超高压液相色谱

超高压液相色谱第一页，共十三页，编辑于2023年，星期五第二页，共十三页，编辑于2023年，星期五基本内容概述

原理特点

应用

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不足第三页，共十三页，编辑于2023年，星期五超高压液相色谱（UPLC）

超高压液相色谱（UPLC）是指一种采用小粒径填料色谱柱(<2μm)和超高压系统(>100MPa)的新型液相色谱技术，可显著改善色谱的分离度和检测灵敏度，同时大大缩短分析周期，特别适用于微量复杂混合物的分离和高通量研究。

组成：进样系统、输液系统、分离系统、检测系统、数据处理系统第四页，共十三页，编辑于2023年，星期五第五页，共十三页，编辑于2023年，星期五原理UPLC保持了传统HPLC的基本原理，但其分离效能和分析速度却得到了全面提升，这归功于其独特的小颗粒色谱填料技术。在HPLC的速率理论中，VanDeemter方程可简化为：

H=A+B／v+Cv(1)其中：

H—理论塔板高度v—流动相的平均线速第六页，共十三页，编辑于2023年，星期五A、B、C均为常数，其中：A—涡流扩散项系数B—分子扩散项系数C—传质阻力项系数各项均与固定相粒度(dp)相关如仅考虑dp对H的影响，(1)式可表示为：H=a(dp)+b／v+c(dp)2v(2)第七页，共十三页，编辑于2023年，星期五由（2）H=a(dp)+b／v+c(dp)2v可知：在相同线速度下，填料粒径（dp）越小，理论塔板高度越小，柱效越高。

小颗粒填料的另一个重要特征是：当增加流量(线速度)时塔板高度没有明显的增大，且维持在一定范围内，即在较大流量范围内保持较高的柱效。因此，可以通过增加流量来加快分离速度，同时维持较高的柱效和良好的分离效果。第八页，共十三页，编辑于2023年，星期五特点与其他液相色谱相比较，UPLC具有以下几个特点：1、填料粒径小，压力大UPLCHPLC粒径<2um5~10um压力>100MPa30~60MPa2、检测灵敏度高，重现性好。如采用UPLC／MS／MS分析大鼠血浆中的混合药物时灵敏度提高了５～１０倍。第九页，共十三页，编辑于2023年，星期五3、快速、高效、高分辨的色谱模式4、进样系统一般常采用静态切割、压力平衡（采用一强一弱的双溶剂进样）和自动进样三种方式；5、输液系统具有耐压性能、各部分之间要有良好的密封；6、检测系统使用高频检测器（短时间内出现的许多色谱峰需要更快的数据采集速率相适应；需要降低样品在检测池内的驻留时间）。第十页，共十三页，编辑于2023年，星期五应用超高压液相色谱（UPLC）是一种新型的色谱分析技术，可以单独使用，也可以和其他色谱如质谱联用（UPLC／MS）。主要应用有：中药复杂成分的分析，环境监测，农药残留物的检测及蛋谢组学等领域，且具有很好的推广价值。第十一页，共十三页，编辑于2023年，星期五一、压力高，溶剂的粘度会上升，流量降低（可根据设定的流量与实际流量进行流量补偿）二、流动相以较高速度流过固定相时，因摩擦可产生热量，加之流动相和固定相的导热性能较差，可导致温度梯度的出现，造成峰展宽和柱效的下降（流动相预冷）。三、在超高压下运行的色谱柱可能发生液体喷射和管壁迸裂。（不常发生）