色谱柱的制备

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色谱柱的制备第一页，共十一页，编辑于2023年，星期三实验目的

了解色谱柱的制备过程。练习用真空泵抽法装填色谱柱。

第二页，共十一页，编辑于2023年，星期三实验原理

1.的分离是在色谱柱中进行的，制备一根分离性能好的色谱柱，是完成色谱分析的键。2.一根填充柱的步骤：1.选择固定相（选择固定液、载体、确定配比）;2.涂渍固定液3.装填柱子4.老化柱子。

第三页，共十一页，编辑于2023年，星期三仪器和试剂

仪器;90色谱仪、真空泵、分液漏斗、圆底烧瓶、量筒、烧杯、不锈钢柱2mx¢4mm、玻璃棉、纱布等。试剂：邻苯二甲酸二壬酯、6201红色硅藻土(60~80目)、丙酮。

第四页，共十一页，编辑于2023年，星期三操作步骤

制备一根2mx¢4mm不锈钢螺旋柱

固定液：邻苯二甲酸二壬酯；载体：6201红色硅藻土(60~80目)；配比：5%。

第五页，共十一页，编辑于2023年，星期三清洗和干燥色谱柱管

用20%左右的氢氧化钠温热溶液反复抽洗柱管3~4次，用自来水抽洗，再用10%盐酸抽洗至中性。试漏烘干。将柱子一端堵住，另一端通入气体，用肥皂水检漏。若无漏气，再将柱管用蒸馏水清洗至无氯离子，抽去水后放入烘箱中120°烘干。

第六页，共十一页，编辑于2023年，星期三载体预处理

称取100g60~80目的6201红色硅藻土担体于400ml烧杯中，加入6mol/L的盐酸溶液，浸泡20~30min，然后用水洗至中性，抽滤后转移入蒸发皿中，在105°c烘箱内烘干至4~6h。取出冷却后，用60~80目标准分子筛出去过粗或过细的筛分，并保存在干燥器中备用。

（若为已经预处理过的市售载体，则不必酸洗，只要烘干即可）。

第七页，共十一页，编辑于2023年，星期三确定固定液、担体及溶剂量

①．先计算出柱管的容积在过量20%~40%即为载体的量（Ms）;

柱管容积：Vc=лd²L/4=3.14×0.4²×200/4=25.6(ml);

实际用量:Vs=25.6×(1+0.4)=35.84mL=36mL。

用量筒量取粒度合格的担体36mL，并称出担体的质量（ms）。

②．由担体的量根据配比确定固定液的质量（mL）。

配比即固定液与固定相之比，配比为5%，即：

Ml=Ms×（5/100）

在分析天平上用100mL烧杯称出mlg固定液。

溶剂用量:一般以体积计，为载体体积的0.8~1.2倍即可。

第八页，共十一页，编辑于2023年，星期三涂渍固定液

活化担体-配制溶液-涂渍-除溶剂-干燥

第九页，共十一页，编辑于2023年，星期三装填柱子

在柱子的一端塞上一小段玻璃棉，用一块纱布包扎后，通过三通活塞开关和缓冲瓶接真空泵减压抽气，柱管另一端接一小漏斗，向漏斗中连续加固定相，并用小木棒轻轻敲打柱管，边抽边敲，不要使固定相断流。当固定相不在进入时，取下漏斗，在此端塞入一小段玻璃棉，做好进气端和出气端的标记。

第十页，共十一页，编辑于2023年，星期三老化

将柱子的进口段接到色谱仪的汽化室（原来接漏斗的一端），另一端连接一段细管线后放空，通氮气，缓慢升温至110°c,在此温度下维持4

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