引种栽培与原产地珐菲亚中总皂苷的微波提取及含量测定

引种栽培与原产地珐菲亚中总皂苷的微波提取及含量测定【摘要】目的建立比色法测定珐菲亚中总皂苷的含量，为珐菲亚的质量控制提供依据。方法以齐墩果酸为对照品，用香草醛-冰醋酸，高氯酸试剂显色反应，在542nm处有最大吸收。分别考察回流法提取法、超声波萃取法及微波萃取法。选择最优提取工艺，对样品进行含量测定。结果齐墩果酸在8～mg/ml范围内呈良好的线性关系。平均回收率和RSD分别为%和%。方法学考察各项指标均符合要求。结论该法简便、准确，稳定性、重现性好。

【关键词】总皂苷微波提取比色法

Abstract:ObjectiveToestablishthecolorimetricassayforthecontentdeterminationoftotalsaponinsinPfaffiapaniculata,whichcanbeusedforthequalitycontrolofPfaffiapaniculata.MethodsWitholeanolicacidascontrolsubstance,andvanillin-glacialaceticacidandperchloricacidwereusedasanalyticalreagents,thepeakabsorptionwas542nm.Thebacksetcurrentextraction,ultrasonic-assistedextractionandmicrowaveextractionweretestedtoselecttheoptimumextractionandthequantitativeanalysisofspecimenwasmade.ResultsIntherangeof8～mg/mloleanolicacidwereindirectproportion，themeanrecoveryrate%andrelativestandarddeviationRSDwas%.Theindexeswereuptothestandardofmethodissimpleandconvenient.Ithashighaccuracyandgoodreappearance.

Keywords:Totalsaponins;Microwaveextraction;Colorimetricassay

随着人们生活质量的不断提高,延缓衰老，健康长寿已成为人们日益重视的话题。苋科植物以其极高的营养价值和药用价值近年来引起了人们的普遍关注。珐菲亚为苋科牛膝属(Amaranthaceae)植物珐菲亚Pfafftapamculata的根［1］，俗称巴西人参。主产巴西等热带雨林地区国家，中国没有分布，但我们对其引种通过生物技术组织培养方法获得了大量种苗的同时，进行了栽培并取得成功［2，3］。因其含有丰富的营养成分和珍贵的保健成分而日益成为研究热点。其具有清热解毒，强精壮阳、利尿止痛的功效，用于治疗不育症，停经或月经不调等症状，还可用于高胆固醇血症和解毒，对寒症、低血压、年老体弱者效果尤佳。珐菲亚的化学成分主要含有珐菲亚酸(pfaffiaacid)及其苷类、三萜类(nortr-perpene)及其苷类，脱皮甾醇类激素(如蜕皮甾酮ecdysterone)及苷类等［4］。化学成分分析表明，珐菲亚中疗效保健成分主要是皂苷类物质。本实验采用比色法对珐菲亚中总皂苷含量进行测定，为珐菲亚的质量控制提供科学数据。

1仪器与试剂

UV2401型分光光度计(日本岛津)；KQ250B型超声波清洗器；粉碎机。MASI型常压微波反应器(上海新仪微波化学科技有限公司)。

齐墩果酸购自中国药品生物制品检定所(批号07099803)。试剂均为分析纯。珐菲亚药材由广西药用植物园直接从产地采收，均由广西药用植物园凌征柱教授鉴定。

2方法与结果

溶液的制备

标准溶液制备精密称定齐墩果酸对照品，加甲醇配制成mg/ml的溶液，作为对照品溶液。

供试品溶液的制备精密称取干燥恒重的珐菲亚粉末(2号筛)2g，于250ml烧瓶中，加入80%乙醇50ml，按微波、超声、回流3种不同提取方法进行提取，滤过，取续滤液25ml，水浴蒸干后加水10ml溶解，用水饱和过的正丁醇萃取3次，15ml/次，合并正丁醇萃取液，再用15ml正丁醇饱和过的水洗涤，收集正丁醇液，挥去正丁醇后以甲醇溶解，置50ml容量瓶中，并用甲醇定容至刻度。

测定波长的选择

取ml的齐墩果酸对照液，于水浴蒸发至干，加入新配制的5%香草醛-冰醋酸ml，高氯酸ml，密塞，于70℃水浴显色15min后，流动水冷却至室温。加醋酸乙酯5ml，摇匀，立即在紫外分光光度计于400～800nm波长下扫描，同时空白溶液作参比，在542nm处有最大吸收，由此确定检测波长为542nm。

线性关系考察

精密吸取上述对照品溶液，，，，，ml，水浴蒸发至干，加入5%香草醛-冰醋酸(临用新配)ml，高氯酸ml，于70℃水浴显色15min后,置流动水中冷却至室温。加醋酸乙酯5ml，摇匀，随行作空白试验，在542nm处测定吸光度。计算回归方程为：A=9，r=0，在8～mg/ml范围内呈良好的线性关系。

稳定性实验

精密吸取齐墩果酸对照品溶液(mg/ml)ml于具塞试管中，按标准曲线法显色，随行试剂作空白，于542nm波长处计时测定，隔5min测定1次吸光度值，共测定30min，结果见表1。对照品溶液显色后吸光度值在5～30min内稳定，RSD=%,故比色测定于30min内完成影响不大。表1显色后不同时间吸收度

精密度实验精密吸取齐墩果酸对照液ml，按“”项下操作5次，测定吸光度。计算RSD为%。见表2。表2精密度实验结果

回收率实验

取已知含量的样品溶液6份，分别加入齐墩果酸对照品溶液适量，按标准曲线法测定，其平均回收率为%，RSD=%(n=6)。结果见表3。表3回收率实验结果

样品含量测定

精密量取样品溶液ml，按“”项下操作，进行含量测定，结果见表4～5。表4不同提取方法样品总皂苷含量测定结果表5不同产地样品总皂苷含量测定结果

3讨论

鉴于目前国内尚无法菲亚皂苷类成分的法定对照品，根据同属植物所含成分相类似的特点，选用了与珐菲亚皂苷类成分基本母核结构接近的齐墩果酸为对照品，采用比色法测定了珐菲亚总皂苷含量。由于比色法中总皂苷的提取方法及分离方式直接影响比色测定的结果，因此我们对3种不同提取方法的总皂苷含量进行了比较。

本实验首次运用微波技术辅助测定珐菲亚中总皂苷的含量。分析结果表明，采用微波提取法提取珐菲亚总皂苷，提取率最高。从超声及微波提取方法上发现，提取时间越长，提取率反而下降。至于是否与其化学成分有关有待于进一步探索。

种植1年后的珐菲亚皂苷含量比原产地野生珐菲亚的含量稍低，可能是栽培生长时间较短所致，如何改进栽培方法提高其皂苷含量有待进一步研究。

【参考文献】

［1］卞庆亚，罗崇念，马小军.国外对珐菲亚的研究进展［J］.中草药，2002，33：附1.

［2］凌征柱