PCR上岗证考试题及答案

理论考试卷一，填空（每题2分，共20分）DNA双螺旋中两条链走向是反向平行的，即一股链是5，一3,走向，另一股链为3,一5,走向；生物合成方向是5'一3'。在极端的PH值或受热条件下，核酸分子中的氢键断裂，双螺旋结构解开，即为核酸变性。核酸分子的杂交其实就是DNA变性、复性原理的应用。PCR扩増的三个基本阶段是变性、退火、延伸，引物与模板的结合发生在退火阶段反转录酶催化的DNA合成反应按5，一3,方向进行，在DNA合成时也需要引物，引物为病毒颗粒中的mRNA。PCR测定中的“假阳性”的最主要的来源是PCR产物的污染。请填出以下各种微量移液器可取溶液的体积范围P10P202-20ulP10020-lOOulP20050-200ul如需吸取100ul液体，则最好使用P100加样器。在基因扩增检验中，使用的带滤塞吸头吸加液体，只要是为了防止标本间交叉污染。TapMan荧光PCR测定原理中的关键点在于利用了Tap酶的的外切酶活性，Ct值指的是每个反应管内的荧光信号到达设定阈值时所经历的循环数。个体化医学的全面定义：分为疾病风险预测（基因检测）和个体化治疗（基因检测）两个方面，基因预测疾病风险是指根据每个人的疾病基因组信息预测疾病的发生风险。个体化治疗是指根据每个人的疾病基因组信息对己发生的疾病进行治疗。二，是非题（正确的后面打V,错误的后而打x,并将错误处划线并改正，每题两分，未改正得1分，共20分）DNA双链中，碱基对总是A-T,C-G配伍，其间以两个氢键相连。（x）G-C间以三个氢键相连使用有防“污染”作用的UNG的PCR试剂盒，PCR实验室就不必严格分区。（x）UNG酶只对低浓度的产物污染有效在全血、骨髓标本的釆集时，可使用EDTA、枸缘酸钠或肝素抗凝。（x）不能使用肝素抗凝血清HBeAg的存在是HBV感染及感染程度的确证标志。（x）HBeAg是病毒复制的标志在PCR试剂盒中所使用的UTP与天然RNA分子中的U没什么区别。（V）基因扩增检验实验室“可移动紫外灯”的作用主要是便于实验室台面的消毒杀飢（4）定量PCR与定性PCR测定原理的最主要区别点在于前者的测定点在PCR的指数扩增期，而后者多为扩增平台期。（寸）加样器只要在其量程范围内，其吸液准确度均相同。（x）不同规格的加样器之间准确度不同室内质量控制（IQC）监测和控制的是实验室测定的精密度（重复性），而室间质量评价则通过不同的实验室测定结果的比对而评价实验室测定的准确度。（力临床检验中的系统误差通常表现为质控物测定SD的增大.3）三，选择题（每题2分，共20分）在核酸提取时，常需使用氯化钠、醋酸钠等盐溶液，其目的是：（A）A中和核酸的负离子，使其易于沉淀B调节PH值C保证核酸的完整性D无特定目的临床上使用核酸扩增方法诊断沙眼衣原体感染，在标本收集上最为关键的是：（B）A标本的采取方式B标本的保存方式C标本的运送方式D标本采取的时间之所以要将基因扩增检验实验室的产物分析区设置为负压状态，目的是：（B）A防止生物传染危险物的逸出B防止扩增产物从该区进入上游区域C防止该区灰尘的逸出D无特殊目的核酸探针的标志性特征是：（D）A一小段巳知序列的单链核酸B一小段未知序列的单链核酸C一小段己知序列的双链核酸D有同位素或非同位素标记物核酸提取纯化中，RNase最主要的潜在污染源是：（D）A实验室环境B实验用品如吸头、离心管等C实验人员的手D以上A和BPCR方法检测病原微生物所扩増的区段，一般为：（B）A整个病原体基因组B病原体基因组内的保守区域C病原体基因组内的任一区域D以上都不是无创产前基因诊断为胎儿做出基因检测，需从孕妇外周血中分离获取及少量的：（B）A孕妇有核红细胞B胎儿有核红细胞C白细胞D以上均可临床PCR测定的重复性不好的原因如下，但除外：（B）A试剂盒核酸提取方法对扩增抑制物去除不干净B标准品浓度不准C核酸扩增仪空间温度不均D加样重复性差有关于动力学定量PCR方法中对扩增效率的测定，下述哪一条是错误的：（B）A必须在扩增的指数期内测定B可在扩増的任何阶段进行C与扩增产物的测定有关D尽可能多选几个测定点临床基因扩増检验的室内质量控制与通常的临床定性免疫测定IQC的最大不同在于：（D）A弱阳性质控血清的设置B强阳性质控血清的设置C阴性质控血清的设置D以上均是四，问答题（40分）1.有一基因扩增检验实验室在检测临床血淸标本HCVRNA时，以HCV扩増片段的cDNA为标准品，检测结果除了试剂盒所带的cDNA标准品为阳性外，所有临床标本及弱阳性质控原血清样本、阳性质控样本均为阳性，并旦阳性强度都较为接近。显然该次RT-PCR扩増检测存在问题。那么，你能帮助该实验室分析一下可能的检测失败的原因吗并设计一个相应的验证试验证实。（20分）答案（空）2.今有一传染病医院为监测肝炎病人抗病毒治疗效果，现有一间面积为50平方米的房间，想建立一个临床基因扩增检验实验室开展HBVDNA和HCVRNA检测项目，经向有关专家咨询，专家建议其按卫生部要求将实验室分为三个区（图示如下），选用荧光PCR方法，仪器设备按要求配备，可选用有SDA批准的荧光PCR试剂盒，你认为该专家的实验室设置有无原则性问题，对临床实际检测工作是否方便如否，则请指出可能会有那些不方便要是向你咨询，你会如何建议（请将你设计的实验时设置画出）（20分）答：不方便，此设计进入样本制备区一定要通过试剂准备区，容易增加污染的风险，且缓冲间的设计也不合理，违背了PCR实验室设计中“各区独立，方便工作”等原则。我的设计如下：PCR检测上岗证试题（二）PCR培训班考试试题一、选择题（共20题，每题2分）1、 PCR技术扩增DNA,需要的条件是（A）①目的基因②引物③四种脱氧核昔酸④DNA聚合酶等⑤mRNA⑥核糖体TOC\o"1-5"\h\zA、 ①②③④B、 ②®④⑤C、 @@④⑤D、 ①②③⑥2、 镁离子在DNA或RNA体外扩增反应的浓度一般为（D）A、 0.3-lmmol/LB、 0.5-lmmol/LC、 0.3-2mmol/LD、 0.5-2mmol/L3、 多重PCR需要的引物对为（D）A、 一对引物B、 半对引物C、 两对引物D、 多对引物4、 PCR是在引物、模板和4种脱氧核糖核苜酸存在的条件下依赖于DNA聚合酶的酶促合成反应，其特异性决定因素为（B）A、 模板B、 引物C、 dNTPD、 镁离子5、 在PCR反应中，下列哪项可以引起非靶序列的扩增的扩增（C）A、 TaqDNA聚合酶加量过多B、 引物加量过多C、 A^B都可D、 缓冲液中镁离子含量过高6、 PCR技术的发明人是（A）A、 MullisB、 史蒂文.沙夫C、 兰徳尔.才木7、 PCR产物短期存放可在（A）保存。TOC\o"1-5"\h\zA、 4CB、 常温C、 ・80°CD、 高温8、 PCR产物长期储存最好置于（D）。A、 4,CB、 常温C、 16°CD、 -20°C9、 PCR的基本反应过程包括（A）A、 变性、退火、延伸B、 变性、延伸C、 变性、退火10、 在实际工作中，基因扩増实验室污染类型包括（D）A、 扩增产物的污染B、 天然基因组DNA的污染C、 试剂污染和标本间交叉污染D、 A、B、C都可能11、 PCR技术于哪一年发明（A）TOC\o"1-5"\h\zA、 1983B、 1971C、 1987D、 199312、 TaqDNA聚合酶酶促反应最快最适温度为（C）A、 37'CB、 50-55eCC、 70-75°CD、 80-85C13、 以下哪种物质在PCR反应中不需要（D）A、 TaqDNA聚合醵B、 dNTPsC、 镁离子D、 RNA酶14、 PCR检测中，经过n个循环的扩增，拷贝数将增加（C）TOC\o"1-5"\h\zA、 nB、 2nC、 2nD、 n215、 PCR基因扩增仪最关键的部分是（A）A、 温度控制系统B、 荧光检测系统C、 软件系统D、 热盖16、 以下哪项不是临床PCR实验室设计的一般原则（A）A、 各区合并B、 注意风向C、 因地制宜D、 方便工作17、 PCR实验室一般包括（D）A、 试剂准备区B、 标本制备区C、 扩增区和产物分析区D、 A、B、C都含18、 PCR技术不仅为遗传病的诊断带来了便利，而旦改进了检测细菌和病毒的方法。若要检测一个人是否感染了艾滋病病毒，你认为可以用PCR扩增血液中的（D）。A、 白细胞DNAB、 病毒蛋白质C、 血浆抗体D、 病毒核酸19、 如果反应体系中加入模板DNA分子100个，则经过30个循环后，DNA分子的数量将达到（D）个。A、 100x30B、 100x30x2C、 100x302D、 100x23020、 PCR扩增产物的分析方法主要有（D）A、 凝胶电泳分析法B、 点杂交法C、 荧光探针定量PCR法D、 A、B、C都是二、判断题（共20题，每题2分）1、 PCR引物设计的目的是在扩增特异性和扩増效率间间取得平衡。（4）2、 在PCR反应中，dATP在DNA扩増中可以提供能量，同时作为DNA合成的原弭。（心3、 DNA扩増过程未加解旋酶，可以通过先适当加温的方法破坏氢键，使模板DNA解旋。（4）4、 PCR反应中，复性过程中引物与DNA模板链的结合是依靠碱基互补配对原则完成。（寸）5、 PCR与细胞内DNA复制相比所需要酶的最适温度较高。（V）6、 PCR技术可用于基因诊断，判断亲缘关系等。（4）7、 PCR技术需在体内进行O（x）8、 PCR反应体系中的缓冲液相当于细胞中的体液。（4）9、 核酸的复制是由5' 3'方向进行的。（力10、配对的碱基总是A与T和G与C。（寸）11、 HBsAg转阴性后一段时间才出现可检测的HBsAb,此段间隔期称之为“窗口期（V）12、 市面上多数试剂用淬灭基团Q基团和报告基团R基团来标记荧光定量PCR的探针。（寸）13、 PCR反应体系中Mg2+的作用是促进TaqDNA聚合酶活性。（寸）14、 若标本中含有蛋白变性剂（如甲醛），PH、离子强度、Mg2+等有较大改变都会影响Taq酶活性。（寸）15、 每个子代DNA分子中均保留一条亲代DNA链和一条新合成的DNA链，这种复制方式称之为半保留复制。（4）16、 发生溶血的标本对PCR结果没影响。（x）17、 “平台效应”是描述PCR后期循环产物对数累积趋于饱和。（力18、 逆转录聚合酶链式反应（reversetranscription-PCR.RT-PCR）就是在应用PCR方法检测RNA病毒时，以RNA为模板，在逆转录酶的作用下形成cDNA链，然后以cDNA为模板进行正常的PCR循环扩增。（寸）19、 在定量PCR中，72.C这一步对荧光探针的结合有影响，故去除，实际上55C仍可充分延伸，完成扩増复制。（4）20、 PCR可应用于遗传病、肿瘤及病原体检测三大方面（寸）三、简答（共两题，每题10分）1、 PCR技术答：PCR技术是用一对寡聚核昔酸作为引物（要点1：2分），通过高温变性、低温退火、中温延伸（要点2：5分）这一周期的多次循环，使特异的DNA片段数量指数倍数增加（要点3：3分）。2、 简述定量PCR检测操作的全过程。答：标本的釆集，保存（2分） 样品前处理（2分） 待样品充分裂解后点样上机反应（2分） 反应结束后观察结果（2分） 发报告（2分）试题（三）1、某个婴儿不能消化乳糖，经检查发现，他的乳糖酶分子有一个氨基酸改换而导致乳糖酶失活，发生这种现象的根本原因是（C）缺乏吸收某种氨基酸的能力不能摄取足够的乳糖酶乳糖酶基因个别碱基发生改变乳糖酶基因有一个碱基缺失了分析：由题意知，与正常婴儿相比，的乳糖酶不能消化乳糖的婴儿分子有一个氨基酸发生了替换，该婴儿的乳糖酶基因发生了突变，如果是由基因中碱基对的增添或缺失引起，则乳糖酶中可能会有多个氨基酸发生变化，因此发生这种现象的根本原因是乳糖酶基因个别碱基发生了替换.故选：C.2、 如果将镰刀型细胞贫血症的患者血液输给一血型相同的正常人，将使该正常人（B）A基因产生突变，使此人患病B无基因突变，性状不遗传给此人C基因重组，将病遗传给此人D无基因重组，此人无病，其后代患病3、 传统的Sanger测序技术一次测序长度能够达到：（）A、 100-300bpB、 300-500bpC、 600-900D、 ＞lKb4、 双脱氧末端终止法测序体系与PCR反应体系的主要区别是前者含有（D）模板B.引物C.DNA聚合酶D.ddNTPE.缓冲液5、 分子杂交试验不能用于（D）单链DNA分子之间的杂交B.单链DNA分子与RNA分子之间的杂交C.抗原与抗体分子之间的结合D.双链DNA分子与RNA分子之间的杂交6、 在Sanger基因测序技术中心所使用的酶是：（A）DNA聚合酶B.RNA聚合酶C.DNA连接酶D.DNA拓扑酶7、 下列表观遗传学变异哪项能够通过基因測序检测：（B）DNA聚合酶B.组蛋白甲基化C.端粒酶活性D.组蛋白乙酰化8、 基因突变是指DNA分子中发生碱基对的（缺失）（替换）（异位）而引起的基因突变。9、 DNA双链中，碱基对A-T/G-C配伍，A-T以3个氢键，G・C以2个氢键相连。（x）10、 使用有防"污染''作用的尿苜糖基酶（UNG）的PCR试剂盒，该酶可以降解611、 样本核酸定性检测的室内质控应选择阴性，阳性和弱阳性质控，室内质控应该包括样本提取和检测的全过程。（寸）12、 定量PCR与定性PCR测定原理的最主要区别点在于前者的测定点在PCR的指数扩增期而后者多为扩增平台期（寸）13、 室内质量控制（IQC）监测和控制的是实验室测定的精密度（.重复性），而室间质量评价则通过不同的实验室测定结果的比对而评价实验室测定的准确度。（4）14、 临床检验中的系统误差通常表现为质控物测定SD的增大。（x）应该为随即误差依据质控物测定的SD的增大15、 以下哪项有利于DNA保存（A）加入EDTA螯合钙离子，去除核酸酶的活性加入少量的DNAse溶于PH3.0溶液加入少量的RNAse16、 在开展临床检验项目时，应首先考虑：（A）A.临床有效性和分析有效性B.检测精密度和检测准确度C.临床有效性和检测精密度D.分析有效性和检测准确度17、 荧光定量PCR检测过程中，基线漂移的可能原因有：（D）A.蒸发B.探针水解C.相邻荧光通道干扰D.以上都是18、 将基因扩増实验室的产物分析去设置为负压状态，目的是：（C）A.防止该区灰尘的逸出B.为了生物安全的目的C.防止扩增产物从该区逸出D.防止有生物传染危险的样本逸出19、 真核生物DNA主要以那种形式存在：（D）A.环状单链分子B.线性单链分子C.环状双链分子D.线性双链分子E线性或环状双链分子20、 每次PCR试验必须做阴性对照，阴性对照应至少包括：A、 空白试剂对照B、 未加模板的扩增区反应混合液C、 阴性样本D、 双蒸水21、 实验室清洁工作应在以下情况下进行：（D）A、 每次试验后B、 文件规定清洁时间C、 实验室发生污染时D、 以上都是22、 核酸提取步骤可能出现的问题：（D）A、 模板中的蛋白质、脂类、糖类未去除B、 提取过程中引入的有机溶剂未去除。C、 由于人员操作和设备状态不好造成提取效率低D、 以上都是23、 DAN是反向平行的互补双链，一条链从上往下走向都是5*->3\另一条是从飞往上也是'5'一3'（寸）24、 DNA复制和转录过程的新链合成方向都是5，一>3\（4）25、 无室间质评计划可参加时，可以用室内质控替代。（x）26、 肿瘤基因检测既可以使用患者的肿瘤样本，也可以直接使用血液样本。（寸）27、 即使核酸检测有纯化的步骤，也不可以使用检验科检测其他项目后剩余的血液样本进行核酸纯化和检测。（4）28、 扩增管没有盖好会造成PCR反应液热蒸发，直接影响结果，同时可称为一个污染源。（V）29、 核酸提取时，常需使用氣化钠或醋酸钠等盐溶液，其目的是：（A）A、 中和核酸的负离子B、 条件PHC、 由于人员操作和设备状态不好造成提取效率低D、 以上都是北京市A卷基因扩増检验实验室规范化培训班理论考试（五）一•填空（每空0.5分，共15分）为加强医疗机构临床基因扩增实验室规范化管理，卫生部于2010年发布《医疗机构临床基因扩增检验实验室管理办法》，北京市卫生局为做好实验室备案工作，于2012年发布了《北京市医疗机构临床基因扩增检验实验室技术审核暂行规定》。申请设置临床PCR检测实验室应当进行备案，提供的材料包括:《医疗机构执业许可证》、拟设置基因扩増检验实验室的医疗机构对临床基因扩増检验的需求情况拟设基因扩增检验实验室的设置平面图;实验室负责人简历表:实验室工作人员一览表;主要仪器设备一览表、拟开展的临床基因扩増检验项目、实验室质量管理程序文件和作业指导书目录、检验报告样单、北京市医疗机构临床基因扩增检验实验室自査/审核表和其他相关材料。医疗机构医学检验科应当设有细胞分子遗传学专业诊疗科目。室内质量控制（IQC）监测和控制的是实验室测定的精密度，而室间质量评价则通过对不同的实验室测定结果的比对而评价实验室测定的准确度。1977年，Sanger等发明的和Gilbert等发明的末端合成终止法（sanger法）标志着第一代测序技术的诞生。核酸包括两种类型：脱氧核糖核酸和核糖核酸，二者的主要区别为：前者由ATGC四种碱基组成，而后者由AUGC四种碱基组成。根据遗传中心法则，遗传信息的流动方向为DNA；RNA；蛋白质。1，7.普通临床基因扩増检验实验室一般包括下面四个分区：试剂储存和准备区：标本制备区；扩增区：扩增产物分析区。2,8.提纯的核酸样品可根据A260nm波长的光吸收值算出其含量，通过计算A260nm/A280m波长光吸收比值计算出其纯度。基因扩増实验室负责人应具有相关专业专业技术职称任职资格，技术负责人应具有相关专业（高级）学位，并有5年以上相关专业的工作经历。cfDNA的中文名称是游离脱氧核糖核酸，ctDNA的中文名称是循环脱氧核糖核酸。二.是非题（在你认为正确的句子后而打4错误的后面打x,每题1分，共15分〕IDNA双链中，碱基A・T之间以三个氢键相连，G・C以两个氢键相连。（x）使用有防“污染”作用的尿甘糖基酶（UNG）的PCR试剂盒，该酶可以降解含有UTP的扩增产物°（7）DNA变性是指在物理或化学因素的作用下，导致两条DNA链之间的氢键断裂，而核酸分子中的所有共价键同时也受影响。（x）自制室内质控品时，应对质控品的均匀性和稳定性进行评价。（寸）定量PCR与定性PCR测定原理的最主要的区别点在于前者的测定点在PCR的指数扩增期，而后者多为扩増平台期。（4）处理PCR标本时，在没有生物安全柜的情况下，可用超净台操作。（x）临床检验中的系统误差通常表现为质控物测定结果的SD增大。（x）生物安全2级实验室（BSL-2）的实验室结构和设施、安全操作规程、安全设备适用于对人或环境具有中等潜在危害的微生物。（寸）DNA复制和转录过程的新链合成方向都是5J3"（寸）质量体系文件中应包括质量方针、质量目标和质量指标。（寸）II-无法参加室间质量评价计划时，可以用室内质控替代。（x）一般进行HCV-RNA检测时宜釆用EDTA抗凝血，不宜釆用肝素抗凝。（寸）以次氯酸为主要成分的清洁剂在配制后可以长期使用。（x）核酸的解链温度（Tm）与G+C含量有关，G+C含量愈大，Tm愈低。（x）扩增管没有盖好会造成PCR反应液热蒸发，直接影响结果，同时可成为一个污染源。三.单选题（请将所选答案填写在题后的括号中，每题1分，共25分）PCR技术的发明人是：（C）WatsonJ.D.CrickF.H.C.KaryMullis;RosalindFranklin.下面哪种是容易造成PCR实验室环境污染的因素：（D）中央空调实验室和缓冲区无通风设施人流和物流的走向以上都是在生物界尚无充足证据的信息流动过程的是（B）DNA—RNAB.蛋白质-*RNAC.DNA一DNAD.RNA—DNA核酸提取纯化中，RNase潜在污染源是：（D）实验室环境；实验用品如吸头、离心管等；实验人员的手；以上都是。下列哪一项不是PCR实验室设计的基本原则：（A）各区联合；注意风向；因地制宜；方便工作。有关于荧光定量PCR方法，下述哪一条是错误的？（A）在扩増的指数期定量；采用内标和外标方法均可；可釆用Taqman探针；在扩増的终点测定定量。在选择时临床检验项目时，应首先考虑：（A）临床有效性和分析有效性；检测精密度和检测准确度：c.临床有效性和检测精密度；D.分析有效性和检测准确度。8以下哪项有利于DNA的保存：（A）A加入EDTA螯合钙离子，去除核酸酶的活性；B加入少量DNase；C溶于pH3.0溶液；D加入少量RNaseO实验室的淸洁工作应在以下情况下进行：（D）A每次实验后B文件规定清洁时间C实验室发生污染时D以上都是荧光定量PCR检测过程中，基线漂移的可能原因有：（D）蒸发；探针水解相邻荧光通道干扰以上都是将基因扩增检验实验室的产物分析区设置为负压状态，目的是:防止有生物传染危险的样本逸出；防止扩增产物从该区逸出；防止该区灰尘的逸出：为了生物安全的目的常用RNase抑制剂是（B）乙醇；DEPC（焦碳酸二乙酯）：异丙醇；精胺真核生物染色体DNA主要以下列哪种形式存在（D）环状单链分子线性单链分子环状双链分子线性双链分子TaqMan探针采用的是（A）荧光标记的探针B.生物素标记探针C.同位素标记探针D.SYBRGreen荧光染料15.最大量程为200U1的微量移液器，显示读数为020,实际的吸液容量值为：（C）A.0.2ul2ulC.20ulD.200ul有关核小体的错误叙述是：（D）核小体是染色体的基本单位B.DNA和组蛋白共同构成核小体DNA和组蛋白H1构成核小体连接区D.RNA和组蛋白共同构成核小体基因突变的实质是：（A）染色体上的DNA序列变化了B.染色体上的DNA变成了RNA染色体上的DNA变成了蛋白质D.染色体上的DNA高级结构发生了局部改变如果一个PCR反应体系中加入模板200个，经过30个循环后扩增产物的数量将达（C）200x302200x230200x30x22002x3019.Sanger测序体系与PCR反应体系的主要区别是前者含有：（B）模板ddNTPDNA聚合酶引物分子杂交试验不能用于：（D）单链DNA分子之间的杂交单链DNA与RNA分子之间的杂交抗原与抗体分子之间的结合双链DNA与RNA分子之间的杂交在Sanger基因测序技术中所使用的酶是：（A）DNA聚合酶RNA聚合酶DNA连接酶DNA拓扑酶双链DNA中的碱基对有：（D）A-UB.G-TC.C-AD.T-A下列四个DNA片段中含有回文结构的是（D）GAAGAATGGAAAGAAAAGGAATTC核酸分子中储存遗传信息的关键部分是：（D）mRNAtRNArRNADNA核酸检测探针的标志性特征是：（A）一小段已知序列的单链核酸：B.一小段未知序列的单链核酸；一小段己知序列的双链核酸；有同位素或非同位素标记物。简述基于Taqman探针技术的荧光定量PCR基本原理。（5分）Taqman荧光定量技术是以Taqman荧光探针为基础，Taqman荧光探针为一寡核昔酸，两端分别标记一个荧光发射基团和一个荧光淬灭基团。探针完整时，发射基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收;PCR扩增时，Taq酶的5,3外切酶活性将探针藤切降解，使荧光发射基团和荧光淬灭基团分离，从而荧光监测系统可接收到荧光信号，即每扩增一条DNA链，就有一个荧光分子形成，实现了荧光信号的累积与PCR产物形成完全同步。从而实现定量（如下图）。常用的荧光基团是FAM,TET,VIC,HEX。感染性疾病定量PCR的方法学性能验证包含哪些指标？简述每项指标的基本含义（5分）重复性：反应各次测定结果间相互接近的程度，目的在于评价或验证试验方法随机误差准确性：反应测定值和真值间的符合程度。分析特异性：即真阴性率，即实际为阴性的样本检测结果为阴性的比率测定下限：特定方法能够准确定量测定被测物质的最低浓度或含量;抗干扰能力遗传病产前基因诊断的取材一般有哪些？（5分）绒毛标本：孕6-9周羊水标本：孕16-22周脐血标本：孕28周左右感染性疾病的定量、定性检测，人基因组的基因型检测，上述三类PCR检测的室内质控品应如何设置？（5分）日程检测阳性样本的收集或者永生化细胞系，制备成含一定比例突变的质控样本弱阳性质控品：浓度为试剂盒检测限2-4倍的样本较强阳性的质控样本阴性质控品：日常检测的阴性标注或者从野生型细胞系制备得到简述生物安全柜、超净工作台、通风橱三者的设计区别，以及在PCR过程中的使用区别？答案（空）某一开展HCVRNA定量检测的临床PCR实验室，连续三天发现阴性质控品的结果出现阳性扩增曲线。请分析并査找该情况产生的可能原因，针对原因应如何处理？（10分）答：产生了污染，阴性质控品出现阳性，这是失控的表现。如果曲线向上漂移可能是出现r污染可能是由于某一天操作上的食物导致实验室被污染，应开窗通风，用次氯酸钠溶液清洗地而，实验台面甚至墙而。增加紫外照射时间，用15%乙醇空中喷雾等方法去除。每天进行，直到污染消除。向上的趋势性变化：可能存在累积性产物污染，实验室扩展产物逐渐积累，所导致的的，此时实验室需要进行彻底清洁。处理：去除所有可能的污染因素后，所有阳性标本须重新测定，并增加一倍阴性质控样本。某一HPVDNA样品的PCR检测结果显示内标基因和目的基因均无扩增，阴性报告可否直接发放？请分析可能的原因，应该如何解决？（10分）答：不能直接发放。首先要判断质控对照品的结果如何，如果阴性对照均为阴性，阳性对接结果均为阳性，内对照的结果也在控，方可发放阴性报告。如果阴性质控为阴性，本次的阴性结果根据阳性质控品检测情况决定是否可以发出，建议増加一倍阴性质控品样本的情况下重复检测一次，同时评估人、机、料、法、环，逐个排查原因，并进行纠正。B卷临床基因扩増检验实验室规范化培训班理论考试卷（六）填空（每空0.5分，共15分）1.为加强医疗机构临床基因扩增实验室规范化管理，卫生部于2010年发布《医疗机构临床基因扩增检验实验室管理办法》，北京市卫生局为做好实验室备案工作，于2012年发布r《北京市医疗机构临床基因扩增检验实验室技术审核暂行规定》。北京市卫生局及各区县卫生局负责所辖行政区域内地方医疗机构临床基因扩增检验实验室的备案和监督管理工作。其中备案的技术审核工作流程主要包括：申报《医疗机构执业许可证》、拟设基因扩增检验实验室的设置平面图、实验室负贵人简历表、实验室工作人员一览表、拟开展的临床基因扩增检验项目；实验室质量管理程序文件和作业指导书目录；北京市医疗机构临床基因扩増检验实验室自查/审核表；医疗机构的医学检验科应当设有专业诊疗科目细胞分子遗传学。备案的临床基因扩增检验实验室参加医疗机构的年度校验。临床基因扩增检测的分析中质量保证关键内容包括：室内质量控制和室内质量评价。其中前者监测和控制的是实验室测定的精密度，而后者则通过对不同的实验室测定结果的比对而评价实验室测定的准确度。在进行荧光定量PCR检测之前，样本手工预处理应该在生物安全柜中进行，并且使用吸头进行样本操作。PCR的基本反应过程包括：变性、退火、延伸。荧光定量PCR使用的Taqman探针两端标记有报告基团和淬灭基团。根据遗传中心法则，遗传信息的流动方向为DNAtRNAt蛋白质。8.普通临床基因扩增检验实验室一般包括下面四个分区：试剂储存和准备区；标本制备区；扩增区；扩増产物分析区。5,9.提纯的核酸样品可根据A260nm波长的光吸收值算出其含量，通过计算A260nm/A280m的比值计算出其纯度。10.临床基因扩増实验室检测用的试剂应当经NMPA批准。cfDNA的中文名称是，ctDNA的中文名称是。是非题（在你认为正确的句子后面打寸，错误的后面打x,每题1分，）（15分）DNA双链中，碱基A-T之间以两个氢键相连，G-C以三个氢键相连。（1）DNA变性是指在物理或化学因素的作用下，导致两条DNA链之间的氢键断裂，而核酸分子中的所有共价键同时不受影响。（寸）自制室内质控品时，应对质控品的均匀性和稳定性进行评价。（寸）定量PCR与定性PCR测定原理的最主要的区别点在于：前者测定点为扩增平台期，而后者的测定点在PCR的指数扩增期。（寸）处理PCR标本时，在没有生物安全柜的情况下，可用超净台操作。（x）临床检验中的系统误差通常表现为室内质控品测定结果的SD增大。（x）扩增管没有盖好会造成PCR反应液热蒸发，直接影响结果，而且会成为一个污染源。（4）核酸是极性化合物，不溶于水，可溶于乙醇等有机溶剂。（4）质量体系文件中应包括质量方针、质量目标和质量指标。（x）无法参加室间质量评价计划时，应进行室间比对，不可以用室内质控替代o（x）核酸的解链温度（Tm）与G+C含量有关，G+C含量愈大，Tm（解链温度）愈低。（x）PCR反应中，复性过程中引物与DNA模板链的结合是依靠碱基互补配对原则完成。（4）核酸的复制是由3'->5'方向进行的0（x）PCR与细胞内DNA复制相比所需要酶的最适温度较高。（V）PCR可应用于遗传病、肿瘤、病原体检测及判断亲缘关系等方面。（寸）单选题（请将所选答案填写在题后的括号中。每题1分，共25分）PCR技术的发明人是：（A）KaryMullisCrickF.H.C.WatsonJ.D.RosalindFranklin.生物安全水平的级别共分为几个等级（D）1个B.2个C.3个D.4个有关于荧光定量PCR方法，下述哪一条是错误的？（A）在扩増的指数期定量；釆用内标和外标方法均可；可采用Taqman探针；在扩増的终点测定定量。在选择开展临床检验项目时，应首先考虑：（A）临床有效性和分析有效性；检测精密度和检测准确度；临床有效性和检测精密度：分析有效性和检测准确度。5以下哪项有利于DNA的保存：（C）溶于pH3.0溶液加入少量RNase加入EDTA螯合钙离子，去除核酸酶的活性加入少量DNase荧光定量PCR检测过程中，基线漂移的可能原因有：（D）蒸发；探针水解相邻荧光通道干扰以上都是将基因扩增检验实验室的产物分析区设置为负压状态，目的是：（C）防止该区灰尘的逸出；为了生物安全的目的；防止扩增产物从该区逸出；防止有生物传染危险的样本逸出；真核生物染色体DNA主要以下列哪种形式存在（）A环状单链分子B线性单链分子C环状双链分子D线性双链分子TaqMan探针釆用的是（C）同位素标记的探针YBRGreen荧光染料荧光标记的探针生物素标记的探针最大量程为200ul的微量移液器，显示读数为020,实际的吸液容量值为：（B）A.200ul20ulC.2ulD.0.2ul有关核小体的错误叙述是：（D）核小体是染色体的基本单位B.DNA和组蛋白共同构成核小体DNA和组蛋白H1构成核小体连接区D.RNA和组蛋白共同构成核小体基因突变的实质是：（A）染色体上的DNA变成了RNAB.染色体上的DNA序列变化了C.染色体上的DNA高级结构发生了局部改变D.染色体上的DNA变成了蛋白质如果一个PCR反应体系中加入模板200个，经过30个循环后扩増产物的数量将达到200x302200x230200x30x22002x30双链DNA中的碱基对有：（B）A-UB.G-CC.A-CD.G-A下列四个DNA片段中含有回文结构的是（B）GAAAAGGAATTCGAAGAATGGAAA核酸分子中储存遗传信息的关键部分是：（D）MrnaTmarRNADNA核酸检测探针的标志性特征是：（A）一小段已知序列的单链核酸；B.一小段未知序列的单链核酸；一小段己知序列的双链核酸：有同位素或非同位素标记物。PCR技术扩增DNA,需要的条件是（A）①目的基因②引物③四种脱氧核昔酸④DNA聚合酶等⑤mRNA⑥核糖体TOC\o"1-5"\h\z①②③④®®@⑤®®@⑤①②③⑥多重PCR需要的引物对为（D）一对引物半对引物两对引物多对引物以下在PCR反应中，对扩增产物的特异性起决定因素为（B）模板引物dNTP镁离子TaqDNA聚合酶酶促反应最快最适温度为（C）35-40C50-55°C70-75C80-85°C以下哪项不是临床PCR实验室设计的一般原则（A）各区合并注意风向因地制宜方便工作下列哪一种病毒的遗传物质为RNA（DE）乙肝病毒人乳头瘤病毒巨细胞病毒人类免疫缺陷病毒新型冠状病毒在做结核分枝杆菌-荧光PCR检测之前，应釆用下面哪个浓度的氢氧化钠对痰液标本进行液化。（C）A.2%B.3%C.4%D.5%普通PCR基因扩增仪最关键的部分是（B）热盖温度控制系统软件系统荧光检测系统四.简答题（每题5分，共25分）感染性疾病的定量、定性检测，人基因组的基因型检测，对上述三类PCR检测的室内质控品的浓度水平和型别如何要求？（5分）简述什么情况下应该对分子诊断检验程序进行性能验证？（5分）临床PCR实验室质量管理体系文件应包含哪些内容？（5分）简述生物安全的概念、实验室生物安全水平的概念。（5分）可用哪些方法对分子诊断实验室的员工进行技术工作能力评估（至少列出5种）。（5分）五.论述题（共20分）某一开展乙肝DNA定性检测的临床PCR实验室，参加盲样测试（包括三个阳性样本，两个阴性样本），该实验室做出的结果为5份样本全部阳性，工作人员将盲样全部阳性的结果确认后立即发出。第二天发现当天的室内质控结果也是全部阳性，并且当天的阳性率明显增高。请回答：（1）这样做是否正确？（4分）；（2）应该如何处理？（8分）（3）分析该情况产生的所有可能原因？（8分）安徽省2020PCR上岗证考试试题（七）PCR整个过程由（ABC）基本反应步骤构成。变性退火延伸复制PCR扩增体系主要由（ABCDE）等基本要素组成。引物酶dNTP模板Mg2+DNA以（B）方式进行复制。半保留全保留C3到5，方向5倒3'方向生物合成方向是（B）。3'到5'方向5倒3方向C4到5'方向5'到4,方向核酸分子中的嗦吟碱基主要有（ABCDE）几种。TOC\o"1-5"\h\zAGTCU核酸分子中的嗟嚏碱基主要有（BD）几种。A.AB.GC.TD.CE.U（C）主要存在于DNA分子中。：A.AB.GC.TD.C（D）主要存在于RNA分子中。：A.AB.GC.TD.U在普通PCR扩增中，（A）决定了扩增的特异性；而在TaqMan荧光PCR中，扩增的特异性由于（C）的使用而得到了进一步増强。：A.引物B.核昔酸C.TaqMan探针D.荧光染料HBeAg阳性血清标本采用PCR检测HBVDNA为阴性的可能因素有（ABCD）等。样本浓度较低混入有机溶剂使用肝素抗凝核酸降解临床PCR检测体液标本如要长期保存，则应保存于（D）C下。TOC\o"1-5"\h\z-20°C-40°C-60°C-70°CPCR测定中的“假阳性”最容易由下面（A）方面引起：标本之间的交叉污染环境中的细菌污染灰尘污染以前PCR扩増产物的污染使用核酸扩增方法诊断沙眼衣原体感染，在标本收集上最为关键的是（B）。标本的釆集方式标本的保存方式标本的运送方式标本釆集的时间PCR室污染来源主要有（D）。：标本中存在的大量微生物质粒克隆环境中特定靶核昔酸扩増产物使用核酸扩増方法检测HCMV（人巨细胞病毒）的临床意义（B）。优生优育器官移植、免疫缺陷患者、抗肿瘤治疗中监测抗病毒治疗药物疗效监测HCMV感染的早期诊断之所以倾向用核酸扩増方法检测结核分枝杆菌，主要是因为（A）。：核酸扩増检测的灵敏度和特异性最好临床容易接受结核分枝杆術难于培养需时太长无其它有效的测定方法理想的PCR实验室分区应包括:（ABCD）O试剂准备区标本制备区扩增区产物分析区TaqMan荧光PCR测定原理中的关键点在于利用了Taq醵的（C）外切酶活性:3'到5'方向B4到5,方向5'到3'方向5'到4,方向PCR的特点（ABCD）o高特异性高灵敏性简便快速特定的低纯度标本也可使用PCR扩增主要阶段包括（ABCD）o线性基线期指数期初期指数期平台期PCR方法检测病原微生物所扩增的区段，一般为（B）。整个病原体基因组B.病原体基因组内的保守区域病原体基因组内的任一区域以上都不是临床PCR测定的重复性不好的原因是（D）。试剂盒核酸提取对干扰物去除不净加样重复性差核