非小细胞肺癌文献一篇

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LiquidChromatography/MassSpectrometryMethodsforMeasuringDipeptideAbundanceinNon-SmallCellLungCancer褚晓芳使用液相色谱-质谱技术分析非小细胞肺癌患者组织中二肽丰度的变化主要内容肺癌简介实验流程样品处理LC/MS分析MS/MS分析MS数据分析质量控制统计分析主要内容实验结果肺癌相关二肽数据库产生肺癌组织中二肽的识别MS/MS二肽谱图不同分析条件下二肽的识别肺癌组织中二肽的靶标分析结论验证研究意义及不足肺癌简介在美国，肺癌死亡率在所有癌症中最高，2012年共有165000死于肺癌。在全世界范围内，估计肺癌影响超过100万人。肺癌中80%是非小细胞肺癌目前，肺癌早期及进展阶段仍没有灵敏度高的诊断手段肺癌相关的代谢组学研究较少肺癌相关研究肺癌早期的代谢组学研究表明在肿瘤样本中有许多代谢物发生表达的改变在不同化疗耐药性的肺癌细胞系中，胆碱、脂肪、乳酸、甘氨酸水平有明显的改变在埃罗替尼治疗或进行切除手术的患者中，同侧细支气管肺泡癌发生病变在肺癌患者血清和组织样本的混合物中，有48种代谢物在组织和肺癌不同进展阶段有明显改变二肽对真核生物的作用二肽在蛋白质营养、增长及发展中其重要作用二肽水平通过肽转运体中的膜蛋白调节肽转运体广泛存在于大脑、胰腺、肠、肾脏等器官中主要内容实验流程样品处理LC/MS分析MS/MS分析MS数据分析质量控制统计分析样品处理Testingset:9名确诊为肺癌恶性腺瘤的男性样本:

①有代表性的肺癌组织切片

②与肿瘤组织相邻的正常组织切片

③距原发肿瘤＞3cm处的正常组织切片样品处理Validationset10名确诊为肺癌恶性腺瘤的男性样本:

①有代表性的肺癌组织切片②距原发肿瘤＞3cm处的正常组织切片样品狠处理Va事li智da炼ti缺on叼s均et6名确馒诊为封肝癌恢的患律者目的:证明绿在非陈小细除胞肺斗癌患逃者中介找到席的代碌谢物须标志物邪具有病特异描性所有眯样品邮在分吹离后呀快速抱冷冻30贵-6胸0m练in，处箱理前测在-8拣0℃保虽存样品乡丰处理组织更提取①将盗分离瞎的组叔织称有重后嫁用不汤锈钢雁珠同根质化梁，频祸率为20次/s，持源续30摄s②加遗入标目准溶汁剂混趁合物赌重复4次同料质化顿过程③用僻蒸汽袍离心愉蒸发预浓缩百器干词燥氯附仿-甲醇-水层叼中的次极性泥代谢苹物④将技干燥田后的桂样品抚复溶对于水样品锈处理⑤衍件生化笨：50μL极性万代谢个提取织物+2投5μL0毒.1柜M的四究硼酸袄钠缓堵冲液+5脱0μL嘴20忆mM丹磺面酰氯(乙腈欣为溶苍剂)，涡跟旋混联匀丹酰环衍生躁化目晕的:提高妈代谢两物检款测敏漫感性10杠-1浓00迈0倍提高裁极性伪代谢旦物在村液相窄色谱肝柱上疫的保相留和娱分离⑥室渡温孵遵育30栏mi障n，加货入50μL钩0.盼5%甲酸陡停止放反应⑦将锻反应存混合守液上谋层清闹液转推移至爆自动泰采样衡瓶主要佩内容实验汤流程样品摔处理LC饶/M倍S分析MS灭/M洁S分析MS数据屈分析质量籍控制统计个分析LS蓄/M拖S工作茂原理局：通过栽液相魂色谱灭分离诞化合抹物(主要鸡是沸叛点高跃、极杠性强咳、热诉稳定赖性差即的化螺合物)，再微通过端电喷志雾电术离产控生样涨品离付子，爪进入吓质谱裤仪后竭按质王荷比睬分离誓，然饶后测宇定各私种离新子谱绝峰的愚强度曾而实志现分威析目饿的。梯度栗洗脱叛装置:利用场两种扬或两钱种以惕上溶塘剂，暂按照采一定签的时醒间顺码序连泄续或再阶段偿改变栗溶剂粘比例换，从砖而改疲变流按动相纷的极西性、拍离子缘瑞强度置和PH值，这使样俱品的州各组潮分在享最佳参容量蛾因子伪值范脆围内购流出牲色谱收柱，啦改善舰分离薪效果质谱瞧解析厅一般河步骤:核对逼获得结的谱碎图，梯扣除圈本底佩等因阶素引蝇起的耗失真尽可店能判播断分脱子离览子，歉即确妇定分掠子质妄量;谱图粱中往连往有呢很多粒碎片杰离子爆，这凶些碎懒片离喘子是赞由准渴分子紧离子霞裂解给产生假设掠和排惩列可铲能的廉结构亿归属戴，高袖质量葱离子朋显示盐的M-股1，M-堂15，M-障18膛……即表致示失倦去H、CH3、H2O…坚…推出搭可能浩的分压子结崇构，栋以标镰准谱基图对谅比，浇确定絮分子涌结构LC蛇/M繁S分析仪器扰：安再捷伦65炒20系列撤四极坊杆飞月行时喝间串闲联质象谱仪(带有哨安捷抬伦12递90超高公效液哈相色耐谱系蒸统)方法A：Zo肝rb回ax罚C18液相扭分析麦柱流动异相流疫动速臂率5μL涝/m缎in洗脱劲液B:升5%壳-9乞5%浓度冤梯度洗脱斜时间:3宏0m迅in，95盗%B时维崇持5m诱inLC傻/M然S分析溶剂A:叨HP岂LC水+0禾.1陵%水溶剂B:写LC鲜/M赠S级乙秒腈+0纪.1觉%甲酸毛细冤管温率度:3勤25℃m/锋z1茅0-舟10肌00之间刚进行匆全谱午扫描常用蒙固定鸽相:硅胶抢、氨雷基、啄二醇逢基等常用淡流动约相:水、恶乙腈弟、异别丙醇LC书/M美S分析方法B:Ph瞒en耽om忆en父ex宗K甲in摇et去ex销C18液相惕分析砖柱流动缸速率0.社5m昌l/堂mi驾n进行坑洗脱洗脱券液B:够5%另-9球5%浓度门梯度T(min)B(%)0.5520.5602595309555LC凑/M何S分析方法C:Ki不ne风te贤x液相看分析残柱流动太速率0.旬5m惜l/览mi萄n进行烫洗脱洗脱偷液B:材10版%-漠95昨%浓度掘梯度T(min)B(%)0.5102.52017.560189555主要监内容实验酱流程样品因处理LC凝/M跳S分析MS肿/M神S分析MS数据畏分析质量两控制统计速分析MS刻/M植S分析仪器奇：安惜捷伦65躁20系列肝四极米杆飞素行时异间串碍联质瓶谱仪靶向MS贷/M编S分析:保留够时间:0回.6米mi丑n离子诊碰撞亚能量:2懒6V躬(质量六大的纽奉分子:3斯2V鞭)分离嗓宽度:4窜m/卖z为何磁在用LS窄/M冒S分析宪后，命还要劲采用MS蛾/M肉S分析茶？LS众/M乓S谱图号中样木品的性准分匀子离旧子峰铅丰度狠较高述，碎故片峰僵则少添而弱身，因绍此主装要给磨出与刃样品翻的分挺子质娘量相州关的魂信息饰，而灾很少勾给出诵与样咏品结衔构有献关的社信息惩，采霜用多脾级质政谱MS浪/M浴S可以舰弥补夜这一险缺陷哄。主要地内容实验碰流程样品捐处理LC湖/M急S分析MS凝/M参S分析MS数据际分析质量啊控制统计景分析MS数据泥分析非靶昨向数嘱据分岂析:使用帆代谢惭组学锄分析失软件丸提取昼保留脚时间帮一致查的峰暖，用亿最小屯二乘畜法检积测非饲靶向敞代谢偿物的独特征鸣，比股对特沸征分撞析数唉据库持识别貌评估安的结熊果。靶向筋二肽弱数据烛分析:使用险二肽倾数据擦库和私特征足分析抹数据撇库进粉行比碌对MS数据榴分析为什计么要倒进行柔峰对线齐？为了衬利用图色谱刮图中偿所有觉可以心识别算的峰喊的信洞息，盖必须戚对谱掠图进飘行峰搜匹配赛，不笑同样洪本中壁同一招代谢牺产物苦在生秤成的淡数据血矩阵幸中必醋须由寄同一备变量益来表捆示，舰这样荷各个勇样本狂间的兄数据底才可浆以比肠较。对数尤据的赖要求叶：①召有相应同数葬目的组变量暗描述管②每作个变句量在骂样本喷中均翠出现词③所勺有样齿本中朴的变仁量代瞎表的呈意义过相同主要密内容实验触流程样品摆处理LC稻/M培S分析MS坟/M雄S分析MS数据疾分析质量短控制统计估分析质量算控制进样例前后粪分析概经过跨衍生察化的26种氨申基酸触标准甲混合质物目的:保证思衍生惊化作缸用有雷效进息行检验铺仪器院性能肚状态帝的良星好保证隔能够纹获得题连续窝的保溪留时本间主要更内容实验竭流程样品伴处理LC首/M铅S分析MS杂/M杀S分析MS数据竹分析质量壁控制统计离分析统计迷分析非参液数秩灭和检重验:评估姻肿瘤瓜组织晋与两菊种正太常组贫织中眯检测坚的二购肽水死平有腐无明稼显变锯化结果:没有躲相关守的二夜肽有症显著自性差真别二项售分布:在检申测的33率4种二天肽中捆有10秤5种有蝇统计舟学意水义因3个样帖本来播自同委一个计体，链故需坦分析任样本避大小拣对代棚谢物祸检测课结果齐的影刮响主要墨内容实验当结果肺癌守相关培二肽械数据杂库产铃生肺癌丑组织扰中二膨肽的刻识别MS穴/M渔S二肽扔谱图不同沈分析侄条件赛下二板肽的乖识别肺癌态组织白中二腐肽的慕靶标伙分析结论裁验证研究叮意义屈及不甘足肺癌如相关笨二肽爹数据晨库标准荒品二勿肽合或成:基于恢组合智合成岁法的胡阵列袋及包匀含组蜻氨酸买的二滩肽，漂不能逗合成虑的二容肽通葵过Aa要ns另pe呀c脂In营t公司性获得混合盛物配单置:将7-寄30毫微妨升具富有相批同C羧基街端的18种二通肽混啦合并事用50怒%乙腈榨和水肆稀释攀成10μM，丹为酰衍停生化响后，法采用LC方法B及MS全谱熟扫描肺癌谎相关原二肽莲数据刑库氨基部酸是后生物什样本誓中唯殿一分稼析物萌，故练用氨题基酸纽奉作为魔标准渡品氨基香酸保狸留时称间的狭多项掩对齐隙是对胳齐二催肽保掘留时匪间最延好的缝方法肺癌呈组织从中二涛肽的盛识别36魄1种二坚肽中敌只有16圾1种有劳独特廊的化粪学分迟子式差，只达有17种是墨单一闪的异域构体(A渔A)同分今异构焦体二焦肽的慢识别欠需要欺仔细盯比较虎其滞寺留特循性合并昂肿瘤杜样本霉再分秘析得劳到27垒9种二忠肽，触其中23绪4种二误肽的陷质量逮精度铁＜5p粪pm，45种＜10启pp粗m，将27崖9种二歉肽保现留时奇间与自数据装库比浙对，钻大部蓝分二旬肽保俩留时酒间在0.溜1m前in内，劳但有且精氨贫酸的涝二肽拾标准筑品和莫样品搁有明浪显不叔同MS俘/M掘S二肽隙谱图丹酰遣化二率肽的MS芹/M族S谱图逗通常挑不提须供信葵息，忍而主推要以末丹酰神离子添为主由丹莫酰分他离出州来的C12H12N阳离结子在翠大部津分丹溪酰化南二肽岩谱图绕中产愚生基株峰，m/苏z为17短0.缓09拢6495遥%测量纯值与稿真实抹值相胜比降驰低(精度绣误差这小于13杆pp昂m)根据谊测量滨值得盛到的稻化学蒜分子躁式精雹度误注差都矩在13守pp毅m以内MS糟/M着S二肽默谱图MS驰/M很S二肽唤谱图其他史丹酰贿特征抢的离碑子还该包括:m/扯z工23秒4.睬05漠9纲(C12H12NS且O2)在单源一带茎电离乞子中袖普遍督存在赠且变到异较影大；m/凝z烈25鼓2.摘06荐9该(C12H14NS略O3)在含傍氧二写肽中意普遍谜存在怠；m/责z揉18税6.诞09女2扶(C12H12NO刘)离子说也很云普遍MS列/M镰S二肽炮谱图丹酰桂化二枝肽分过裂处(经典僻离子)MS臂/M高S二肽热谱图丹酰掏化二居肽分块裂特群征碎源片MS择/M然S二肽储谱图MS杜/M指S二肽虚谱图炕其他乞明显医特征槽：由氨伟基酸I/键L/终V/示A组成保的二益肽在浅位1或位2有经配典的I离子色氨厕酸的I离子懒会发沙生中钳性分矩子的障丧失园，产拐生m/导z1胆44和13鼻0的特招征性请碎片二肽佳通过始中性肌丢失(焦谷北氨酸忽盐)使c离子任增加带有链氨基拣酸R、K、H的二总肽有览复杂应的特泄征二肽XR、RX使m/酿z为15烧6/裁15言7碎片防增多MS温/M侄S二肽病谱图赖氨网酸二尾肽经瘦常带裁双电耻荷，m/滨z3遭17碎片烘显著学，还坝有m/济z8封4经典等碎片组氨扩酸二塑肽也控经常共带双向电荷少，I1和I2碎片遗离子防较多HX双电导荷二桥肽与NX、MX有相刺同的m/侮z2图61的碎悟片离筹子蛋氨次酸二推肽在m/修z3份37发生伐多次鹿分裂练，产印生不接同碎齿片离纤子不同妇分析脊条件他下二膜肽的后识别氨基瓶酸作文为内压标可衬以使浙来自桐不同厘实验舞室的树代谢冬组数星据具鸽有可脑比性本地迁散点节平滑坊估计(L故OE爽SS壁)是最间好的简校准屋二肽符保留港时间免的方舟法肺癌孤组织黑中二占肽的捞靶标北分析采用蹦最小坡二乘混法比哥较肿顷瘤组核织与彼正常微组织悠中丰菠度变滥化明滤显的费二肽有25梳7种二掩肽至哪少在堤一种贫组织取中被吐检测冲到，法其中25染3种在答肿瘤察组织认中检典测到在肿倡瘤组喂织中秘检测嘱到90种二嫩肽丰执度与紧正常党组织逗相比粪有明莫显的蚊增加(倍数鱼＞2