花青素提取方法总结

玉米籽粒花青素提取和分析方法1花青素是植物中的主要呈色物质，属于类黄酮化合物自然状态下很少以游离态存在，常与一个或多个多糖通过糖苷键形成糖苷已知有20多种花青素，植物中常见的有六种：天竺葵色素、矢车菊色素、飞燕草色素、芍药色素、牵牛花色素、锦葵色素（其最大可见光吸收波长分别为494、506、508、506、508和510nm）2花青素的生理功能消除自由基、抗氧化紫玉米花色苷具有很高的抗氧化活性和抗菌活性，甚至高于蓝莓的抗氧化活性。抗诱变、肿瘤、过敏抑制食品诱变剂，对结肠癌细胞有抑制作用降血脂3花青素的结构特点现已查明,天然花色苷糖苷配基的基本结构为3,5,7-三羟基-2-苯基苯并吡喃,结构式为:4花青素的稳定性影响因素结构①C3羟基可使分子变得不稳定，C5上有羟基或C4发生取代都可使颜色趋于稳定②糖苷的形成也影响花色苷的稳定性③花色苷的酰基化显著增加其在微酸性至中性介质中的稳定性5温度PH醌型碱黄烊盐阳离子假碱查尔酮6温度

当花色苷溶液加热时,平衡向着无色的查耳酮(C)的方向进行,同时引起有色型化合物(AH++A)的降低。当冷却和酸化时,醌型碱(A)和假碱(B)迅速变成阳离子(AH+)。花色苷在温度小于60℃的条件下较为稳定，当温度大于80℃时，温度对花色苷有较明显的降解作用；光对花色苷的稳定性影响很大7辅色剂的影响花色苷同辅色剂联合形成一种垂直层叠的复合物(Goto等1979),这种层叠过程产生一种疏水力,从而防止亲水核的加合作用和失色。8提取方法：

一、萃取溶剂法

常用的溶剂主要分为3类:水、亲水性有机溶剂和亲脂性有机溶剂。为防止花色苷的降解和提高花色苷的溶出率,常在溶剂中加少量的无机酸或有机酸，使提取液的pH控制在3.15以下。9这是陈目前充国内葬外广焰泛使拌用的衣提取推方法较，多悲数选唐择甲汽醇、乙丙醇、丙酮把或它扯们的轨混合填溶剂依对材钞料中遮的花躁青素巷进行摩溶解勾过滤包，通凳过酸意或碱吸调节信溶液跳酸碱依度萃律取滤薯液中合的花垃青素堡。该方漠法原夜理简歌单，蜡对设务备要没求较者低，耳不足钳之处港是大趣多数盖有机确溶剂鸣毒副减作用万大且承产物耳提取辉率低榆。有机均溶剂烛萃取山法10水溶侍液提且取法该方冠法一驾般在畏常压剃或高仓压下和用热凑水浸严泡含吼花青休素的纺原材叹料，馅然后仅用非棍极性崭大孔士树脂虾进行殖吸附祸；或贝直接蚀使用暴脱氧助热水励提取皮，再巴采用痕超滤打或反棒渗透西经浓爪缩得袋到粗滑提物陆国贝权等央研荡究表擦明，蕉提取相脚板慕薯花京青素必的最单佳方昆法是歇：以0．5％亡硫酸开溶液巩作浸勇提剂萝，并嫁使其pH肾44．0，在6O陵℃下加踏热60云m的in。设备披简单虽，无至污染款，产统品无旷毒但园纯度怕低。11超临汇界流衬体萃扫取法利用登压力扯和温帝度对酒超临吐界流签体溶伍解能姥力的抹影响遮进行材提取崭。最大拳的优错点是酸产品谷提取类率高弯，可捐以低缩慧温操楚作，锄避免抱了不框饱和显脂肪境酸的袋氧化殃分解伪，溶差剂无殖残留问，且美作为歌超临悟界流迹体的CO2易得轧，萃敏取能逃耗低五。时海恢香等注人研导究了杨超临忙界C肥O2萃取久常山节胡柚摄天然杂色素脸的工撑艺，色素枣提取著率可辛达96粮.1育87%12提取椒方法茧：遇二、忧破除卖细胞赞壁发酵廊提取巷法①隐原理闹是:通过伤微生鸦物的犯作用己使紫炉甘薯笔中的评淀粉风转化士为乙鞭醇,将乙绿醇分延离后,可得声到紫抓甘薯沾花色正苷,原料国的利最用率严大大烤提高耍。②虫其利露用微牛生物衰破坏盟细胞真壁和样细胞所膜,促进卧花色宁苷的袖溶出,提高新提取悠率。夜通过便发酵地分解页色素涨液中兼的糖悬、有态机酸临和其柱他杂重质,大大确降低棵了色姐素的形纯化挪难度马。13酶法内提取用于霞花色掏苷提思取的欣酶主励要有抗纤维基素酶眼和果拖胶酶,通过桐酶解晶使植泡物细惕胞壁仆软化般、膨厕胀及饭崩溃,从而炒促进鼓了花数色苷幼的溶请出。王萍壳等人历通过侍单因姥素和调正交滚试验,确定锅了黑清加仑户果渣租花色皱苷酶歌法提历取的伤的最恰佳工鼻艺，烛黑加裂仑花艳色苷尖提取互率的91颂.1侮09尺%肠,此法终可以霉大大绿缩短剪花色今苷提子取时两间,提高头得率红。14辅助锈方法超声愁波辅疲助提窗取①御在超拍声波些声场甚中,振动役负压棚区由慌于周着围的陶液体徒来不闯及补驻充,形成味无数机的微梅小真芬空泡,而当刑正压黑来到敲时,微小肚气泡订在压盗力下鹊突然供闭合,液体编间猛串烈碰密撞产市生极缓大的椅冲击粘波,压力溉可高牲达3兼00什0MP玻a,从而强使植植物细教胞破施裂,利于酸花色测苷的恰溶出发。②每此法构具有葛提取凭时间烛短,设备毫简单,操作散方便矿等优歪点,并可铁有效足防止义热敏欢性成局分的辩高温甘分解它。15微波耐辅助聋提取当微尖波加办热时,细胞播内极席性物需质尤架其是照水分血子吸涂收微如波能,产生著大量捆的热绳量使环细胞戴内温涝度迅课速上扑升,液态鬼水汽戒化产舰生的鼠巨大装压力洪将细态胞膜狗和细星胞壁田冲破,形成廉微小女的孔惩洞,使胞参外溶宵剂容境易进茧入细钞胞内,溶解您并释循放出奶胞内巷物质驼。与传射统方如法相筑比,微波钱法具屋有提耐取率刃高、摔时间隐短、狐能耗样小等描优点,因此青微波佩用于天天然牙素的捕提取吹工艺护具有何广阔勺的应萍用前紫景。16其他养辅助嚷方法高压笔脉冲程电场黄辅助除提取高压蕉脉冲袍电场慢辅助默提取为法是并一种岁新型嚷非热纺技术,它具救有提商取温法度低士、速斜率快援、时提间短蚊、提柜取率躬高、骆产品脂品质宫好的姨特点倚。液态芬静高束压法肥辅助暴提取Co裙rr幻玉al冰es等人圣用液乱态静介高压督辅助雅提取块的方妖法从君葡萄迫皮中锡提取知花色橡苷,研究稳所得撒的最顽优工贿艺参修数是:1遮00盟%乙醇,温度50惹℃挡,压力60霜0MP典a。此摇法与宅未使朵用HH笼P法相场比,产率钥提高23美%。H努HP具有险提取悼温度矩低,时间膀短,不破屯坏色煎素结乔构等党优点,但应君用于矮花色斧苷等宝活性害成分舅提取准的报辫道还策不多呼见。17提取还条件谷比较1819纯化经过读提取逮的花互色苷宋粗品琴中往域往含临有很载多有杰机酸杨、糖粪等杂是质,产品陕质量迈稳定苗性差诱、纯阀度不篇高。篮为了瞧提高捎产品好的色男价和垫稳定千性,需要神对提锦取物丢进一壮步纯访化。20柱层隆析法凝胶输柱层跑析聚酰裙胺层绵析硅胶艰层析离子欧交换棍层析21大孔坏树脂够层析大孔怨树脂陕是近趴代发赢展起杯来的吸一类跃有机缎高聚丈物吸炊附剂站。分段离工如艺得驳到的愈提取补物不伞吸潮举，工缺艺简蒜单，编成本逝相对宾较低倡，树炕脂可融反复赏使用仇适合劳工业料化生膀产杨迎嘴花等诸采观用大茶孔树进脂吸秆附纯柜化葡缴萄籽按原花晨青素爬，结及果表与明大咐孔树侨脂吸拼附纯避化工蔽艺简灵单、扎成本豆低、缺产率蚀高、忆安全着适用专。22膜分浸离法花色骗苷提屠取中恳常用籍的膜吴分离蚕技术屡有超乌滤(U醉F)、反钳渗透(R得O)、电匆渗析(反ED殖)等。Pa吓ti爸l用酸呼化的牧乙醇愉提取耕红萝让卜花职色苷,随后灵用膜建分离钱的方损法有音效的陶脱醇名并浓轧缩了什花色妥苷提咽取液,使花程色苷笑含量本从37青21港6村mg济/践L提高蔽到62渣51弯8王mg央/闪L膜分偷离纯斤化的嫂花色通苷色夕价和采透明瓶度高,稳定荣性好,容易鞠实现惰连续个化生辅产,生产嫁过程仁劳动匆强度挑低,流程盆简单,但对葬设备岭要求持高,纯化蛮成本非高,提取帖效率毕低。23鉴定经过例加工扶或储夜藏的少材料螺会产厨生褐棋色降押解物,这些故降解婚物和泄花色毅苷具提有相乒同的盖能量杠吸收予范围.这类牧花色肃苷总些量的转测定,通常好有两惭种方尾法①疾pH示差刷法②顿差减网法24鉴定贡方法柱层鸣析薄层惩层析光谱瘦分析旗法HP遮LC、MS、HP英LC－MS核磁途共振债法毛细狸管区糊带电席泳法25紫外覆－可格见光删谱法色素构的紫只外吸凯收光松谱是换色素蓝的重福要特校征。熄吸收科光谱邻是鉴才定和倾测量葬混合外物中利主要稳色素纤的最俊简单蔑方法靠。其葡主要蚁原理细是依墓据花耽色苷眯的不砌同基阳团的宜在不树同的蒙波长逼下有躺不同快的吸哄收峰,进而高推断春出其随结构织。①B环有皇邻位召羟基昏的确圣定。从②糖皂基位气置的锄确定霉。③绸酰基恩是否壁存在纷的确网定。敢④甲屠基化嫁与羟诸基化26HP酬LC高效汗液相堤色谱柿法(营HP株LC凯)以经奴典的霜色谱肆法为此基础,引入裳了气俱相色尿谱法占的理弯论和相实验粮方法,流动艘相改微为高匙压输唐送,采用膨高效逃固定覆相及梨在线灭检测侨手段以发展咱而成最的一餐种高轿效快戒速分艘离分检析技番术。HP茂LC可以摆在30蹈mi赚n一个巷流程多内分融离15种不样同的笔花色崇苷,其分拾辨能喘力远镰远超颜过纸愿层析拉和薄短层层方析。缴但是,由于素缺乏才花色饥苷的倾标准按对照侮品,使得验仅靠HP佛LC方法帆对花揪色苷俱进行恨定性时和定政量分捆析还聋不够犹充分举。27出峰暑顺序9种花悄色素欣苷的涨出峰购顺序盈：花暖翠素3．O一葡厦萄糖妥苷、织花青脸素3-仆0．葡罩萄糖桑苷、3’一甲撒花翠梢素3．O．葡正萄糖底苷、维甲基功花青结素3．O．葡含萄糖渴苷、血二甲考花翠机素3．O．葡票萄糖逝苷、造甲基尖花青私素3．O一(6一O一乙中酰)葡萄嚷糖苷麻、二时甲花叫翠素3．O．(6．O．乙耳酰)葡萄旋糖苷迷、甲圾基花烫青素3．O．(6．o-对香藏豆酰)葡萄良糖苷吊、二胶甲花拼翠素3．O．(6．0．对镰香豆芽酰)葡萄坐糖苷28双标哀样高刃效液商相色速谱法股测定债紫玉师米花益青素雁的含傻量设备Ag惭il刃en膏t盖1隐10池0高效鸽液相咏色谱妇仪和Ag则il销en堤t坊Io兆n撞Tr匙ap改—X议CT碑M溜S：美葛国安劲捷伦扎公司小；Wa忠te盲rsXb存ri赢dg喉eC1庆8(锹25蹲0叫mm蒙x4．6焦mm，5μm)柱：换美国Wa盛te蹄rs公司色谱更流动煎相：A(协5％甲卵酸)，B(甲酸厨：水孙：乙匹腈=5：45：50，体姨积比)；流功速：0.8m躺Um城in;DA灿D检测鸣器；睬柱温30斗℃；梯甩度洗队脱。29标样C3抹G和P3晚G（紫玉叫米花也青素救其主荣要以C3波G和P3盒G及其超衍生职物为浊主要愉组成潜部分）结果C3萄G的加内标回占收率乱为93拢.7义%（RS抄D为0.低80拼4贞%），洽可以握确定倘以C3舰G为标剖样测后定样芝品C3起G含量技更加敌准确执。同红理，筐样品跳中P3竿G及其龄衍生颜物以P3程G为标席样获晨得的都结果周更可残靠。并因此浴，使激用双归标样气高效荡液相予色谱创法获蝇得的惩紫玉祥米花梳青素说含量英（93称.7悲7凡mg遭/g）更黎加准拣确。P3登G：芍药挽色素-3珠-葡盆萄糖C３G：矢车序菊色怕素-3径-葡萄省糖苷3031紫玉越米花齿青素困种类近年没来,采用飘温和咏的提县取分推离方艘法和狐现代奇分析泼仪器巷手段液如TL邮C、HP株LC、MS、NM偿R等,Ao遮ki等研应究发连现紫价玉米刻籽粒西中含鲜有8种花沈青苷:矢车琴菊素-监3-葡萄牌糖苷势、天蔑竺葵述素-登3-葡萄喊糖苷岛、芍校药素-族3-葡萄矮糖苷俗、两查个矢倒车菊统素-同3-丙二仍酸酰穴基葡欠萄糖谋苷同瓣分异遗构体谣、天缎竺葵犬素-截3-丙二龄酸酰罪基葡库萄糖理苷、柏芍药尚素-警3-丙二秋酸酰浙基葡市萄糖死苷、清矢车术菊素-滚3-二丙翼二酸夺酰基雄葡萄玻糖苷例。Zh院ao等对拜中国膀紫玉援米杂朗交品疏种的梅籽粒络进行涌了质团谱分铃析,初步沟发现9个花怀青苷柏单体尺物质,包括悄矢车损菊素-持3-葡萄销糖苷指、天催竺葵金素-抓3-葡萄铺糖苷壳、芍害药素-叮3-葡萄漏糖苷犹、两授个矢墨车菊康素-棵3-丙二炊酸酰寨基葡短萄糖蛮苷同忍分异绑构体窗、天辉竺葵漫素-侍3-丙二谱酸酰在基葡战萄糖刊苷、碌两个添芍药刚素-渔3-丙二括酸酰垮基葡康萄糖属苷同跟分异负构体笑、天串竺葵拐素-绍3-二丙径二酸林酰基崖葡萄止糖苷改。32含量每10姑0酿g秘鲁姨紫玉受米中左含色云素物展质为1换64踩0m鞭g贸,远远解高于培鲜蓝鉴莓花沉青苷延的(看73济~追43奔0m有g)。籽粒渗表皮考含大翅部分臂的花左青苷,通常抄为50竭4~岩1看47牧3m赖g,而M