第九次实验方法比较试验

第九次实验方法比较试验第1页，课件共16页，创作于2023年2月

方法比较试验是将候选方法与准确度已知的方法做对比，以评价候选方法的准确度。它同时可检测候选方法的恒定误差和比例误差的大小。第2页，课件共16页，创作于2023年2月教学目的与要求1.掌握方法比较试验的原理和评价。2.掌握己糖激酶法测血糖和氧化酶法测血糖的测定原理。3.熟悉己糖激酶法和氧化酶法测定血清血糖的操作过程。

第3页，课件共16页，创作于2023年2月一、试剂与材料1.己糖激酶法测定血糖试剂盒（工作液：试剂A、试剂B按2：1混合）。2.氧化酶法测定血糖试剂盒（工作液：试剂A、试剂B按2：1混合）。3.半自动生化分析仪。4.实验血清。第4页，课件共16页，创作于2023年2月三、血糖的测定（己糖激酶法已讲）（一）实验原理Trinder反应:GOD葡萄糖酸＋2H2O2氧化酶法葡萄糖＋2H2O＋O2

H2O2

＋4-AAP＋酚

POD苯醌亚胺＋2H2O＋HCl第5页，课件共16页，创作于2023年2月2.混匀，37℃水浴7分钟，波长

500nm比色。（二）操作方法

工作液1ml蒸馏水10ul葡萄糖标准10ul血清10ul

1.空白管

标准管

测定管

工作液1ml混合混合第6页，课件共16页，创作于2023年2月3.结果计算测定管吸光度GLU（mmol/L)＝

×5.56

标准管吸光度GLU（mmol/L)＝

×5.56

GLU（mmol/L)＝

×5.56

GLU（mmol/L)＝

×5.56

第7页，课件共16页，创作于2023年2月4.注意事项1.新配制的葡萄糖标准液须放置2h以上(最好过夜)，待变旋平衡后方可应用.2.尿酸会干扰过氧化物酶反应，使结果偏低。3.还原性物质可竞争H2O2,使结果偏低。4.严重黄疽、溶血及乳糜样血清使结果偏高应先制备无蛋白血滤液，然后再进行测定。

第8页，课件共16页，创作于2023年2月四、方法比较

以葡萄糖已糖激酶法作为参比方法，葡萄糖氧化酶法为候选方法进行比较。

第9页，课件共16页，创作于2023年2月1.收集标本每天收集高、中、低不同浓度标本8份，5天共40份。2.测定将标本编号，分别用两种方法先从1-8顺序测定，再从8-1顺序测定，记录测定结果。重复5天。

第10页，课件共16页，创作于2023年2月

以对比方法的结果为横坐标被评价方法的结果为纵坐标绘制散点图。3.绘制散点图YX••••••••••第11页，课件共16页，创作于2023年2月4.检查散点图有无明显离群点（1）分别计算每对结果差值，如：

X1-Y1、X2-Y2.....（2）计算所有差值的平均差值。（3）离群判断以4倍平均差值作判断限。某对差值超出4倍平均差值则视为离群点，剔除，若有两个离群点，则另做标本补充8分结果。第12页，课件共16页，创作于2023年2月5.回归及相关分析

根据直线回归分析，求出回归方程y=a+bx及相关系数r。截距a反映恒定系统误差的大小，斜率b反映比例系统误差的大小，相关系数反映两种方法相关性的密切程度，r≥0.975或r≥0.95，可接受。第13页，课件共16页，创作于2023年2月6.计算系统误差

根据回归方程的a、b值，可以计算候选方法的系统误差（SE）；并与不同医学决定水平（Xc）的允许误差（TEa）作比较。要求SE=（a+bXc）-Xc<1/2TEa第14页，课件共16页，创作于2023年2月7.配对t检验

通过统计软件进行配对t检验，t值是方法比较实验中系统误差和随机误差的比值，若t<t0.05(v)，表明两种方法间的系统误差和随机误差量相比相差不大，