第六章免疫学检测方法

免疫学检测方法

免疫学检测方法主要包括酶联免疫吸附检测和放射免疫技术,该方面的研究取得了长足的发展。由于该方法操作简单，前处理简化，检测快速、准确、敏感，检验成本低，检测容量大，可同时进行大批量样品检测。因此．具有潜在的广泛应用价值。免疫学检测技术是近几年发展起来的新技术，主要包括放射免疫技术、免疫酶技术、免疫荧光技术和免疫电镜技术等，现已广泛地应用于各个领域中。10多年前，一些研究者开始尝试把放射免疫和免疫酶技术用于食品农药残留检测，并取得极大成功。

其中应用最多的是固相放射免疫饱和分析技术和酶联免疫吸附检测技术。在这些检测技术中其核心反应都是抗原抗体反应。所谓抗原是指一切具有抗原性的物质：抗体(又称免疫球蛋白)，是由抗原刺激机体而产生的特异性球蛋白。

作为抗原(完全抗原)需要包括两个方面的特性：免疫原性和反应原性。免疫原性是指能够刺激机体产生抗体或诱导机体形成免疫回答反应的特性。反应原性是指能够与其诱导产生的抗体或致敏淋巴细胞发生反应的特性。完全抗原是一些大分子物质(分子量大于l万)，如蛋白质等。

如果一种抗原只有反应原性而没有免疫原性则称为不完全抗原(半抗原)，它通常是一些小分子物质(分子量小于1000)，必须与其它大分子物质结合后才具有免疫原性。各种农药属于这类物质，不具有免疫原性．因此农药残留的免疫学方法检测要较医学等领域中致病微生物等完全抗原的免疫学方法检测复杂得多。

农药残留酶联免疫，首先要把农药与载体蛋白连接起来，形成农药一载体蛋白结合物免疫原，才可用来免疫动物制备抗体。因此能否合成稳定、具有良好免疫原性的农药一载体蛋白结合物是整个农药残留免疫学检测技术研究的关键。农药免疫学检测技术的原理农药免疫学检测应用最多的两种固相免疫技术是固相放射免疫技术和酶联免疫吸附检测技术。固相放射免疫技术是采用标记抗原与未知抗原竞争限定量的固相抗体结合位点，然后通过测定抗原一抗体结合物中放射性强度的改变，确定未知抗原的存在及含量。

酶联免疫（ELISA）ELISA是通过在合适的载体上，酶标限定量抗原与未知抗原竞争固相抗体结合位点或固相抗原与未知抗原竞争限定量的标记抗体结合位点，形成抗体复合物。在一定底物参与下，复合物上的酶催化底物，使其水解、氧化或还原成另一种带色物质。由于酶的降解底物与显色是成正比的，通过眼观或分光光度计测定，从而确定是否存在未知抗原或含量。

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