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文档简介

实验一分光光度法11.学习分光光度计的使用方法2.掌握分光光度法测定未知溶液中蛋白质的浓度

实验目的一、紫外分光光度法---蛋白质浓度测定2标准比较法分光光度法原理朗伯-比尔定律:吸光度液层厚度A=κ·d·c摩尔吸收系数溶液浓度

C未知=A未知A标准×C标准蛋白质分子中酪氨酸、色氨酸残基的苯环含有共轭双键，在紫外280nm处有最大吸收峰，吸收值与浓度成正比。用1cm石英比色杯，在280nm处测吸光度A，用标准蛋白对照法测定蛋白浓度。3实验步骤空白管标准管BSA样品管生理盐水牛血清白蛋白未知蛋白质C标准=500μg/mLC未知=（计算）A标准=（测定）A未知=（测定）先用空白管调零，在280nm处测已知浓度为C标准的标准溶液的吸光度A标准、未知样品的吸光度A未知，未知样品的浓度C未知可按公式求得。4注意事项1.石英比色杯装3/4溶液2.拉杆第1格（近自己）---空白管3.开关“T”---开盖调%旋钮→0.00盖盖调%旋钮→100.04.开关“A”---吸光度调“零”旋钮→0.005.拉杆读第2格（标准管）的吸光度A标准拉杆读第3格（样品管）的吸光度A未知根据公式计算未知蛋白质的浓度C未知=A未知A标准×C标准5二、可见分光光度法检测有色溶液吸收光谱掌握单光束分光光度计检测有色溶液吸收光谱的方法实验目的6实验器材紫外/可见分光光度计（752-S型）兰色葡聚糖2000溶液坐标纸7实验原理1.可见光谱分析要求被测溶液的颜色与所用的单色光互补，以求达到溶液对光的最大吸收2.紫外可见分光光度计是利用物质对光的有选择吸收现象，对物质进行定性和定量分析，可在一定波长范围内扫描出溶液的吸收光谱图3.兰色葡聚糖2000溶液最大吸收峰为620nm8实验步骤开盖，开机预热20分钟2.设定起始波长500nm3.置入空白，样品4.调0%T5.盖盖，调100%T6.置模式为“吸光度(A)”调07.样品置入光路8.读取A值后开盖9.依次选择波长：550nm、620nm

、650nm、700nm、750nm10.置模式为透射比(T)11.重复3~9步骤12.取坐标纸，以波长为横坐标，以对应的吸光度(A)为纵坐标绘制吸收光谱图9结果与分析1.绘制兰色葡聚糖2000的吸收光谱图2.最大吸收峰值3.分析讨论10分析讨论11附图METASHU

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