谱柱与流动相RP-HPLCNP-HPLC化学键合固定相适用pH28的流动相；C18链在水相环境中不易保持伸展状态，故流动相中有机溶剂的比例应不低于5%，否则将造成色谱系统不稳定。第39页，课件共55页，创作于2023年2月选择性检测器紫外包括二极管阵列（DAD）、荧光、电化学响应值与待测液浓度有关，还与化合物结构有关通用型检测器示差折光、蒸发光散射检测器对所有的化合物均有响应更专属、更灵敏的检测器——质谱HPLC检测器第40页，课件共55页，创作于2023年2月柱效分离度拖尾因子重复性取对照溶液，连续进样5次，测得峰面积相对标准差RSD应小于2.0%HPLC系统适用性试验第41页，课件共55页，创作于2023年2月内标法

HPLC测定法外标法

第42页，课件共55页，创作于2023年2月第二节定量分析样品的前处理方法不经有机破坏经有机破坏直接测定配位滴定法氧化还原滴定法水解后测定酸水解碱水解经还原分解后测定湿法破坏——凯氏定氮法干法破坏高温灼烧法氧瓶燃烧法第43页，课件共55页，创作于2023年2月

葡萄糖酸钙EDTA配位滴定富马酸亚铁邻二氮菲-硫酸铈滴定葡萄酸锑钠间接碘量法适用范围：金属原子不直接与碳原子相连的含金属的有机药物。不经有机破坏的前处理方法直接测定法1、酸水解法EDTA配位滴定经水解后测定法第44页，课件共55页，创作于2023年2月2、碱水解法三氯叔丁醇银量法返滴定适用范围：含卤素有机药物结构中卤素原子结合不牢固的药物。经水解后测定法适用范围：碘原子直接与芳环连接的含碘有机化合物。经还原分解后测定法第45页，课件共55页，创作于2023年2月适用范围：含氮、硫、硫柳汞、氯化钠的生物制品，含氮有机药物分析的前处理和生物制品中金属元素测定时生物基质的去除。H2SO4-HNO3H2SO4-HClO4H2SO4-SO42-HNO3-KMnO4分解剂/消化剂辅助分解剂——凯氏定氮法测定含有氨基和酰胺结构的药物经有机破坏的前处理方法湿法破坏第46页，课件共55页，创作于2023年2月

将含氮药物与硫酸在凯氏烧瓶中共热，药物分子中有机结构被“消化”成CO2和H2O，有机结合的氮转化为无机氮，与过量的硫酸结合为硫酸氢铵和硫酸铵，经碱化后释放出氨气，随水蒸气馏出，用硼酸溶液或定量的酸滴定液吸收后，再用酸或碱滴定液滴定。

常量法——含氮量25～30mg

半微量法——含氮量

1.0～2.0mg凯氏定氮法原理第47页，课件共55页，创作于2023年2月凯氏烧瓶K2SO4(提高消解温度)CuSO4(加快消解速度)硫酸碱液硼酸(吸收液)甲基红-溴甲酚绿指示剂硫酸滴定空白校正先用强酸水解再用含碱硫代硫酸钠中和最后用碱释放出氨气，并蒸馏出来第48页，课件共55页，创作于2023年2月1、高温灼烧法用于含卤素、含磷药物和药物中砷盐的检查。常加入无水碳酸钠、硝酸镁、氢氧化钙、氧化锌等辅助灰化。2、氧瓶燃烧法系指将含有待测元素的有机药物置于充满氧气的密闭的密闭的燃烧瓶中充分燃烧，使有机结构部分彻底分解为CO2和H2O，待测元素根据电负性的不同转化为不同价态的氧化物，被吸收于适当的吸收液中，再根据其性质和存在方式选择方法进行分析。干法破坏第49页，课件共55页，创作于2023年2月燃烧时待测物转化成不同价态的无机物以供测定滤纸包装样品第50页，课件共55页，创作于2023年2月第三节药品分析方法的验证中国药典附录：药物质量研究指导原则目的：证明所采用的分析方法适合于相应的检测要求需验证的项目：鉴别试验，杂质定量或限度检查，原料药或制剂中有效成分含量测定，以及制剂中其他成分的测定。药物溶出度、释放度检查中，其溶出量等的测试方法。

验证内容有:精密度、准确度、检测限、定量限、线性