紫外分光光度计课件

双光束紫外分光光度计的使用小组组长：小组成员：实训时间：第17周-第19周目录仪器介绍仪器的基本原理仪器的基本组成部件仪器的主要特点仪器的操作步骤以及注意事项利用紫外分光光度法测定水中苯酚的含量数据的处理仪器的介绍紫外可见分光光度计是一种历史悠久，覆盖面广，使用很多的分析仪器。在有机化学、生物化学、药品分析、食品检验、医药卫生、环境保护、生命科学等各个领域的科研、生产工作中都得到了极其广泛的应用。我们现在介绍的这一部仪器是由北京普析通用仪器有限责任公司，它具有出色的技术指标和稳定可靠的工作特征，友好直观的显示界面，流畅的人机对话操作，成功实现了超高精度和可靠性测量的严格要求，能极大地满足最专业用户分析工作需要。

双光束分光光度计的基本原理从光源中发出的光经过单色器后被一个旋转的反射镜（即切光器）分为强度相同的两束光，分别通过参比溶液和样品溶液。利用另一个与前一个切光器同步的切光器，使两束光在不同时间交替的照在同一个检测器上，通过一个同步信号发生器对来自两个光束的信号加以比较，并将两个信号的比值经过对后转换为相应的吸光度值。如下图所示：仪器的基本组成部件紫外分光光度计都是由光源、单色器、样品吸收池、检测器和信号显示系统五大部件组成光源单色器样品吸收池检测器信号显示系统光源光源的作用是供给符合要求的入射光。分光光度计对光源的要求是：在使用波长范围内提供连续的光谱，光强应足够大，有良好的稳定性，使用寿命长。光源一般分为可见光光源和紫外光光源。可见光光源常用钨丝灯，并且需要采用稳压电源供电或者是12V的直流电供电。紫外光光源此类多为气体放电光源，应用最多的是氢灯及同位素氘灯。单色器单色器的作用是把光源发出的连续光谱分解成单色光，并能准确方便地“取出”所需要的某一波长的光，它是分光光度计的心脏部分。单色器主要是由狭缝、色散元件和透镜系统组成。其中最为关键的是色散元件。它是由棱镜和反射光栅或两者的组合。吸收池吸收池又叫比色皿，是用于盛放待测溶液和决定透光液层厚度的器件。根据光学透光面的材质，吸收池有玻璃吸收池和石英吸收池两种。前者用于可见光光区测定，紫外光区则用石英吸收池。在使用吸收池的时候必须注意以下几点：拿取吸收池时，不可接触光学面；不可将光学面与硬物或赃物接触；不能再吸收池中长时间盛放含有腐蚀玻璃的物质；吸收池使用之后应立即清洗干净；不得在火焰或电炉上面进行加热或烘烤吸收池。检测器检测器又称接收器，其作用是对透过吸收池的光做出响应，并把它转变成电信号输出，其输出电信号大小与透过光的强度成正比。作为检测器，对光电转化器的要求是：光电转换有恒定的函数关系，响应灵敏度要高、速度要快，噪声低、稳定性高，产生的电信号易于检测放大等。信号显示器由检测器产生的电信号，经放大等处理后，用一定方式显示出来，以便于计算和记录。信号显示器分为两类：以检流计或微安表为指示仪表；数字显示和自动记录型装置。数据显示装置方便、准确，避免了人为读数错误，而且还可以连续数据处理装置，能自动绘制工作曲线，计算分析结果并打印报告，实现分析自动化仪器的主要特点优良的光学系统，先进的电子学系统，保证了0.015%T的低杂散光。采用进口全息光栅，进一步降低仪器的杂散光。，使仪器分析更加准确。双光束动态反馈比例记录测光系统保证了基线稳定性。光栅、氘灯、光电倍增管等关键器件均用进口件，保证优良性能和长寿命。独特的插座式钨灯和氘灯，换灯时免去光学调试。有丰富的定量分析软件和光谱扫描及处理软件。有蠕动进样器、超微量池架、恒温池架、光学积分球、镜面反射、光纤附件和比色皿系列等大量用户可选专用附件，使仪器的应用范围大大扩展。基于WINDOWS环境设计的UVWin中文操作软件,提供了丰富的仪器控制和操作功能，充分利用了现代先进的计算机技术，提高工作效率。仪器的操作步骤一、开机打开稳压电源，等5-10秒，稳压电源稳定后依次打开打印机、计算机，等待计算机正常进入到桌面后，再打开仪器主机电源。二、仪器初始化打开仪器主机电源后，确定样品池内没有挡光物（干燥袋或比色皿等）。双击桌面的“紫外软件”图标，（或点击“开始”菜单，选择“程序”，找到“Uvwin5紫外软件”，选择“Uvwin5紫外软件”）；等待仪器进行初始化，每一项检查“正确”后进行测量。

三、测量

1.正确放入比色皿：TU-1901仪器是双光束分光光度计，要在两个样品池内都放入空白溶液（或参比溶液）进行空白校正。然后只取出外侧的比色皿，放入测量的样品进行读数。(备注：样品池内侧的参比溶液在测量中不能取出，除非空白溶液改变或测量波长改变才拿出重新进行空白校正。)2.选择测量功能：Uvwin5紫外软件提供了丰富的测量功能，根据需要在“工作室”内选择所需要的测量方式。

附：测量方式的简介光度测量：可以做单个波长或多个波长下的吸光度（或透过率）测量。光谱扫描：主要测量样品的图谱做定性分析，即寻找测量样品的最大吸收峰。定量测定：主要通过测量标准样品自动建立工作曲线，来测量样品的浓度。时间扫描：主要测量样品在一定波长下随时间的变化曲线。也称动力学测量。3.设置参数选择好测量方式后，直接按F4，（或点击“测量”，在下拉菜单中选择“参数设置”）进入参数设置界面。主要设置测量波长。设置完成后一定单击“确定”，完成设置。4.空白校正正确放入空白溶液后，点击“校零”（在光谱扫描功能下是“基线”）键进行空白校正。5.读数空白校正完成后，正确放入样品，点击“开始”键（或按F9）进行测量。四、完成测量完成后根据需要保存或打印测量数据。退出紫外程序后如果不保存数据将清除。五、关机一定要取出样品池内的所有比色皿，关闭Uvwin5紫外软件。退出紫外操作系统后，依次关掉主机、计算机、打印机电源。最后关闭稳压电源。注意事项：本仪器位精密电子仪器，切忌带电插拔电源线及连接电缆，误操作有可能损坏仪器及计算机。仪器电压与实验室电压相匹配（本次电源电压为220V，50HZ交流电），最好配置交流稳压器功率不小于500VA，电源盒应该有地线并保证仪器良好接地。所用的比色皿必须配对要清洗干净，否则会给测量带来较大的误差。TU-1901双光速紫外可见分光光度计是实验室常用精密仪器，为提高仪器工作质量，及延长仪器的使用寿命，应按住那个在合适的工作场所，注意以下几点：避开高温高湿，在室温15—35度、湿度45—80%的条件下使用。如果室温在30度以上，请再湿度为70%以下使用。仪器应置于稳固的工作台上，不应该有强震动源。室内无强电磁干扰源及有毒有害气体。紫外分光光度法测定水中苯酚的含量一、实验目的

1.学习紫外分光光度法的基本原理及定量分析方法。

2.掌握紫外-可见分光光谱仪的基本结构和一般操作。二、实验步骤

1.苯酚标准溶液的配置

称取0.1000g分析纯苯酚，用蒸馏水溶解后转移至100mL容量瓶中定容，移取5.00mL于另一100mL容量瓶中，用蒸馏水定容，置于冰箱中保存，此溶液含苯酚50ug/mL。

2.最大吸收波长的测定移取苯酚标准溶液2.00mL于25mL容量瓶中，定容，摇匀，取适量倒入石英比色皿中，以蒸馏水为参比溶液，在波长200~400nm范围类进行扫描，得到吸收曲线，由吸收曲线确定最大吸收波长。3.标准曲线及样品的测定在6个25mL容量瓶中，分别加入0.50mL、1.00mL、2.00mL、3.00mL、4.00mL、5.00mL的苯酚标准溶液，用蒸馏水定容。在λmax处测定各种溶液的吸光度值，同时测定含苯酚水样（调整至合适浓度且溶液澄清）的吸光度值，由仪