.高效液相色谱仪及固定相流动相

仪器分析课程讲义第四节高效液相色谱仪目录高效液相色谱仪高效液相色谱的固定相和流动相输液系统进样系统分离系统检测系统数据处理系统6.2高效液相色谱仪

一、输液系统

1．贮液器贮液罐的材料应耐腐蚀，对溶剂呈惰性，容积约为0．5—2．0L；贮液罐放置要高于泵体；使用过程贮液罐应密闭；溶剂在放入贮液罐之前必须经过0．45um滤膜过滤。2．脱气装置

作用：脱去流动相中的溶解气体。(1)吹氮脱气法(2)加热回流法(3)抽真空脱气法(4)超声波脱气法(5)在线真空脱气法(on—1inedegasser)3、高压输液泵输送流动相压力：150～350×105

Pa

作用：将流动相以稳定的流速或压力输送到色谱系统。输液泵的稳定性直接关系到分析结果的重复性和准确性。高压泵按其性质可分为恒压泵、恒流泵两类1）往复式柱塞泵：恒流泵；易于更换溶剂，适用于梯度洗脱但有脉冲波动，可以加一阻尼器抑制脉冲。2）气动放大泵：

恒压泵液缸体积大，更换流动相不方便，不便于梯度洗脱，无脉冲、稳定流量的输出,现多用于装柱。高压定量进样阀：（六通阀进样装置）优点：进样准确，重现性好，适于定量分析c.自动进样器：计算机控制，适合大量进样。二、进样装置停留进样装置：

缺点：不能承受高压，须停流进样；无法取得精确的保留时间三、海高效卡分离炮柱色谱讽柱是导实现河分离名的核桶心部蚊件。发展报趋势等是减详小填恢料粒度度和必柱径炮以提弹高柱诸效。常规兼液相便色谱甜柱陪1～禾6mm轰，1洋0～50易c撕m。微孔怒填充财柱0.工5-讯1mm毛细禁管柱30称-5陈0µ修m装柱赠方法葬：有中干法睛和湿蕉法，珠按粒为度2鸟0μm划分晌。柱温筹控制下列出几种逝情况相需要冤控制唇柱温轿：法定移标准嫁分析扭方法柿中，亦要求玻保留为时间赤具有务再现剃性；必须卫通过鸟改变般柱温惨来提其高分庙离效袍率；对高拾分子朱化合傅物或面黏度链大的甜样品献；对一险些具妹有生垦物活灵性的孤生物持分子泻；对一圾些组冤成复桐杂的城样品啊，使沃用二净维色辈谱技伶术。四、缎液相亲色谱秤检测并器1.紫外碧检测荐器:应用肆最广尚，对狠大部说分有角机化烘合物任有响烘应。作用牺原理伪：被分吊析试荣样组役分对瞧特定穷波长写紫外捧光的码选择都性吸举收，堤组分拢浓度武与吸掀光度幻玉的关枣系遵拘守比摸尔定币律。特点老：灵敏增度高嫩，可渠达10-9g.把mL-1；线性核范围雾高；可用悉梯度使洗脱务；对流印动相愤的流火速和打温度默变化拦不敏病感；不适景用于支对紫两外不王吸收立的试范样；紫外谊光不扣透过霉的溶低剂不驴能用收（苯悄等）飘。2.光电趁二极案管阵搅列检裤测器紫外木可见言光度扎检测模器的陡重要即进展真；后10划21上个二轨极管摘阵列弱，各存检测铲某一拿特定伍波长减，无大需停炮流扫僚描而芝观察匠色谱歪柱流祖出物婆的各辰个瞬某间的且动态协光谱予吸收芽图光电求二极坦管阵盛列检狼测器3.差示杜折光较检测顶器（di骑ff嫌er呀en展ti杂al就r黎ef罗ra场ct麦iv冻e着in惯de槽x将de桥te须ct闪or板）除紫踩外检笼测器挣之外册应用眼最多透的检觉测器管；可连搞续检蒙测参决比池姑和样词品池总中溶而液的吼折光清指数物差值芬。差别值与宇浓度芳呈正右比；特点分：通用献型检辛测器;灵敏歪度低舅（1武0-7g.箩mL-1），不痕能用或于痕飞量分挂析;对温组度敏游感，引要求梨使用倒温度描恒定;对流蛋动相塑流量村变化坡敏感宰，不渐能用捕于梯欧度洗叠脱。许多白有机砌化合拢物，泊特别停是芳佳香族管化合裳物、受紫逆外光裕激发冈后能捏够辐书射出般荧光勉。4.荧光寸检测卵器（fl颗uo澡re租sc优en殃ce筑d基et回ec蛋to跑r）高灵羽敏度击(比僚紫外纤检测刘器高苗两个村数量蕉级，砖达1筝0-1凭1g.考ml-1)高选烟择性;线性联范围密窄；测量折中不织能使碑用抑匆制、窃吸收削荧光损的溶部剂；对不林产生肤荧光辨的物参质，接可使就其转薄变成费荧光袄物质各；广泛爱应用知于生花物化叠工、糟制药抚、食叹品和殊环境坝监测录中.5.电导演检测社器（el叠ec如tr芝ic铃al喷c机on摘du积ct江iv字it斧y拥de凑te辆ct他or多）属电化远学检殊测器，是徒离子惩色谱悲法中堆应用请最为途广泛炼的检裙测器作用赚原理：根窄据物士质在骗某些咳介质巩中电屯离后侮所产补生的傲电导歪变化牧来测吗定电雅离物机质的吗含量垂。五、液相耀色谱沈法固惹定相固定婶相的热形状（1富）全翅多孔键型最初杆由氧滤化硅峡、氧膨化铝开、硅原藻土欣等制菌成的弯多孔认球体炉10锹0μm的大储颗粒耐，表塑面涂秆渍固询定液伶。传银质速私度慢立，柱犹效低途。现采爪用1盗0μm以下架的小劈燕颗粒吼。（2档）表乖面多须孔型布(薄租壳型捉微珠肺)30这～4搬0μm的玻渡璃微丘球，退表面服附着源一层斜厚度柏为1告～来2μm的多廉孔硅土胶。表面戒积小码，传船质速扑度快蜘，但肾柱容艺量低敲；2.拿液-港固吸喂附固嫁定相极性槐：硅查胶、泳氧化镇镁、倒分子骑筛教等；非极港型：柏高聚闪物微丧球、什石墨厉化碳秆黑、贞聚合咬物包时裹固舍定相觉。结构排类型热：全俊多孔迹型和承薄壳瓶型；粒度量：5妻～1性0μm；3.液-贸液色航谱固钱定相惰性徐载体：硅胶郊，无跟机氧鼓化物们、高泼分子抚聚合肆物、夕脲醛稠树脂钳等，版多为3—好10崭um的全穴多孔倾微球。固定您液：正消相：尾氰腹基柱背、胺纳基柱范等反相:烷基谜柱、枯苯基胁柱。4.化学庙键合盆固定悠相化学嫩键合风固定疗相:目前句应用粉最广维、性皇能最禾佳的呜固定鹿相，厦一般索用硅陕胶作颠为基暑体。a.硅氧萝碳键圾型：丢≡Si—O—Cb.硅氧笨硅碳哄键型辈：≡Si—O—Si—Cc.硅碳来键型衔：初≡Si—Cd.硅氮仿键型羡：夹≡Si—N化学饭键合雅固定衫相的姥特点（1蚊）传炼质快，表巴面无落深凹缠陷;（2啊）寿命叶长，下无固同定液脾流失德，耐录流动毅相冲止击；（3搂）选惧择性月好，可唤键合爬不同雅官能谈团浩；（4疮）有拒利于葛梯度感洗脱凤；六、液相想色谱胸法流腥动相流动忍相特被性（1矿）流职动相月的种滴类、蹲配比虚可显烈著改密变组域分分纳离状秋况；（2颤）亲谅水性竭固定孕液常破采用升疏水丽性流款动相绿，麦称为兔正相舱液液咐色谱股法;（3敏）流叉动相崇的极漏性大悄于固印定液艇的极点性，侨则称厚为反嘉相液造液色跳谱粉。组分珍在两美种类增型分臭离柱斗上的救出峰魂顺序瞎相反际。2.卖流谣动相束类别按流夺动相携组成划分：单组辱分和味多组兽分；按极夜性分：极性完、弱城极性妈、非齐极性彩；按使债用方凳式分：固定奋组成椅淋洗非和梯潜度淋抱洗常用籍溶剂士的极机性顺凉序：水、泽酰胺易、腈抓、醇无、酮要、酯焦、醚赠、烃凡类,et感c.流动炊相可该分为衰：底剂及洗脱解剂底剂栏：决定肚基本困的色挨谱分惕离情器况；洗脱致剂：调节禽试样请组分备的滞施留并浙对几赞个组袋分具白有选悔择性灵的分罗离作震用。3.流动骨相的铃选择采用帽二元精或多蹲元组束合溶资剂作社为流哭动相本可以决灵活打调节们流动钱相的睡极性尽或增罪加选顽择性锹，以拖改进鉴分离鸣或调斗整出填峰时陡间。正相鞋液-朋液分瘦配分糟离（完液固悠色谱凑极性槽固定到相）：底剂盆：低电极性肯的溶优剂，柿如正鼓己烷去、苯年、氯柄仿等炮，洗脱源剂：哭根据村试样遇的性衰质选棵取中稠等极扁性溶次剂如移醚、芬酮、廉醇等登。反相稳色谱彩（液遵固色班谱非庸极性记固定件相）：底剂郑：肾水。洗脱钳剂：歇有且机溶兴剂作想为极撑性调倘节剂。4梯度齿洗脱梯度言洗脱，与挤气相明色谱步中的程序讲升温一样礼，可纸极大道地改盈善分缘瑞离效租果在分般离过术程中独按照钻一定辜的程璃序连狂续改糟变载蔽液中仔溶剂鸭的配意比和宿极性裹，通捡过载饿液中傻极性须的变爹化来荒改变扩被分身离组郊分的践分离骄因素喝。通过早梯度俱洗脱势，可叉缩短圣分离外时间鹅、提荒高分杯辨能驴力、滴改善奏峰形锹，还俯可提惧高分用析精沙度。溶剂相的组训成在各15mi申n内，孤从1茅0％款（V/植V）症CH3CN浅-H2O随时锄间改无变至阵50尽％CH3CN酒-H2O梯度缘瑞淋洗蛛装置外梯化度:两台代高压呀泵，域将两捏种不放同极挤性的侦溶剂只按一之定的闹比例皇送入忌梯度雀混合竭室，票混合能后进愈入色劳谱柱壁。内梯互度:一台忍高压己泵,捧通腹过比涛例调症节阀榨,将妖两种兰或多部种不辱同极次性的右溶剂宜按一史定的株比例肝抽入淘高压逝泵中买混合扯。讨论烘1用OD糠S柱分穷析一歪有机犹弱酸笑混合置物样奏品，屿以某涝一比絮例甲鼓醇-水为偿流动旋相时顺，样滴品容浮量因丹子较耗小，痕若想净使容斩量因境子增狭加，驶较好商的办玻法是A增加洪流动殃相中猫甲醇础的比铲例B增加哨流动抄相中眯水的按比例C流动千相中求加入构少量HA居cD流动丹相中滑加入以少量闪的氨朱水讨论院2在反磁相色战谱法妹中，棒若以伪甲醇-水为尿流动秀相，吗增加番甲醇巩的比说例时虽，组至分的崇容量伍因子k与保深留时酸间tR如何槐变化羽？作业1.在OD纽奉S柱上斗，以都甲醇填为流闹动相细，某休组分乌的分脚配容搁量k=算1.怕2,如以践乙腈疤为流叮动相霉，其k值是勺增加闯还是魂减少收，为储什么子？2.在硅镰胶柱元上，由用甲牵苯为晚流动福相，症某组哭分的聋保留巧时间爹是30肥mi炸n，如笨果改租用四齿氯化兵碳或专乙醚坛为流纺动相也，试结分析塑该组龄分的害保留渡时间乡丰如何借变化头？3.在液陡相色狭谱法坑中，输梯度屈淋洗笔适用水于分政离何个种试倘样？人干锡扰素恳-γ等电青点8示.5底剂屈：50mm龙ol埋/L磷酸援盐缓遗冲液信，pH尽8.驳0洗脱动剂：50mm摇ol塌/L磷酸迎盐缓绸冲液组，pH舌8.欧5，侦1m档ol悟/L的N责aC商l2