生物试题（苏教版）第十单元课时练6基因工程的基本工具和基本操作程序

一、单项选择题1．目前研究混杂DNA群体中的特异DNA序列，一般基于两种不同的方法，即DNA克隆和DNA分子杂交，如图所示。下列有关叙述错误的是()A．方法①需要限制酶和DNA连接酶B．方法②需要解旋酶和DNA聚合酶C．方法③需要对探针进行特殊标记D．方法①②③都遵循碱基互补配对原则2．(2023·江苏宿迁高三质检)如图表示由不同的限制酶切割而成的DNA末端及相关的酶作用位点。下列叙述错误的是()A．甲、乙、丙都属于黏性末端B．甲、乙片段可形成重组DNA分子，但甲、丙不能C．DNA连接酶的作用位点在图乙中b处D．切割甲的限制酶不能识别由甲、乙片段形成的重组DNA分子3．(2023·江苏南通高三检测)基因工程利用某目的基因(图甲)和P1噬菌体载体(图乙)构建重组DNA。限制性内切核酸酶BglⅡ、EcoRⅠ和Sau3AⅠ的酶切位点分别如图所示。下列分析错误的是()A．构建重组DNA时，可用BglⅡ和Sau3AⅠ切割目的基因所在片段和P1噬菌体载体B．构建重组DNA时，可用EcoRⅠ和Sau3AⅠ切割目的基因所在片段和P1噬菌体载体C．图乙中的P1噬菌体载体只用EcoRⅠ切割后，含有两个游离的磷酸基团D．用EcoRⅠ切割目的基因所在片段和P1噬菌体载体，再用DNA连接酶连接，只能产生一种重组DNA4．(2023·江苏泰州高三调研)引物的设计是影响PCR扩增反应的效率和特异性的关键因素，下列相关叙述正确的是()A．引物的碱基数量越少则退火温度越低、目标DNA获得率越高B．根据需要可在引物的5′端添加限制酶识别序列、点突变序列等C．两种引物的退火温度差异较大，可减少引物与模板的非特异性结合D．引物的GC含量越高，结合特异性越强，越利于目标DNA的扩增5．利用PCR技术扩增目的基因，其原理与细胞内DNA复制类似(如下图所示)。图中引物为单链DNA片段，它是子链合成延伸的基础。下列叙述错误的是()A．用PCR方法扩增目的基因时不必知道基因的全部序列B．设计引物时需要避免引物之间形成碱基互补配对而造成引物自连C．退火温度过高可能导致PCR反应得不到任何扩增产物D．第四轮循环产物中同时含有引物A和引物B的DNA片段所占的比例为15/166．在基因工程操作中，科研人员利用识别两种不同序列的限制酶(R1和R2)处理基因载体，进行聚丙烯酰胺凝胶电泳检测，结果如图所示。以下相关叙述中，不正确的是()A．该载体最可能为环形DNA分子B．两种限制酶在载体上各有一个酶切位点C．限制酶R1与R2的切割位点最短相距200bpD．限制酶作用于该载体会导致氢键和肽键断裂7．(2023·江苏常州高三模拟)如图是快速RT－PCR过程示意图，①和②为逆转录酶催化的逆转录过程，③是PCR过程。据图分析，下列叙述错误的是()A．逆转录酶具有DNA聚合酶的能力B．③PCR过程只需要引物bC．RT－PCR可检测基因表达水平D．RT－PCR可检测新冠病毒等RNA病毒二、多项选择题8．ROP蛋白可以参与调节根毛和花粉管的生长。科研人员采用含有GFP(绿色荧光蛋白)基因的载体构建了ROPGFP的质粒，并利用农杆菌转化法将其转入植物体内。下列有关叙述正确的是()A．外源基因在植物体中是否表达可通过绿色荧光来检测B．GFP基因在植物体中表达说明生物体共用一套密码子表C．ROPGFP质粒的构建需用到限制酶、DNA聚合酶和载体等工具D．利用农杆菌转化法可以侵染大多数单子叶植物9．(2023·江苏淮安高三模拟)如图表示pBR322质粒和人生长激素基因所在片段的结构信息，将二者构建的重组质粒导入受体菌并进行筛选。下列叙述错误的是()注：AmpR：氨苄青霉素抗性基因；TetR：四环素抗性基因。A．应选择的限制酶组合是酶F和酶GB．所选用的受体菌含有AmpR和TetR基因C．用含氨苄青霉素的培养基筛选出的是含重组质粒的受体菌D．同时用三种限制酶处理图中质粒，电泳后可得到4个条带10．某中学生物兴趣小组进行DNA的粗提取与鉴定时，选取如下实验材料：新鲜花椰菜、体积分数为95%的冷酒精、研磨液(含表面活性剂SDS、DNA酶抑制剂EDTA、适量的NaCl)、mol·L－1的NaCl溶液、二苯胺试剂、蒸馏水以及其他必要实验器材。下列有关选择实验材料的理由，叙述正确的是()A．新鲜的花椰菜DNA含量丰富，易获取B．SDS具有瓦解植物细胞质膜的作用C．DNA溶于冷酒精，而蛋白质等杂质不溶D．EDTA可减少提取过程DNA的降解三、非选择题11．(2021·江苏，23)某小组为研究真菌基因m的功能，构建了融合表达蛋白M和tag标签的质粒，请结合实验流程回答下列问题：(1)目的基因的扩增①提取真菌细胞__________________，经逆转录获得cDNA，进一步获得基因m片段。②为了获得融合tag标签的蛋白M，设计引物P2时，不能包含基因m终止密码子的编码序列，否则将导致__________________。③热启动PCR可提高扩增效率，方法之一是：先将除Taq酶以外的各成分混合后，加热到80℃以上再混入酶，然后直接从94℃开始PCR扩增。下列叙述正确的有_________。A．Taq酶最适催化温度范围为50～60℃B．与常规PCR相比，热启动PCR可减少反应起始时引物错配形成的产物C．两条子链的合成一定都是从5′端向3′端延伸D．PCR产物DNA碱基序列的特异性体现了Taq酶的特异性(2)重组质粒的构建①将SmaⅠ切开的载体A与添加同源序列的m混合，用特定DNA酶处理形成黏性末端，然后降温以促进____________________，形成A－m结合体。将A－m结合体导入大肠杆菌，利用大肠杆菌中的DNA聚合酶及________酶等，完成质粒的环化。②若正确构建的重组质粒A－m仍能被SmaⅠ切开，则SmaⅠ的酶切位点可能在________________________________________________________________________________________________________________________________________________。(3)融合蛋白的表达①用含有尿嘧啶的培养基培养URA3基因缺失型酵母，将其作为受体菌，导入质粒A－m，然后涂布于无尿嘧啶的培养基上，筛选获得目的菌株，其机理是________________________________________________________________________________________。②若通过抗原－抗体杂交实验检测到酵母蛋白中含tag标签，说明______________________，后续实验可借助tag标签进行蛋白M的分离纯化。12．下图是利用工程菌(大肠杆菌)生产人生长激素的实验流程。所用的pBR322质粒含有限制酶PstⅠ、EcoRⅠ和HindⅢ的切点各一个，且三种酶切割形成的末端各不相同，而AmpR表示氨苄青霉素抗性基因，TetR表示四环素抗性基因。请回答以下相关问题：(1)目的基因主要是指编码蛋白质的基因，也可以是一些具有________的因子。过程①所用到的组织细胞是________________，③过程的目的是________________________，⑤过程常用________处理大肠杆菌。(2)如果用限制酶PstⅠ、EcoRⅠ和HindⅢ对图中质粒进行切割，形成的DNA片段种类有________种，这些种类的DNA片段中含有完整氨苄青霉素抗性基因的DNA片段和四环素抗性基因的DNA片段分别有______种和____________种。(3)如果只用限制酶PstⅠ切割目的基因和质粒，完成过程④、⑤后(受体大肠杆菌不含AmpR、TetR)，将三角瓶内的大肠杆菌先接种到甲培养基上，形成菌落后用无菌牙签挑取甲培养基上的单个菌落，分别接种到乙和丙两个培养基的相同位置上，一段时间后，菌落的生长状况如图乙、丙所示。接种到甲培养基上的目的是筛选____________________的大肠