第三章 高效液相色谱

高效液相色谱法HighPerformanceLiquidChromatographyHPLC1高效液相色谱法一、高效液相色谱法的特点二、流程及主要部件三、固定相和流动相四、主要分离类型五、影响分离的因素2以液体作为流动相的色谱过程HPLC定义3高效液相色谱法的特点高压

---150~350x105Pa高效---3万塔板/米高灵敏度---10-9~10-11g高沸点、热不稳定有机及生化试样的高效分离分析方法4

GCHPLC流动相惰性气体（无亲和性，只起运载作用）气体、沸点较低的化合物不同极性的液体（有一定亲和作用）温度较高一般室温分析对象高沸点、不稳定的天然产物、生物大分子、高分子化合物GC与HPLC比较5（一）分配色谱（二）吸附色谱（三）离子交换色谱法（四）排阻色谱法高效液相色谱法的类型6分配色谱液液分配色谱(LLPC)键合固定相分配色谱(LSPC)

分配色谱法(PartitionChromatography)液体固定相通过物理吸附固定于载体表面有机分子通过化学反应键合到载体表面7分配色谱–分离原理不同组分在两相间分配系数不同8固定相

---物理吸附（担体+固定液）全多孔型担体薄壳型微珠担体分配色谱固定相固定相

---化学键合R---极性基团疏水基团离子交换基团9固定免相的浸化学宪构造非键记合相朴表面键合两相表绣面OD劫C室C18C8C1Ph叹en餐yl-N鼓H2-C肝N10正相HP基LC（no预rm钟al密p真ha乌se埋H斥PL写C）：是由筑极性尼固定功相和鱼非极玩性（奔或弱歪极性过）流好动相援所组逝成的HP扫LC体系地。其鸽代表挥性的僵固定槽相是及改性躬硅胶风、氰仿基柱艰等，色代表侍性的密流动烟相是饶正己峰烷。溉吸附摧色谱颜也属榨正相HP剖LC。反相HP悬LC（re杠ve廊rs牢ed拢p脸ha锯se学H硬PL给C）：由非医极性字固定怠相和稿极性咏流动筋相所巨组成涨的液具相色昌谱体橡系，毫与正产相HP满LC体系王正好帮相反拒。其这代表钩性的早固定暖相是出十八叶烷基壤键合亿硅胶(O为DS柱）缩慧，代灶表性葬的流疫动相箱是甲陪醇和太乙腈貌。是旧当今珠液相据色谱蚂的最骂主要盖分离接模式录。OD鞭S（Oc杀taDe栏cy刷lt篇ri绍ch供lo弹roSi揪la余ne)11正相分配色谱反相分配色谱固定相性质极性非极性键合基团

极性基团疏水基团流动相性质非极性极性出峰顺序极性小先出极性大先出12吸附透色谱宾法分离员原理溶质批与流惩动相坏分子何在吸现附剂陪表面尾上的蓄吸附扁竞争13吸附县色谱亲固定感相以固摇体吸自附剂厅为固私定相携，如博硅胶动、氧片化铝太等，抖较常欣使用傲的是5～10顷μm的硅纸胶吸批附剂潜。流蚕动相化可以脏是各导种不恼同极走性的攻一元甚或多竿元溶共剂。14离子胀交换词色谱固定纠相为杂离子住交换柄树脂，流动漠相为拔无机肺酸或午无机渔碱的扛水溶羊液。各种热离子希根据搞它们参与树屑脂上轰的交莲换基兰团的衬交换皮能力叮的不陕同而早得到岛分离酬。分离季原理固定退相分离鼻对象离子侄或可织离解千的化贺合物（无坦机离爷子、渴氨基沈酸、考蛋白扫质等净）15分离裁原理根据胆样品揪分子分尺寸铜大小寸分离大分钳子不绍能进图入多龟孔中途，不寄被保术留，苗随Vm流出中分这子部病分进福入多墨孔中渠，一保般保芝留小分示子完仇全进抬入多此孔中值，长干时间凶保留站。排阻羞色谱法(凝胶顶色谱旬法)161.软凝洲胶：铰链肯葡萄付糖的女多孔技聚合自物，读聚丙哥烯酰欲胺凝舅胶。唤（凝主胶过叠滤色津谱）2.半硬好凝胶苹：聚苯绘乙烯难珠（烤凝胶清渗透秤色谱刺）高硬站凝胶司和玻黑璃：多孔害玻璃面或多击孔硅种球，皮经化上学键耽合处杀理，糕不随坏压力狗及溶馒剂改削变尺猛寸，胆（高劳效排贩阻色芒谱渗）排阻汇色谱这固定园相17高分诉子化俊合物座分子谁量及兔分子胖量分假布DN融A碎片毁不同待碱基刻支链虹分离洋。应用18流动定液贮琴存提桶供脱辉气输液左泵进样有系统分离带系统检测马系统控制基与记机录系首统高效座液相律色谱尚仪19日本孩岛津痕公司20美国Wa匙te逢rs公司21（1）真军空泵雨抽滤满系统（2）低总溶性超惰性奖气体镜导入情替换（3）超环声脱歪气（4）在纱线脱秧气流动直相脱化气方挠法22输液堂系统高压毫输液陈泵：高压夹输液劣泵是缩慧液相侵色谱支仪的腊关键顺部件势，其葛作用腐是将根流动外相以伴稳定顾的流储速或塌压力依输送南到色闸谱系全统。输液狗泵的蝇稳定控性直蓬接关患系到邪分析溉结果门的重敢复性仿和准根确性删。活塞桂泵注射先泵气动证泵23进样稼系统不使凝整个朗压力袖变化址的情杜况下它将样茫品注屋入色耻谱柱咏，通福常使王用所触谓六通秒阀24色谱柱色谱柱泵泵12进样不使行整个征压力依变化喉的情浴况下温将样积品注姐入色躺谱柱桨，通学常使圈用所努谓六通阀进样肉系统25色谱工柱色谱的柱是克实现烈分离府的核凑心部脂件，虑要求楚柱效章高、岁柱容链量大香和性惠能稳葵定。耍柱性厨能与筐柱结朴构、突填料冲特性酷、填炼充质捏量和唐使用辞条件觉有关饱。26检测进器用来孔连续完监测痛经色凤谱柱顿分离些后的脱流出钳物的倘组成茫和含澡量变田化的恰装置妈。紫外-可见碧检测帜器荧光蔬检测夸器电化泄学检补测器蒸发遭光散朗射检沾测器质谱辈检测芹器27单波拴长UV检测锈器，佛光源掘用Hg灯，唯加滤朽光片世可以终到25浴4，28最0，31臂3，33贤4，36留5等。机生化努中用抬到很辟多。多波钉长梢光哲度计辛类似杂，光岭栅或榨棱镜彼分光A＝lg（I0/It)=εb目c紫外-可见泥检测耗器28荧光欣检测哥器许多天有机筛化合厅物，板特别芒是芳械香族饲化合户物、俩被一棉定强棉度和吸波长稀的紫团外光株照射侨后，紫发射泉出较锈激发厚光波梳长要忙长的晕荧光茧。但宝可以府与发确荧光档物质莫反应类衍生茫化后斜检测影。特点村：营有非残常高岩的灵紧敏度腥和良惭好的乳选择毁性，料灵敏胃度要腔比紫塔外检闯测法璃高23个数球量级袖，特必别适闯合于修药物晴和生付物化裁学样旧品的共分析踏。29荧光宅检测印器结息构示背意图光源检测生器滤光悠片检测昆室30蒸发责光散声射检覆测器蒸发拳光散少射检拌测器引适合木于无该紫外拐吸收纺、无醉电活无性和社不发托荧光户的样恼品的捐检测黎。31电化骑学检行测器（以疮电导味检测暑器为苹例）电导仪电极电极32标准吩样品垦法谱库HP那LC储-F嗽TI谦RHP垫LC喉-M生S定性盖分析定量君分析峰面贤积∝浓度耕或质营量33小结四种新色谱如分离扫模式辨的分兽离机安理及偷应用呈范围反相木色谱损的概熄念紫外骡可见器检测歪器常用面的固舒定相盆和流侍动相34高效稻液相傅色谱端应用牛实例35柱后pH调节腊电导竿检测对有捡机酸砖具有浆高选辉择性拾和高垦灵敏泪度36有机酸分倍析系统流程图2348756

91011、掌2理泵3芹进绍样器4挪柱系温箱5载电宫导检多测器6浊数奴据处著理机7桶混置合室8立柱子9挎流动忍相10吉缓冲益液37分析箭条件分离碗条件色谱阀柱：Sh倦im授-p转ac鉴k遣SC黎R-构10亭2H耀(8弯mm让I.匀D．×3进00白mm匆L.切)1个或2个分研析柱舰连接保护袄柱SC薪R-哄10圾2H勉(株6m盏mI鸦.D烟.×兽50鹿mm桥L.劲)流动你相：5m互M抗p-甲苯离亚磺劣酸水村溶液流量现：0.项8m盼L/亩mi羊n温度卸：40大℃或45膜℃检测条件缓冲历液：20善mMBi粗s-念tr佳is水溶违液含5m赶M道p-甲苯醒亚磺嘴酸和10白0μＭED抄TA流量固：0.恭8m皂L/前mi增n检测承器：电导款检测铁器po懒la迁ri成ty蹄;+38样品惹的分宰析实级例食品啤酒，清酒，葡萄为酒，酱油佩等体液血清，尿等医药滩品肾的揭透析液，钙制办剂等发酵微生郊物培养液，酸奶郊等环境工厂任废水退等39有机浴酸标所准品领的色穷谱图1一个振分析懂柱1.磷酸2.柠檬乓酸3.丙酮蛮酸4.苹果累酸5.琥珀域酸6.乳酸7.甲酸8.乙酸9.乙酰蛮丙酸10.焦谷截氨酸40啤酒供的色猪谱图1.磷酸2.柠檬糟酸3.丙酮史酸4.苹果副酸5.琥珀悦酸6.乳酸7.甲酸8.乙酸9.焦谷宅氨酸10.碳酸前处室理振荡莫除去彻碳酸鸟气后烛，过滤10嗽μＬ进样41清酒槐的色腥谱图1.磷酸2.柠檬龟酸3.丙酮马酸4.苹果颜酸5.琥珀程酸6.乳酸7.乙酸8.焦谷猛氨酸前处胶理过滤贿后，浅进样10铅μＬmi愧n.42葡萄扣酒的路色谱盈图1.磷酸2.柠檬辛酸3.酒石势酸4.苹果扫酸5.琥珀加酸6.乳酸7.甲酸8.乙酸9.焦谷谜氨酸前处匆理用水赖稀释10倍后聪过滤进样忠量10默μＬmi带n.43酱油限的色极谱图1.磷酸2.柠酸3.丙酮没酸4.苹果住酸5.琥珀桥酸6.乳酸7.甲酸8.乙酸9.乙酰肌丙酸10.焦谷隔氨酸前处玩理用水颗稀释10倍后迁过滤进样售量10景μＬ44血清稀的色终谱图1.磷酸2.柠檬梨酸3.丙酮悲酸4.乳酸5.甲酸6.乙酸7.焦谷俭氨酸8.未知销物前处送理加高劈燕氯酸暗用离偶心法灿去沉样淀物垂，取幕上清棚液5u屡L进样45尿样的袍色谱娇图1.磷酸2.柠檬认酸3.乳酸4.甲酸5.未知且物6.焦谷疲氨酸7未知菠物前处沙理过滤票后，勿进样10粥μＬ46酸奶甲的色聋谱图1.磷酸2.柠檬威酸3.琥珀勿酸4.乳酸5.甲酸6.乙酸前处异理用水础稀释10倍后验过滤进样戒量10邮μＬ47工厂创废水沟的色咏谱图1.甲酸2.乙酸3.丙酸4.碳酸5.丁酸6.戊酸前处泉理过滤谣后，杰进样10虽μＬ48食品誓安全果是所状有国线家的介每个济消费医者关堂心的棒基本窜问题汤。残留丈农药荷和兽势药是本食品捕中主扑要的婆污染捕物世界糠上许菌多国然家制先定并乔实施勇食品熔安全夕法规靠，但并是在销美国懒、加娃拿大踪蝶、欧月盟以写及日粥本食底品安软全法网规更眉加严极格的冰完善症。在食字品和边农产塑品国缠际贸染易中草，残你留农医药和御兽药勒的检辱测中舍非常陵苛刻州的。食品殿安全典与污晴染物49农产闯品-谷物暑：大件米等-豆类商：大诱豆、钻豌豆盏等。-水果嫁：橘淡柑，躬苹果世，葡捷萄等来。-蔬菜泥：洋职白菜继（甘碎蓝）柴、菠啄菜等-茶叶胡，种塑子，非蜂蜜夜等。食品渴中残战留检击测审查忆农药进残留家畜熟及水不产品-牛肉禽，猪碗肉等-鸡肉掩、鹌期鹑等-鱼类纹：黄沟尾鱼妇、虹捷鳟鱼下，大诞马哈圆鱼等-虾，躬对虾审查经兽药品残留50全世枝界使跑用的森农药鲁超过70规0种：姿杀虫挣剂，敏除草种剂，罚杀菌夹剂，作脱叶糕剂，笛植物舅生长危调节但剂。残留锡：残智存在像农产由品中牢的农雨药（市降解给缓慢长）及杰其代趴谢物虽由以彩下原故因所窄致：-使用暂更稳拌定的霉化学遗物质傅作农惜药。-农药牙的过探度使浊用以客及不腾合理城使用妹。最大罩残留爽限量(M疤RL永)：食品体安全分的指腾标，武通常MR省L≤友0.鲜01灿-0崭.0织5m黑g/请kg寸(p胖pm衰)食品净中的树农药杀残留51农药妖的残容留（1）有机欧氯化惜物：硫丹连、荚站蟥醚掏、克鬼菌丹乡丰、抑找菌灵暗、乙蔬酯杀坟螨醇们、溴稳螨酯毁、六刺六六疗、滴感滴涕店、异湿狄氏戴剂、惯敌菌闹丹、施狄氏锁剂、灵六氯许苯、纷七氯有机灶磷化软物：苯硫同磷，胳乙硫望磷，尝灭线哲磷，州乙嘧恰硫磷狐，硫音线磷蜓，喹慈硫磷箩，毒衫死蜱院，甲浮基毒猪死蜱列，毒仅虫畏讲，蔬阿果磷北，敌晴敌畏物，乐宾果，阅二嗪仓磷，肢甲基舞嘧啶汤磷，抱杀螟苦硫磷艺，丰坏索磷盏，倍泛硫磷甜，稻谜丰散您，丙蛇硫磷血，仗万杀硫筛磷，轰马拉俘硫磷腹，杀妥扑磷桶，异粒稻瘟走净，挎敌瘟例磷，借甲基支立枯帐磷，全特丁虎硫磷身，抑帅草磷猾，苯逆腈磷跌，对租硫磷级，甲阴基对哄硫磷暖，甲第拌磷52氨基滚甲酸妥酯：灭除娘威，瞧异灭栏威，色甲萘吼威，范灭杀照威，宿抗蚜醉威，灵仲丁经威，蜻残杀北威，吗恶虫胡威，怕速灭重威，废乙霉损威，氧氯丙手嗪，它禾草支丹拟除起虫菊稿酯氯氟渐氰菊症酯，奔氟氯露氰菊家酯，衣氯氰纱菊酯楚，七妈氟菊玩酯，敬四溴抱菊酯贵，氰芽戊菊音酯，碌氟氰助戊菊隆酯，佣氟胺求氰菊蔑酯，稼氯菊滥酯含氮森化合盗物：甲氰眨菊酯衣，噻倘嗪酮趋，吡秒螨胺构，恶川霜灵滤，灭汇螨猛讨，三捧唑醇辽，三消唑酮桑，氯钳苯嘧环啶醇鲁，氟磨酰胺真，丙哭环唑虹，联闹苯三捡唑醇努，灭河锈胺夕，灭路草灵杨，莠嘴去津叔，双拒苯酸秋草胺沫，敌罪稗，驴二甲柔戊灵展，氟糠乐灵垮，多槐效唑锣。农药忠的残爹留（2）53在过芒去几册年中判，相运关法桐规已武完成秩或修屠订，衣控制肿程度监更加戏严格恋。在欧陕盟和历美国厦已建淘立起赖完整赌的监馋测网咽络（教参考塘实验圈室；泼参考晃材料薪及标访准；笛计算宫机监名视小逐组等龙）在样弃品净斗化，俩色谱折分离晓和检文测中拒使用兼改进评的和占新的沈分析汗技术刊及方层法，痰如GC章/M驼S和LC幼/M捷S，就会喝产生群更灵谣敏，逗更准外确和净更可伏靠的顺结果吐。公众嘱比以垒前更狭加关圆注食筐品安纵全。欧盟菜和美庭国现篮在的田形势54灭除强威，猴异灭途威，羞甲萘竿威，久灭杀狠威，烤抗蚜秤威，播仲丁掩威，誉残杀响威，河恶虫耽威，克百秩威(呋喃往丹),速灭陪威，也乙霉森威，幅氯丙差嗪，固禾草艘丹氨基设甲酸欧酯类跳农药55丁醛肟威草肟威呋喃丹CPMC残杀威（PHC，Arprocarb）苯噁威

二甲杀威（MPMC）乙硫甲威灭定威甲萘威（NAC）XMC苯氧丁威（BPMC）甲硫威（Mercaptodimethur）异丙威（MIPC）乙肟威甲氧威（MTMC）氨基惊甲酸砍酯类态农药难结构56N-甲基氨基惑甲酸毁酯的HP乡丰LC分析王方法流程芦图1、脱植气装泉置10、反驳应试挎剂输窝液机备构2、低拴压梯懒度装权置11、混觉合装己置3、流耀动相蓝输液佛机构12、荧茶光检桌测器4、梯裂度混粘合器13、阻殖尼盘拔管5、自专动进药样器14、反皱应盘奴管6、柱捷温箱15、反凑应盘竹管7、分同析柱M1，M2：流动准相8、化莲学反牛应箱R1，R2：反应紧试剂光液9、脱批气装绸置57N-甲基娱氨基武甲酸头酯的HP杀LC分析方法N-氨基岛甲酸还甲酯昂类农盗药的吨基本苗化学律结构溜式它们纷的化名合物阶在碱练的条掩件下潜加水璃分解匪生成升甲胺缝。这黄里生被成的址甲胺旗与一筝级胺携的荧盖化衍委生化垫试剂O-苯二狱甲醛搂（OP质A）反应悦，可既进行妥较高疏灵敏祥度的伯荧光渔检测。58氨基否甲酸拴酯前叼处理购过程598成分再的N-氨基架甲酸衫甲酯拦类农廊药标虹准试御样同贿时分鸣析的隆色谱阅图19论94妈年6云月9漏日官原报上误登载累的成复分的户分析者例6016成分笛的N-氨基含甲酸做甲酯毫类农宵药标南准试搭样同薪时分圾析的屠色谱保图61甲硫撒威及铃其代缎谢物甲硫躬威代苏谢物旗高灵钱敏度汁分析净例（例灵如在迎橘子妻汁中凡不得姑含50锐pp奶b以上碗）甲硫誓威的结检测盖限（S/堪N=探3）为2pp药b62离子键色谱离子插色谱过渡病金属匆分析胆系统CN-离子进分析嗓系统63氨基泡酸分道析系气统64氨基着酸分堪析系明统NH沿2R兵C词CO票OHH65氨基坐酸衍丘生化叛方法柱后吊衍生柱前皆衍生氨基辉酸衍生会化后舅的氨东基酸试剂色谱唇柱检测