药学专业药物分析第六章药物的含量测定

药学专业药物分析第六章药物的含量测定第1页，课件共32页，创作于2023年2月

主要内容容量分析法紫外－可见分光光度法薄层扫描法气相色谱法高效液相色谱法典型药物测定实例第2页，课件共32页，创作于2023年2月第六章药物含量测定

第一节药物含量测定方法药品的含量测定是指准确测定药品有效成分或指标性成分的含量。含量测定是评价药品质量、判断药物优劣和保证药品疗效的重要手段。现行版药典收载的3214种药品中，有1419种涉及到含量测定。常用的含量测定方法有化学分析法、紫外-可见分光光度法、原子吸收分光光度法、气相色谱法、薄层扫描法、高效液相色谱法等。第3页，课件共32页，创作于2023年2月一、容量分析法容量分析法即滴定分析法，是根据一种已知浓度的试剂溶液和被测物质完全作用时所消耗的体积，来计算被测物质含量的方法。容量分析通常用于测定较高含量或中含量组分，即被测组分的含量一般在1%以上，有时也可用于测定微量组分。容量分析比较准确，测定的相对误差可达0.1%。第4页，课件共32页，创作于2023年2月

根据标准溶液和被测物质发生的反应类型和介质的不同，可将容量分析法分为下列几类：（一）、酸碱滴定法（二）、沉淀法

(三)、络合滴定法

(四)、氧化还原法铈量法、碘量法、溴酸钾法、高锰酸钾法、高碘酸钾法及亚硝酸钠法第5页，课件共32页，创作于2023年2月(五)、非水溶液滴定法

1.非水碱量法（1）非水碱量法原理某些药物由于在水液中显示的碱性较弱，不能进行酸碱滴定。而在非水介质中，就能显示出较强的碱性，可以顺利地进行。多半在冰醋酸或醋酸中进行滴定，滴定剂多为高氯酸的冰醋酸溶液。一般应用电位法指示终点，2.非水酸量法（1）非水酸量法原理某些药物如羧酸类、酚类、巴比妥类、磺胺类、烯醇类，由于在水溶液中显示的酸性较弱，CKa<10-8，不能进行酸碱滴定。而在非水介质中，就能显示出较强的酸性，用强碱滴定。多半在无水甲醇中进行，滴定剂多为甲醇钠的苯—甲醇溶液。第6页，课件共32页，创作于2023年2月

二、紫外－可见分光光度法1.测定原理定量分析的理论依据是朗伯-比耳定律。当一束平行的单色光垂直照射到待测物质的稀溶液时，光中所含有的一部分能量被待测物吸收，其余光则透过溶液，照在检测器上。在一定浓度范围内，待测物对这束光的吸收度（A）与该物质的浓度（c）和液层的厚度（L）（光路长度，即光程）成正比，其关系如下：

A=EcLE为吸收系数，其物理意义是当溶液浓度为1%（即1g/100ml），液层厚度为1cm时的吸收度数值，通常用表示。E是个常数。因此，当液层厚度固定不变时，物质的吸收度与其浓度成正比。第7页，课件共32页，创作于2023年2月2、定量分析方法（1）对照品比较法对照品比较法按下式计算供试品中被测溶液的浓度：

cx为供试品溶液的浓度；

Ax为供试品溶液的吸收度；

cR为对照品溶液的浓度；

AR为对照品溶液的吸收度。第8页，课件共32页，创作于2023年2月（2）吸收系数法

A为测得的吸收度；为比吸收系数；

W为所称样品的重量，g。第9页，课件共32页，创作于2023年2月三、薄层色谱扫描法薄层色谱扫描法是指用一束一定波长、一定强度的紫外或可见光对薄层板进行扫描，测定薄层板上的样品斑点对光的吸收强度或斑点经激发后所产生的荧光强度。所得到的图谱及积分数据可用于药品含量测定。（一）薄层吸收扫描法测定薄层板上的样品斑点对光的吸收强度的方法（二）薄层荧光扫描法测定样品斑点经激发后所产生的荧光强度的方法

第10页，课件共32页，创作于2023年2月其中扫描方式有以下几种：（1）反射法与透射法反射法是指测定样品斑点对照射光的反射情况进行测定的方法透射法则是测定照射光穿透样品斑点后光的吸收情况。（2）单波长和双波长单波长薄层扫描适合于分离度好，背景干扰小的薄层色谱。双波长薄层扫描时用测定波长和参比波长分别扫描薄层板，测定样品斑点在两波长下的吸收度之差。（3）线性扫描和锯齿扫描线性扫描一般采用一束比待测斑点略宽的狭窄光带沿展开方向做单向等速扫描，它适于形状较规则斑点的扫描。锯齿扫描是使用微小正方形光束沿展开方向扫描的同时，在垂直于展开方向进行往复式扫描.第11页，课件共32页，创作于2023年2月四、气相色谱法（一）概述1.载气钢瓶（N2）；2.氢气钢瓶；3.空气钢瓶；4.减压阀；5.干燥器；6.稳压阀；7.压力表；8.针形阀；9.转子流量计；10.进样器及汽化室；11.色谱柱（虚线表示恒温室）；12.氢火焰离子化检测器（虚线表示恒温室）；13.微电流放大器，14.记录器第12页，课件共32页，创作于2023年2月（二）定量分析方法

1.外标法精密称取对照品和供试品，配制成溶液，分别精密量取一定量，注入仪器，记录色谱图，测量对照品和供试品中待测成分的峰面积（或峰高），按下式计算含量：

cx为待测成分的浓度；

Ax为待测成分的峰面积（或峰高）；

cR为对照品的浓度；

AR为对照品的峰面积（或峰高）。第13页，课件共32页，创作于2023年2月

2.内标法加校正因子精密称取对照品和内标物质，分别配成溶液，精密量取各溶液，配成测定校正因子所用的对照溶液，取一定量注入仪器，记录色谱图，测量对照品和内标物质的峰面积（或峰高），按下式计算校正因子f：

AS为内标物质的峰面积（或峰高）；

AR为对照品的峰面积（或峰高）；

cS为内标物质的浓度；

cR为对照品的浓度。第14页，课件共32页，创作于2023年2月

再取含内标物质的供试品溶液，注入仪器，记录色谱图，测量供试品中待测成分（或杂质）和内标物质的峰面积（或峰高），按下式计算含量：

f为校正因子；

Ax为供试品中待测成分的峰面积（或峰高）；

AS为内标物质的峰面积（或峰高）；

cx为供试品中待测成分的浓度；

cS为内标物质的浓度。第15页，课件共32页，创作于2023年2月3.面积归一化法。取一定量注入气相色谱仪，记录相当于主成分峰保留时间数倍的色谱图，计算各成分峰面积及其总和以及被测组分峰面积总和所占的百分比。用本法测定时，溶剂峰不计算在总面积中。被测组分％＝（∑Ai／∑A）×100％式中，∑Ai为被测组分峰面积之和；∑A为全部峰面积之和。第16页，课件共32页，创作于2023年2月五、高效液相色谱法

（一）概述第17页，课件共32页，创作于2023年2月HPLC常用的流动相：其主要成分是水、甲醇、乙腈、醋酸铵溶液、磷酸溶液、磷酸二氢铵溶液等。固定相：十八烷基硅烷键合硅胶（应用最广泛），常简称为ODS柱或C18柱。除C18外，药典中还用到了苯基硅烷键合硅胶、辛烷基硅烷键合硅胶等。第18页，课件共32页，创作于2023年2月正相色谱是指以亲水性的填料做固定相、以疏水性溶剂或混溶的溶剂做流动相的HPLC类型。反相色谱是指以强疏水性的填料做固定相、以可以和水混溶的有机溶剂做流动相的HPLC类型。反相色谱最常用的固定相是ODS柱，最常用的流动相是水、甲醇、乙腈等。这一模式在HPLC中应用极广，类似于一种通用型的液相色谱方法。第19页，课件共32页，创作于2023年2月（二）定量分析方法高效液相色谱法的定量分析方法同气相色谱法。第20页，课件共32页，创作于2023年2月第二节药物含量测定示例一、碘量法《中国药典》（2005年版）收载的用直接碘量法测定含量的原料药和制剂有维生素C及其制剂、二巯丙醇、二巯丙磺钠及其注射剂、安乃近及其制剂等。第21页，课件共32页，创作于2023年2月例6-1《中国药典》（2005年版）中维生素C的含量测定。

1.测定原理：维生素C具有强还原性，在酸性溶液中可被弱氧化剂碘氧化为去氢维生素C，当维生素C被I2氧化后，微过量的I2可使淀粉指示剂变蓝色，以溶液显蓝色并持续30s不褪为终点。

2.测定方法：取本品约0.2g，精密称定，加新沸过的冷水100ml与稀醋酸10ml使溶解，加淀粉指示液1ml，立即用碘滴定液(0.1mol/L)滴定，至溶液显蓝色在30s内不褪，即得。每1ml碘滴定液(0.1mol/L)相当于8.806mg的C6H8O6。第22页，课件共32页，创作于2023年2月3.数据处理：维生素C的百分含量为

c为滴定时碘滴定液的实际浓度，mol/L；V为所消耗碘滴定液的体积，ml；W为样品的重量，g。若为维生素C片剂时，则维生素C的百分标示含量为为平均片重，g；第23页，课件共32页，创作于2023年2月二、亚硝酸钠法例6-2《中国药典》（2005年版）中盐酸普鲁卡因的含量测定。1.测定原理。在盐酸酸性条件下，亚硝酸钠液与盐酸普鲁卡因的芳伯氨基定量发生重氮化反应，反应式为：

用永停滴定法指示终点，由消耗亚硝酸钠滴定液的用量计算盐酸普鲁卡因的含量。第24页，课件共32页，创作于2023年2月2.测定方法。取本品约0.6g，精密称定，照永停滴定法（2005年版附录ⅦA），在15～25℃，用亚硝酸钠滴定液(0.1mol/L)滴定。每1ml的亚硝酸钠滴定液(0.1mol/L)相当于27.28mg的C13H20N2O2·HCl。3.数据处理。

c为亚硝酸钠滴定液的实际浓度，mol/L；

V为消耗亚硝酸钠滴定液的体积，ml；

W为所称样品的重量，g。第25页，课件共32页，创作于2023年2月三、银量法例6-3《中国药典》（2005年版）中氯化钠的含量测定。1.测定原理以AgNO3为滴定液，用荧光黄作为吸附指示剂，测定NaCl的含量。2．测定方法取本品约0.12g，精密称定，加水50ml溶解后，加糊精溶液(1→50)5ml与荧光黄指示液5～8滴，用AgNO3液(0.1mol/L)滴定，即得。每1mlAgNO3液(0.1mol/L)相当于5.844mg的NaCl。数据处理

c为硝酸银滴定液的浓度，mol/L；

V为测定时消耗硝酸银滴定液的体积，ml；

W为所称样品的重量，g。第26页，课件共32页，创作于2023年2月四、酸碱滴定法 例6-9《中国兽药典》（2005年版）中乙酰水杨酸（阿司匹林）的含量测定。1.测定原理。将本品溶于中性乙醇后，以酚酞为指示剂，用0.1mol/L氢氧化钠液直接滴定。滴定反应式如下：

2.测定方法。取本品约0.4g，精密称定，加中性乙醇(对酚酞指示液显中性)20ml溶解后，加酚酞指示液3滴，用氢氧化钠液(0.1mol/L)滴定。每1ml氢氧化钠滴定液(0.1mol/L)相当于18.02mg的C9H8O4。第27页，课件共32页，创作于2023年2月3.数据处理。

c为氢氧化钠滴定液的实际浓度，mol/L；

V为消耗氢氧化钠滴定液的体积，ml；

W为所称供试品的重量，g。第28页，课件共32页，创作于2023年2月五、非水滴定法

《中国药典》（2005年版）中采用此法测定的药物有：癸氟奋乃静及其注射剂、盐酸乙胺丁醇及其片剂和胶囊剂、盐酸乙基吗啡、盐酸二甲双胍、盐酸二氧丙嗪、盐酸丁卡因、盐酸三氟拉嗪、盐酸马普替林、盐酸去氯羟嗪、盐酸可卡因、盐酸可乐定、盐酸丙米嗪、盐酸布比卡因及其注射剂、盐酸布桂嗪、盐酸卡替洛尔、盐酸甲氧明、盐酸甲氯芬酯、盐酸尼卡地平、盐酸地芬尼多等。第29页，课件共32页，创作于2023年2月例6-5《中国药典》（2005年版）氢氯噻嗪的含量测定。（1）测定原理。氢氯噻嗪含有两个磺酰胺基，联结在N上的氢原子较活泼，具