植物组织培养是园艺技术专业技能训练课件之一

注重加强理论与实践的结合，在掌握“必需体实现项目，做到“项目驱动，学做一体”1套间的水沸腾而产生蒸汽。从而使沸点增高，得到高于100℃的温度。导致菌体蛋白质凝固变性而达到灭菌的目的。（1）装锅：先在外锅加入适量的水，然后将灭菌物品直立放入内锅，试管口或三角瓶间，便于蒸汽流通，否则易造成灭菌不彻底。（2）盖上锅盖：盖锅盖时应将锅盖上的排汽管插入锅内壁管孔内，然后对角线方向拧紧锅盖上的螺丝，并将放汽阀直立打开，安全阀横向关闭。（3）排放冷空气：将灭菌锅放在电炉上加热，当锅内蒸汽大量排出时再继续排汽3～5min，关闭放气阀。（4）升压、保压、降压：当压力表指针指到1.05kg/cm2处时(灭菌所需压强)开始计时，继续维持该压强20～30min。灭菌结束待压力表指针自然回到“0”位时打开放汽阀，排出锅内剩余蒸汽后，打开锅盖。注意切忌在压力表未到“0”位时就放汽，以免试管内的培养基向上冲浸湿棉塞，造成以后菌种的污染。2超净工作台是为实验室工作提供无菌操作环境的设施，以保护实验免受外部环境的影响，同时为外部环境提供某些程度的保护以防污染并保护操作者。超净工作台的洁净环境是在特定的空间内，洁净空气(进滤空气)按设定的方向流动而形体通过排气滤板从顶部排出，大约70％的气体通过供氧滤板重新进入操作区。为补充排气作区，只是形成一个空气屏障。经过适当的检验和调试，才能最大限度地发挥设备的作用。在调试前应为机器选定一个较好的环境。将其置于一间有空气消毒设施的无菌室是最好的，何地方以紫外线杀菌灯和照明用日光灯是超净工作台的标准配置，鼓风机提供空气流动的动力，这些部件是否正常工作是一目了然的。最困难也是最重要的是检查空气滤板其密封性，它直接关系到机器的正常使用。最简单的检查方法是营养琼脂平板法。处于工作状态时在操作区的四角中心位置各放一个打开的营养琼脂平板，两小时后盖上盖并置37℃培养箱中培养24小时，计算出菌落数。平均每个平皿菌落数必须少于0.5个。超净工作台是一台较精密的电气设备，对其进行经常性的保养和维护是非常重要的。3正常工作，潮湿空气还利于细菌、霉菌的生长。清洁的环境还可延长滤板的使用寿命。处理。熏蒸时，应将所有缝隙完全密封，如操作口设有可移动挡板封盖的类型超净工作台，超净工作台的滤板和紫外杀菌灯都有标定的使用年限，应按期更换。光照培养箱是具有光照功能的高精度恒温设备，通常用于植物发芽与培养。1.把电源开关拨至“1”处，此时电源指示灯亮，控温仪有数字显示，钟控仪上有时2.温度设定如需要设定温度20.0℃,原设定温度16.5℃,先按功能键“SET”。再按移动键“⊿”,将光标移至显示器十位数字上，然后按加键“△”,使十位数字从“1”升至“2”，十位数设定后，移动光标依次设定个位和分位数字，使设定温度显示为20.0℃,按功能键“SET”确认，温度设定结束。近设定温度时，比例加热指示灯忽亮忽熄，反复多次，控制进入恒温状态。3.打开内外门，把所需培养的物品放入培养箱，关好内外门，如内外门开门时间过长，4箱内温度有些波动，这是正常现象。根据需要选择培养时间，培养结束后，把电源开关拨至“0”，如不马上取出物品，请数显光照培养箱光照培养箱恒温箱用于生物材料的培养，恒温箱的最高工作温度为60℃。（1）将温度计插入座内（在箱顶放气调节器中部）。（3）将电热丝分组开关转到1或2位置上（视所需温度而定），此时可开启鼓风机促使热空气对流。电热丝分组开关开启后，红色指示灯亮。（4）注意观察温度计。当温度计温度将要达到需要温度时，调节自动控温旋钮，使绿色指示灯正好发亮，十分钟后再观察温度计和指示灯，如果温度计上所指温度超过需要，5做为温度标准指示，只能做为调节用的标记。（5）在恒温过程中，如不需要三组电热丝同时发热时，可仅开启一组电热丝。开启组数越多，温度上升越快。（7）使用完毕后将电热丝分组开关全部关闭，并将自动恒温器的旋钮沿反时针方向2.注意事项（2）箱内应保持清洁，放物网不得有锈，否则影响玻璃器皿洁度。（3）使用时应定时监看，以免温度升降影响使用效果或发生事故。（4）鼓风机的电动机轴承应每半年加油一次。（5）切勿拧动箱内感温器，放物品时也要避免碰撞感温器，否则温度不稳定。6一、训练目标2．技能目标：通过MS培养基母液的配制与保存，掌握配制与保存培养基母液的基本技能；通过MS固体培养基的配制，掌握配制培养基的基本技能。分析天平、托盘天平、冰箱。烧杯、量筒、移液管、定容瓶、三角瓶、封口膜及线绳若干、pH试纸等。三、训练内容（一）培养基配制基础知识一、培养基的种类目前国际上流行的培养基有几十种，常用的培养基及特点如下：1.MS培养基特点：是无机盐离子浓度较高，硝酸盐较高，为较稳定的平衡溶液。适用：广泛地用于植物的器官、花药、细胞和原生质体培养，效果良好。5特点：含有较低的铵，这可能对不少培养物的生长有抑制作用。适用：如双子叶植物特别是其中的木本植物。3.White培养基1963年又作了改良，称作White改良培养基。特点：无机盐数量较低。6特点：成分较简单，KNO和(NH)SO含量高。适用：广泛应用于小麦、水稻及其它植物的花药培养等。二、培养基的成分可以分为水、无机盐、有机物、天然复合物、培养体的支持材料等五大类。1.水作用：原生质体的组成成分，代谢过程的介质和溶媒。它是生命活动过程中。2.无机元素7大量元素，指浓度大于0.5mmol/l的元素，有N、P、K、Ca、Mg、S等。其作用是：功能：是蛋白质、酶、叶绿素、维生素、核酸、磷脂、生物碱等的组成成分，是生命结构和功能物质不可缺少的。功能：是磷脂的主要成分，而磷脂又是细胞膜、细胞核的重要组成部分。磷也是核酸、ATP、辅酶等的组成成分。组织培养中，磷不仅增加养分、提供能量，而且也促进对N的吸收，增加蛋白质在植物体中的积累。功能：K对碳水化合物合成、转移、以及氮素代谢等有密切关系，它具有活化酶的作用。K增加时，蛋白质合成增加，维管束、纤维组织发达，对胚的分化有促进作用。但浓一般为1~3mg/l为好。(4)Mg、S和Ca功能：Mg是叶绿素的组成成分，又是激酶的活化剂；S是含硫氨基酸所构成蛋白质的组成成分。Ca是构成细胞壁的一种成分，Ca对细胞分裂、保护质膜不受破坏有显Fe、B、Mn、Cu、Mo、Co等。功能：铁是一些氧化酶、细胞色素氧化酶、过氧化氢酶等的组成成分。同时，它又是叶绿素形成的必要条件。培养基中的铁对胚的形成、芽的分化和幼苗转绿有促进作用。B、Mn、Zn、Cu、Mo、Co等，也是植物组织培养中不可缺少的元素，缺少这些物质会导致生长，发育异常现象。3.有机化合物功能：以各种辅酶的形式参与多种代谢活动，促进生长、分化作用。V对愈伤组织的B1B6PPC有防止组织变褐的作用。功能：参与构建细胞壁。由磷酸葡萄糖转化而来，进一步生成果胶物质。能促进愈伤组织的生长以及胚状体和芽的形成。促进组织和细胞的繁殖、分化。功能：作为有机氮源，利于被细胞直接吸收利用。（5）天然复合物大多含氨基酸、激素、酶等一些复杂化合物。它对细胞和组织的增8殖与分化有明显的促进作用，但对器官的分化作用不明显。①椰乳功能：它在愈伤组织和细胞培养中有促进作用。在马铃薯茎尖分生组织和草莓微茎尖培养中起明显的促进作用，但茎尖组织的大小若超过1mm时，椰乳就不发生作用。4.植物激素（1）生长素类长方面，根对生长素最敏感。在极低的浓度下，(10-5~10-8mg/L）就可促进生长,其5.培养材料的支持物功能：只是固化剂。本身并不提供任何营养。性质：琼脂能溶解在热水90℃以上中，成为溶胶，冷却至40℃即凝固为固体状凝胶。MS培养基的配制1母液的配制1.2微量元素母液在分析天平上按表分别称取微量元素药品,按大量元素母液配制方法，配成100倍液用分析天平按表分别称取甘氨酸VB1、Vpp、VB6、肌醇，配成50倍有机物质母液。表1MS培养基母液的配制9母液名称大量元素母液微量元素母液铁盐母液有机物母液NH4NO3KNO3CaCl·2H2OKH2PO4MnSO4·H2OZnSO4·7H2OCoCl·6H2OCuSO4·5H2OH3BO3Na2MO4·2H2OFeSO4·7H2ONa2-EDTA烟酸(Vpp)盐酸吡哆醇盐酸硫胺素肌醇甘氨酸原配方量扩大倍数称取量44005母液体积移取量2.MS培养基的合成别移取微量元素母液10ml，铁盐母液10ml，有机物母液10ml，均加入该定容瓶中。再用蒸馏水定容至刻度，摇匀。取3/1至1/2液体培养基移入白瓷缸中，称取琼脂丝7－9g2.2加热通电加热，烧开后改用文火，至琼脂全部融化，透澈见底为止。2.3调整PH值从电炉上取下冷却后，用0.1N的NaOH或0.1NHCl调整pH值为5.8。2.4培养基的分装搅拌均匀后，分装到三角瓶中，每瓶约25-30ml，即1升培养基分装40-35瓶，最后用封口塑料膜包上瓶口，用线绳扎口，写上标号。一、训练目标1知识目标：理解有菌和无菌的范畴；熟练掌握组织培养相关的灭菌方法2技能目标：学会处理各种外植体的方法和操作流程；二、设备仪器与试剂高压灭菌锅、配制好的培养基（一）基础知识1灭菌与消毒的概念消毒：杀死、消除或抑制部分微生物，使之不发生作用。加入灭菌液的0．5％，即在2常用的灭菌方法：可分为物理的和化学的两类。2.1培养基用湿热灭菌压力0.1～0.15MPa，20min。高压灭菌20-30min。注意高压灭菌后培养基pH值的变化及回复动态。如高压灭菌后的pH值常由5．80至6．48。而96h后又回降至5．8左右。这样在实验中就可以根据这一规律加以掌握。2．2灼烧灭菌浸入95％的酒精中，使用之前取出在酒精灯火焰上灼烧灭菌。冷却后，立即使用。2.3干热灭菌干热灭菌是利用烘箱加热到160-180℃杀死微生物。由于在干热条件下，细菌营养细胞的抗热性大为提高，接近芽孢的抗热水平，通常采用170℃持续90min来灭菌。物品工具等定时间断电后，待充分冷凉，打开烘箱，以免因骤冷而使器皿破裂。2.4不耐热的物质采用过滤灭菌一些生长调节剂，如赤霉素、玉米素、脱落酸和某些维生素是不耐热的，采用过滤灭菌2.5紫外线和熏蒸灭菌色体变异，造成死亡。紫外线的波长为200-300nm，其中以260nm．的杀菌能力最强，但杀死空气和物体表面的微生物。这种方法简便，只需要把消毒的空间关闭紧密即可。2.6化学试剂消毒膜的通透性，使细胞破裂或溶解。常用熏蒸剂是甲醛，熏蒸时，房间关闭紧密，按5-8m1／m3用量，将甲醛置于广口容器中，加5g／m3高锰酸钾氧化挥发。熏蒸时，房间可预先喷湿以加强效果。冰醋酸也可进行加热2.7植物材料表面用消毒培养基和实验材料的高压蒸汽灭菌阀，继续加热，此时由于蒸汽不能溢出，而增加了灭菌器内的压力，从而使沸点增高，得到高于100℃的温度。导致菌体蛋白质凝固变性而达到灭菌的目的。蛋白质较易凝固，因蛋白质含水量增加，所需凝固温度降低；二是湿热的穿透力比干热大；三是湿热的蒸汽有潜热存在，每1克水在100℃时，由气态变为液态时可放出2.26kl（千焦）的热量。这种潜热，能迅速提高被灭菌物体的温度，从而增加灭菌效力。温度低于饱和蒸汽的温度。灭菌锅内留有不同分量空气时，压力与温度的关系见表1。表1灭菌锅内留有不同分量空气时，压力与温度的关系压力数压力数千克/厘米寸21/3空气排出时的温全部空气排出时的温度1/2空气排出时的温度空气全不排出时的温度2/3空气排出时的温度灭菌的温度及维持的时间随灭菌物品的性质和容量等具体情况而有所改变。例如含糖培养基可将其他成分先行121.3℃,20分钟灭菌，然后以无菌操作加入灭菌的糖溶液。又如盛于试管内的培养基以1.05㎏/㎝2，121.3℃灭菌20分钟即可，而盛于大瓶内的培养基最好灭菌30分钟。2操作步骤2．放回灭菌桶，并装入待灭菌物品。注意不要装得太挤，以免防碍蒸汽流通而影响灭菌效果。三角烧瓶与试管口端均不要与桶壁接触，以免冷凝水淋湿包口的纸而透入。紧相对的两个螺栓，使螺栓松紧一致，勿使漏气。后，关上排气阀，使锅内的温度随蒸汽压力增加而逐渐上升。当锅内压力升到所需压力时，打开排气阀，旋松螺栓，打开盖子，取出灭菌物品。如果压力未降到0时，打开排气阀，就会因锅内压力突然下降，使容器内的培养基由于内外压力不平衡而冲出烧瓶口或试管口，造成棉塞沾染培养基而发生污染。6．将取出的灭菌培养基放入于平整台面上冷却，即可待用。思考题一训练目标1知识目标：学会处理各种外植体的方法和操作流程。2技能目标：通过材料的表面消毒，初步掌握外植体的常规表面消毒技术；通过在超净工作台上进行无菌操作训练，掌握组织培养的无菌操作技术。三训练内容（一）基础知识毒10~30分钟，或或用0.1%升汞消毒5~15分钟，之后用无菌水冲洗3~5次后接种。所用消毒液与外植体体积大致为1比10。有时为了增强消毒效果，可以采取以下一种或几种办法：将植物材料在灭菌前用十分清洁的流水（或自来水）冲洗0.5~2小时，在消毒剂中加入1滴或数2外植体的接种--无菌操作外植体的接种是把经过表面灭菌后的植物材料切碎或分离出器官、组织、细胞、转放到无菌培养基上的全部操作过程。菊花茎段的表面消毒于接种预处理：修剪、流水冲洗。泡10分钟左右，或漂白粉上清夜中10-15分钟，然后用无菌水冲洗3-5次。注意：灭菌时注意搅动，使材料和灭菌剂有良好的接触，或加入数滴0。1%吐温。2接种训练（1）夹持动作训练用镊子将豆粒拣到培养瓶中，左右手交替操作（2）.剪切和夹持动作分步训练用剪子剪取草秆为小段，约1厘米长，再用镊子夹持，将其插入到培养基中，每瓶插入5个，左右手交替操作。（3）.剪切、夹持、插入连贯动作训练一手持镊子夹持并悬起草秆，另一手持剪子将其剪为小段，然后直接插入培养基中，草秆不接触实验台面。（1）在接种4h前用甲醛熏蒸接种室，并打开其内紫外灯进行灭菌；（2）在接种前20min，打开超净工作台的风机以及台上的紫外灯；（3）接种员先洗净双手，在缓冲间换好专用实验服，并换穿拖鞋等；（4）上工作台后，用酒精棉球擦拭双手，特别是指甲处。然后擦拭工作台面；（5）先用酒精棉球擦拭接种工具，再将镊子和剪子从头至尾过火一遍，然后反复过火尖端（6）接种时，接种员双手不能离开工作台，不能说话、走动和咳嗽等；（7）接种完毕后要清理干净工作台，可用紫外灯灭菌30min。注：若连续接种，每5天要大强度灭菌一次。1知识目标：掌握试管苗的繁殖和培养过程2技能目标：熟练掌握培养基的制作过程，掌握试管苗的茎段转接过程。皿、打火机等)培养基三、训练内容要求每日光照12-16小时，光照度1000-5000lx。温度比光照更为突出，不同的植物有最适生长温度，大多数在23-32C间，培养室一般温度是25加减2度。湿度影响主要有两个方面：培养容器内的湿度，他的湿度条件唱可100%；培养室的湿度，过高过低都是不利的。氧气液体培养，振荡培养可解决通气，固体培养，最好采用通气性好的瓶盖或瓶塞。2.1接种前4小时对接种室进行熏蒸，每个超净台取10ml左右甲醛液装入瓶中，在超2．2洗净双手，穿好实验服进入接种室，用酒精棉球擦试双手，台面及接种工具等。2.3将酒精灯放在距超净台边缘约30cm，正对胸前处，注意以后的操作都要在酒精灯的10cm半径范围内完成。点燃酒精灯，对剪子和镊子过火，先从头至尾过火，然后对尖放在距超净台边缘约15cm，正对胸前处，以利操作的方便进行。2.4打开原种瓶，对瓶口先外壁，后内壁过火。然后准备接种：先将种苗移到培养皿里。对香石竹等茎梢可切割茎段，剪时要茎节上部少留，节下部多留。对草莓等没有茎、只有基生叶的种苗分离芽丛，最后均分离为1-2个芽，最好为1个芽。每瓶接4—5个茎段或小芽，若放4株呈正方形分布。若放5株最后一株要放在正方形对角线交点处。接好后，瓶口和封口膜均要过火，扎口。每接完一瓶，接种工具要放回将单芽插入培养基里。2.5接完一瓶原种后，可用酒精棉球擦拭双手，弃去含废弃物的培养皿，换用新的无菌培养皿，以防交叉感染。完毕，熄灭酒精灯，盖上酒精瓶，收拾净超净台面，先把种苗瓶移出，然后将废物皿、空原种瓶、培养皿、接种工具等移出放到塑料筐里，带出接种室，清洗干净。思考题1知识目标：掌握试管苗的驯化原则和移栽的措施二、材料与仪器试剂：温室，镊子，育苗盘，珍珠岩或蛭石三、训练内容（一）基础知识件相适，后期和栽培条件相适具体方法将长有完整试管苗的试管由培养室转到自然光下进行锻炼，并打开瓶盖注入少量自来水使幼苗逐渐降低温度，转向有菌。驯化一般1-2周2试管苗的移栽2.1常规移栽法将试管苗驯化后，取出洗去培养基，移栽到无菌的混合土中，保持一定的湿度和水分，当长出新叶时，即可移栽到大田或盆钵中。2．2直接移栽法将试管苗移栽到盆钵2.3嫁接移栽法2提高试管苗成活率的途径2.1试管苗的生理状况、壮苗2．2植物生长调节物质生长素促进生根，细胞分裂素以致生根2.3无机盐浓度降低无机盐浓度2.4活性炭少量促进2.5环境因子控制好移栽前的光温湿做好遮阳工作2.6移栽过程中让试管苗从无菌向有菌逐渐过度洗净培养基选取灭过菌的培养基（二）训练内容1.栀子试管苗的取出、清洗、扦插等。1.1移栽前练苗移栽前将栀子再生植株不开口移到自然光照下锻练2－3天，然后开浇透水，准备扦插幼苗。(2)用镊子轻轻取出组培幼苗，轻轻洗掉根部粘附的培养基，切忌揉伤，取细竹签在营2.1保持小苗的水分供需平衡。根系生长。每组最后有40株成活幼苗。营养钵的培养基质要浇透水，所放置的床面也要浇逐渐减少浇水，促进小苗长得粗壮。2．2防止菌类滋生时尽量少伤苗。喷水时可加入0.1%的尿素，或用1/2MS大量元素的水溶液。2.3给予一定的温、光条件。冬春季地温较低时，可用电热线来加温。在小拱棚上加盖遮阳网或报纸等，后期当小植株有了新的生长时，逐渐加强光照，至直接利用自然光照。程中不要浇水过多，过多的水应能迅速沥除，以利根系呼吸。一、项目目标培养观察以及驯化管理技术。完成校内实习基地菊花育苗工作。超净工作台及配套接种用具(无菌接种工具、酒精灯、酒精棉球、70%酒精瓶，无菌培养皿、打火机等)培养基任务1外植体的选取、灭菌和接种任务3生根培养任务4驯化移栽五、实施步骤任务1外植体的选取灭菌和接种外植体可选取茎段、茎尖、叶片、花序梗、花器等，一般选用茎段，其次茎段时取无病虫害，粗壮健康的枝条，叶茂茎粗较好，选择花器时，选择含苞未放，以便于灭菌。但不要过分幼嫩，因容易受药害。般分化培养培养基；而花器可简化灭菌过程，只用酒精处理即可，若取花瓣，将其切成0.5继代培养时，取茎段者可由切割茎段法扩繁比较简单。取花器者，须诱导出芽，再由芽MS培养基，以分离芽丛扩繁采用分化培养基。任务3生根培养留。每瓶可接4—5个茎段或小芽，接好后，瓶口和封口膜均要过火，扎口。每接完一瓶，接种工具要放回酒精消毒瓶。培养时，注意观察生根情况，约20天后开始分化生根，以出现长度在1cm、洁白均匀整齐的不定根为佳。不要使根发生徒长现象。任务4驯化移栽4.1移栽前练苗移栽前将培养物不开口移到自然光照下锻练2－3天，然后开口练苗浇透水，准备扦插幼苗。4.3用镊子轻轻取出组培幼苗，轻轻洗掉根部粘附的培养基，切忌揉伤，取细竹签在营幼苗较嫩，防止弄伤。栽前基质要浇透水。栽后移入高湿度的环境中，保证空间湿度思考题熟练掌握草莓培养环节中微茎尖选取和剥离、接种、培养和驯化过程。皿、打火机等)培养基任务1草莓茎尖的选取、灭菌、剥离和接种任务1草莓茎尖的选取灭菌、剥离和接种新芽时，再取材，效果较好。灭菌时要加大力度，用自来水流冲24小时，然后剥去外层叶片，再用0.5%次氯酸钠溶液表面消毒分钟，最后用无菌水冲洗5-8次。任务2接种培养接入培养基中，防止脱水和变褐。为防止脱水，可在湿润滤纸下进行分离。培养基可选用的光照条件下培养。须以2-3个月的培养才为较理想。继代培养时，把芽丛割成芽丛小块，转入MS0培养基中，令其长大，以利分株，待苗长大到1-2厘米时，可将芽丛小块分成单株，再转入前述分化培养基中。任务3生根与驯化移栽培养时，采用1/2MS+NAA1培养基，用镊子把苗从试管瓶中取出，洗掉根部所带琼脂培营养钵中央扎一小孔，将幼苗插入其中，压实苗基部，周转基质。栽后浇薄水，将小营养钵并排摆好，加设小拱棚，保湿，驯化学期提高棚内空气湿度达到90%以上，约1周后，可加强通风逐渐降低湿度，使幼苗逐渐生长在自然条件下。思考题一、项目目标解培养环节中蝴蝶兰的诱导、培养和驯化移栽过程、满足实习单位实习就业需求。皿、打火机等)培养基任务3驯化移栽任务1蝴蝶兰的诱导并加入蔗糖20g/L，琼脂12g/L，活性炭5g/L，椰汁200mL/L。培养温度25℃-28℃,每日光照10h-12h，光照强度1600lx-2000lx。用。在超净工作台上，将烧杯内的叶片用75%酒精消毒30s，然后用无菌水清洗2-3遍，再用0.1%升汞溶液浸泡11min，最后用无菌水冲洗4-5遍。用无菌手术刀将叶片切成5mmx5mm见方的小块，平放或按极性接种在诱导培养基上，近轴面向上，每瓶不宜接种太多。3原球茎的诱导与增殖幼叶切块在诱导培养基上培养1-2月后，从每个叶片组织块上产生1-7个不等的原球茎，此时，在无菌条件下,将原球茎取出切割成几小块，转入继代培养基中，进行增殖培养。培养一段时间（60天左右）后，再进行分割转移，通过这种方式，任务2扩繁操作消毒拿进来的原瓶苗和培养基：用70%脱脂棉擦拭瓶体，烤瓶口6圈为宜，在火焰上开瓶，瓶塞放在右边，瓶口再烤6圈，放在工作台内侧。用镊子夹出苗，剪子修剪，分级后放入培养基内，大小相近的放在一起。瓶为插入3cm以上的大苗，培养基的封口：在火焰上烤6圈，在火焰上封口。清楚写上代号火焰上烤后在放回试管内。小植株的培养将不需继代的原球茎转移到育苗培养基上分化出芽，并逐渐发育成丛生小植株。在无菌条件下，切开丛生小植株，将小植株转入育苗培养基上培养。不久，小植株分化的小芽应接入诱导培养基中，作为种苗。一段时间后，将长大的种苗移出，种植，小苗及原球茎可继续增殖与分化。任务3移栽及管理当小植株长至4cm左右，叶3-4片，根2-3条时，即可移栽。将小植株带瓶移入温室2周左右，然后打开瓶塞炼苗3-5d，取出苗后，用水冲洗掉植株根部的培养基，将根部放于70%甲基托布津溶液中消毒4h，药液浓度为1500倍。将苗吸干水分后阴晾1h，然后定植于水苔育苗盘中。刚定植的植株应遮光50%左右，温度控制在18℃-28℃,湿度以80%-90%为宜，以后逐渐保持在70%左右。缓苗后逐步提高光照强度至6000lx-8000lx。项目要求：写出研究报告一、项目目标铁皮石斛体外快繁是解决目前铁皮石斛资源与需求矛盾的重要途径。目前铁皮石斛研繁操作技术，满足浙江大学实习就业需求。超净工作台及配套接种用具(无菌接种工具、酒精灯、酒精棉球、70%酒精瓶，无菌培养皿、打火机等)培养基三材料铁皮石斛试管苗任务1铁皮石斛扩繁操作任务2驯化移栽任务1铁皮石斛扩繁操作---茎段繁殖换白大衣，口罩，帽子进入实验室，打开紫外灯，风机消毒20分钟，时间到后关闭紫擦好，拿进母