荧光分光光度计使用

荧光分光光度计使用工作原理荧光产生的原理荧光的定义：某些物质受紫外光或可见光照耀激发后能放射出比激发光波长较长的光。荧光产生的原理：化学物质能从外界吸取并储存能量如光能、化学能等而进入激发态，当磁辐射的形式放射即发光。荧光化合物的两种特征光谱荧光激发光谱，就是通过测量荧光体的发波长激发光引起荧光的相对效率。荧光放射光谱，如使激发光的波长和强度保持不变，而让荧光物质所产生的荧光通过放射的谱图称为荧光光谱。物质的激发光谱和荧光放射光谱，可以用作该物质的定性分析。当激发光强度、波长、所用关系，可以用作定量分析。荧光分析法的灵敏度一般较紫外分光光度法或比色法为高，浓度太大的溶液会有“自熄灭”作用，以及由于在液面四周溶液会吸取激发光，正比，故荧光分析法应在低浓度溶液中进展。荧光放射的特点：可产生荧光的分子或原子在承受能量后即刻引起发光而一旦停顿供能，发光荧光现象也随之在瞬间内消逝。溶液荧光光谱通常具有的特征：斯托克斯位移：在溶液荧光光谱中，所观看到的荧光的波长总是大于激发光的波长。荧光放射光谱的外形与激发波长无关。荧光放射光谱的形成与吸取光谱的外形有镜像关系荧光的猝灭：荧光分子的辐射力量在受到激发光较长时间的照耀后会减弱甚至猝灭，这是用的荧光。因此荧光物质的保存应留意避开光特别是紫外光的直接照耀和与其他化合物的接触。荧光效率：荧光分子不会将全部吸取的光能都转变成荧光，总或多或少地以其他形式释放。荧光效率是指荧光分子将吸取的光能转变成荧光的百分率，与放射荧光光量子的数值成正比。荧光效率=放射荧光的光量分子数荧光强度吸取光的光量子数激发光强度)放射荧光的光量子数亦即荧光强度，除受激荧光分子有其特定的吸取光谱和放射光谱荧光光谱光波峰时，得到的荧光强度也最大。测量原理稀溶液IF=2.303φFI0εcb,其中，I0为激发光强度为荧光强度;φf为荧光效率b为液池厚度;ε和c分别为发光物质的摩尔吸光系数和摩尔浓度。技术指标：波长扫描范围：220-900nm波长精度：1.5nm;狭缝范围：0.15-20nm信噪比：S/N150以上水拉曼峰测定，狭5nm)最高扫描速度：5，500nm/min操作规程开机确认所测试样液体或固体，选择相应的附件。先开启仪器主机电源，预热半小时后启动RF-530XPC，仪器自检通过后，即可正常使用。测样spectrum模式在“AcquireMode”中选择“Spectrum”模式。对于做荧光光谱的样品，“Configure”中“Parameters”的参数设置如下：Type”Emission;给定EX波长EM的扫描范围最大范围设定扫描速度扫描间隔狭缝宽度，点击“OK”完成参数的设定。对于做激发光谱的样品，“Configure”中“Parameters”的参数设置如下：EM波长EX的扫描范围最大范围设定扫描速度扫描间隔狭缝宽度，点击“OK”，完成参数的设定。在样品池中放入待测的溶液，点击“Start”，即可开头扫描。扫描完毕后，系统提示保存文件。可在“Presentation”中选择“Graf”“Radar”“BothAxesCtrl+R”来调整显示结果范围在“Manipulate”中选择“PeakPick”来标出峰位，最终在“Channel”中进展通道设定。述操作步骤对固体样品同样适用。Quantitativ模式在“AcquireMode”中选择“Quantitative”模式。中“Parameters”的参数设置如下：Method选择“MultiPointWorkingCurve;“OrderofCurve”中选择“1st和“No”;EX、EM波长设定狭缝宽度，点击“OK”，完成参数的设定。在样品池中放入装有空白溶液的比色皿后执行“AutoZero”命令校零点。点击“Standard”模式，制作工作曲线。将样品池中的空白溶液换成一系列的浓度的样品标准溶液进展测量，执行“Read”命生成一条“荧光强度浓度”曲线。在“Presentation”中选择“Display“Save”为扩展名为“.std”的文件。工作曲线制备完毕，即可进入未知样的测量，选择进入“Unknown”模式，将样品池中的浓度标准溶液换成待测样品溶液，执行“Read”命令，即可得到相应的荧光强度和相应“Save”为扩展名为“.qnt”的文件。TimeCourse模式在“AcquireMode”中选择“TimeCourse”模式。中“Parameters”的参数设置如下：EXEM波长设定狭缝宽度设定反响时间读取速度读取点数;点击“OK”，完成参数的设定。在样品池中放入装有空白溶液的比色皿后执行“AutoZero”命令校零点。将样品池中的空白溶液换成待测溶液，点击“Start”，即可开头扫描。扫描完毕后，即可得到荧光强度对时间的工作曲线。将此工作曲线“Save”为扩展名为“.TMC”的文件。关机留意事项请留意疼惜液体比色皿，特别是测试有机污染，影响透光度。固体样品池仅剩一个，测试完毕请物归原处。测试完毕请留意登记，关闭仪器。分子吸取、荧光、磷光辐射跃迁无辐射跃迁——去活化过程处于激发态分子不稳定，通过辐射或非辐射振动弛豫在液相或压力足够高的气相中，处于激发态的分子因碰撞将能量以热的形式传递给四周的程，称为振动弛豫。内转换对于具有一样多重度的分子，假设较高电子能级的低振动能层与较低电子能级的高振动能层S2-S1;T2-T1。定性分析任何荧光都具有两种特征光谱：激发光谱与放射光谱。它们是荧光定性分析的根底。激发光谱转变激发波长，测量在最强荧光放射波特长激发光谱。激发光谱外形与吸取光谱外形完全相像，经校正后二者完全一样这是由于分子吸取光能的过程就是分子的激发过程。激发光谱可用于鉴别荧光物质在定量时，