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探究培养液中酵母菌种群数量的动态变化一、实验目的1.探究培养液中酵母菌种群数量的变化，尝试构建种群增长的数学模型。2.掌握血球计数板的使用方法和计数方法。二、实验原理酵母菌：不运动、单细胞、真核无性繁殖：出芽有性繁殖；子囊孢子菌落形态：

菌落湿润、小而突起或大而平坦、不透明、与培养基不结合、菌落颜色多样、一般有酒香味美蓝：氧化型呈蓝色

还原型呈无色用美蓝染色后，根据细胞的颜色鉴别酵母细胞的死、衰老或活细胞血细胞计数板：是一块特制的载玻片，其上有四条槽构成三个平台；中间较宽的平台又被一短横槽隔成两半，每一边的平台上各刻有一个方格网，每个方格网共分为九个大方格，中间的大方格即为计数室。25×1616×2525×1616×25两种规格：25*1616*25合计都是400个小方格计数室容积为0.1mm3三、实验方法与步骤1、啤酒酵母菌形态与出芽生殖（1）在载玻片中央加一滴0.05%吕氏碱性美蓝染色液，用滴管取1滴酵母菌菌液于染液中，混合均匀。（2）加盖玻片。注：不要产生气泡。（3）将制片放置约3min后镜检，先用低倍镜然后用高倍镜观察酵母菌的形态和出芽情况，并根据颜色区别死、活细胞。（4）计算酵母菌的死亡率。2、啤酒酵母菌生长曲线的测定（1）配制20mlPDA液体培养基分装于三角烧瓶中。（2）接种啤酒酵母菌于20mlPDA液体培养基，28℃培养24h，获啤酒酵母菌种子液。（3）接种0.1ml啤酒酵母菌种子液于若干20mlPDA液体培养基中，根据实验设计的条件（温度、振荡或不振荡等因素）进行培养。（4）在不同时间培养后取出，进行计数（OD值或直接计数法）。（5）以啤酒酵母菌数量为纵坐标，培养时间为横坐标，绘制生长曲线。a.镜检计数室b.在加样前，先对计数板的计数室进行镜检。若有污物，则需清洗，吹干后才能进行计数。c.在血细胞计数板上盖上盖玻片，沿盖玻片边缘（凹槽）滴加菌液，让菌液沿缝隙靠毛细渗透作用自动进入计数室。取样时先要摇匀菌液；加样时计数室不可有气泡产生。由此处注入显微镜直接计数法：d.显微镜计数静止3-5min观察：低倍镜找到计数室，高倍镜进行计数。每个计数室选5个中格（可选4个角和中央的一个中格）样品的含菌量：两个计数室中计得的平均数值来表示。注意：调节显微镜光线的强弱适当，否则视野中不易看清楚计数室方格线，或只见竖线或只见横线。e.用水冲洗干净血细胞计数板。

每一中方格的周围皆有二条边线，计算单一中方格的细胞数时，位于边线上的细胞计算其中两条边，另两条边上的细胞不计。培养时间（h）048121624487296菌液浓度（OD）显微计数（个）（5）以啤酒酵母菌数量为纵坐标，培养时间为横坐标，绘制生长曲线。时间（h)012356824487296120144168192吸光度(A)0.0250.2070.

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