检验诊断试剂(免疫)

固相酶免疫测定ELISA(酶联免疫吸附试验)本文档共54页；当前第1页；编辑于星期二\16点35分酶标志物、抗原、抗体、酶免疫复合物本文档共54页；当前第2页；编辑于星期二\16点35分酶标志物——酶标记抗体或抗原酶免疫技术的核心组成部分

酶结合物（conjugate）酶标记物通过化学反应或免疫学反应，让酶与抗体或抗原形成的结合物

本文档共54页；当前第3页；编辑于星期二\16点35分酶标记抗体或抗原制备方法过碘酸钠法（直接法）常用于HRP标记抗体或抗原

戊二醛交联法本文档共54页；当前第4页；编辑于星期二\16点35分1.辣根过氧化物酶（HRP）

糖蛋白（主酶）亚铁血红素（辅基）主酶与酶活性无关辅基是酶的活性中心(ELISA中应用最为广泛的标记用酶)ELISA常用酶2.碱性磷酸酶（AP）

本文档共54页；当前第5页；编辑于星期二\16点35分辣根过氧化物酶HRP上的糖羟基可以被高碘酸钠（NaPIO4）激活生成醛基，这些醛基能通过Schiff碱与蛋白中的氨基偶联，紧接着还原Schiff碱形成稳定的偶联产物。这种HRP偶联标记方法已经被广泛认可，但是也存在一定的缺陷，特别是去除过量高碘酸钠（NaPIO4）的过程较为繁琐。需要注意的是，被高碘酸钠（NaPIO4）激活的HRP很不稳定，其酶活力会在几天内丢失本文档共54页；当前第6页；编辑于星期二\16点35分本文档共54页；当前第7页；编辑于星期二\16点35分本文档共54页；当前第8页；编辑于星期二\16点35分评价本文档共54页；当前第9页；编辑于星期二\16点35分本文档共54页；当前第10页；编辑于星期二\16点35分本文档共54页；当前第11页；编辑于星期二\16点35分本文档共54页；当前第12页；编辑于星期二\16点35分本文档共54页；当前第13页；编辑于星期二\16点35分本文档共54页；当前第14页；编辑于星期二\16点35分均相酶免疫测定

homogenousenzymeimmunoassay

用于小分子激素和半抗原（如药物）的测定

酶标记物与相应的抗原或抗体结合后，标记酶的活性会发生改变，不用分离结合和游离酶标记物，通过测定标记酶的活性的改变，而确定抗原或抗体的含量。原理本文档共54页；当前第15页；编辑于星期二\16点35分均相酶免疫测定最具代表性的两种技术酶放大免疫测定技术EMITenzyme-mutipliedimmunoassaytechnique

克隆酶供体免疫分析

CEDIAclonedenzymedonorimmunoassay

本文档共54页；当前第16页；编辑于星期二\16点35分本文档共54页；当前第17页；编辑于星期二\16点35分本文档共54页；当前第18页；编辑于星期二\16点35分

利用重组DNA技术制备β-半乳糖苷酶的两个片段：大片段称为酶受体（enzymeacceptor,EA），小片段称为酶供体（enzymedonor,ED），两个片段本身均不具酶活性，但结合在一起就具有酶活性，利用这一特性建立的均相酶免疫测定称为克隆酶供体免疫测定(CEDIA)。CEDIA的反应模式为竞争法。克隆酶供体免疫测定

（clonedenzymedonorimmunoassay,CEDIA）本文档共54页；当前第19页；编辑于星期二\16点35分一、基本原理：标本中的抗原和ED标记的抗原与特异性抗体竞争结合，形成两种抗原抗体复合物。ED标记的抗原与抗体结合后由于空间位阻，不能再与EA结合。反应平衡后，剩余的ED标记抗原与EA结合，形成具有活性的酶，加入底物测定酶活力，酶活力的大小与标本中抗原含量呈正比。本文档共54页；当前第20页；编辑于星期二\16点35分本文档共54页；当前第21页；编辑于星期二\16点35分本文档共54页；当前第22页；编辑于星期二\16点35分本文档共54页；当前第23页；编辑于星期二\16点35分：健康人O型血或绵羊静脉血，应2w内固化本文档共54页；当前第24页；编辑于星期二\16点35分本文档共54页；当前第25页；编辑于星期二\16点35分本文档共54页；当前第26页；编辑于星期二\16点35分本文档共54页；当前第27页；编辑于星期二\16点35分本文档共54页；当前第28页；编辑于星期二\16点35分本文档共54页；当前第29页；编辑于星期二\16点35分本文档共54页；当前第30页；编辑于星期二\16点35分本文档共54页；当前第31页；编辑于星期二\16点35分本文档共54页；当前第32页；编辑于星期二\16点35分本文档共54页；当前第33页；编辑于星期二\16点35分本文档共54页；当前第34页；编辑于星期二\16点35分本文档共54页；当前第35页；编辑于星期二\16点35分本文档共54页；当前第36页；编辑于星期二\16点35分本文档共54页；当前第37页；编辑于星期二\16点35分本文档共54页；当前第38页；编辑于星期二\16点35分本文档共54页；当前第39页；编辑于星期二\16点35分本文档共54页；当前第40页；编辑于星期二\16点35分本文档共54页；当前第41页；编辑于星期二\16点35分本文档共54页；当前第42页；编辑于星期二\16点35分本文档共54页；当前第43页；编辑于星期二\16点35分本文档共54页；当前第44页；编辑于星期二\16点35分本文档共54页；当前第45页；编辑于星期二\16点35分本文档共54页；当前第46页；编辑于星期二\16点35分本文档共54页；当前第47页；编辑于星期二\16点35分本文档共54页；当前第48页；编辑于星期二\16点35分本文档共54页；当前第49页；编辑于星期二\16点35分本文档共54页；当前第50页；编辑于星期二\16点35分1.概述：以硝酸纤维素膜为载体，利用微孔滤膜的可滤过性，使抗原抗体反应和洗涤在一特殊的渗滤装置上以液体渗滤过膜的方式迅速完成。（斑点免疫渗滤试验最初是从斑点ELISA基础上发展起来建立的，应用的结合物是酶标记的，称为斑点酶免疫渗滤试验。90年代初发展了以胶体金为标记物的斑点免疫渗滤试验（DIGFA），又名滴金免疫测定法（简称滴金法）。在滴金法中不需酶对底物的反应，更加简便、快速，在临床检验中应用日渐广泛。）斑点免疫渗滤试验2.原理：以双抗体夹心法为例。在硝酸纤维素膜的膜片中央滴加纯化的抗体，为膜所吸附。当滴加在膜上的标本液体渗滤过膜时，标本中含抗原被膜上抗体捕获，其余无关蛋白等没滤出膜片。其后加入的胶体金标记也在渗滤中与已结合在膜上的抗原相结合。因胶体金本身呈红色，阳性反应即在膜中央显示红色斑点。3.试剂和操作渗滤装置是滴金法测定中的主要试剂成分之一，由塑料小盒、吸水垫料和点加了抗原或抗体的硝酸纤维素膜片三部分组成塑料小盒可以是多种形状的，盒盖的中央有一直径约0.4～0.8cm的小圆孔，盒内垫放吸水垫料，硝酸纤维素膜片安放在正对盒盖的中央有一直径约0.40.8cm的小圆孔，盒的垫放吸水塑料，硝酸纤维素膜片安放在正对盒的圆孔下，紧密关闭盒盖，使硝酸纤维素膜片贴紧吸水垫料。如此即制备成一渗滤装置（图19-1）。塑料小盒的形状最多见的是扁平的长方形小板，加之滴金法的整个反应过程都是在渗滤装置上进行的，因此又常称渗滤装置为滴金法反应板。本文档共54页；当前第51页；编辑于星期二\16点35分

图19-1DIGFA渗滤装置及操作示意图A：操作示意图B:装置分解图斑点免疫渗滤试验本文档共54页；当前第52页；编辑于星期二\16点35分斑点免疫层析试验1.原理：斑点免疫层析试验（DICA）简称免疫层析试验（ICA），也以硝酸纤维素膜为载体，但利用了微孔膜的毛细血管作用，滴加在膜条一端的液体慢慢向另一端渗移，犹如层析一般2.试剂和操作免疫层析试验以单克隆双抗体夹心法为例。试验所用试剂全部为干试剂，多个试剂被组合在一个约6mm×70mm的塑料板条上，成为一单一试剂条（图19-2），试剂条上端（A）和下端（B）分别粘贴吸水材料，免疫金复合物干片粘贴在近下端（C）处，紧贴其上为硝酸纤维素膜条。硝酸纤维素膜条