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文档简介
香菇多糖的生产1.香菇多糖的来源与简介2.香菇多糖的提取方法3.香菇多糖的纯化4.香菇多糖的研究与应用5.香菇多糖的展望香菇是我国传统的著名食用菌,在世界上最早人工驯化栽培。香菇营养丰富,味道鲜美,被视为“菇中之王”。其中含有十多种氨基酸,其中有异亮氨酸、赖氨酸、苯丙氨酸、蛋氨酸、苏氨酸、缬氨酸等7种人体必需的氨基酸,还含有维生素B1、B2、PP及矿物盐。定义1:从香菇中分离纯化的一种葡聚糖,是以增强T细胞和巨噬细胞功能为主的免疫增强剂。与化疗或放疗联用可发挥增效减毒作用。定义2:从香菇(Lentinus
edodes)子实体或菌丝中分离的一种多糖以β-1,3葡聚糖为主,有免疫激活和抗肿瘤活性。香菇多糖的定义香菇多糖的成分
香菇多糖是从优质香菇子实体中提取的有效活性成分,香菇多糖中的活性成分是具有分支的β—(1—3)—D—葡聚糖,主链由β—(1—3)—连接的葡萄糖基组成,沿主链随机分布着由β—(1—6)连接的葡萄糖基,呈梳状结构。分子式:(C6H10O5)n,分子量:40~80万。香菇的主要成分是多糖类和不饱和脂肪酸,还含有大量的可转变为维生素D的麦角甾醇和菌甾醇。香菇多糖的理化性质香菇多糖为白色或棕黄色粉末,对光和热稳定,具吸湿性,相对分子质量较大,无甜味和还原性,部分能溶于水,在水中的溶解度随分子质最增大而降低,水溶液为中性,不溶于甲醇、已醇、丙酮等有机溶剂。香菇多糖的生物产品香菇多糖的生物活性1.香菇多糖的抗肿瘤活性
香菇多糖具有抗肿瘤作用,它没有化疗药物的毒副作用。香菇多糖进入抗体后诱导产生一种具有免疫活性的细胞因子,在这些细胞因子的综合作用下,机体免疫系统增强,对肿瘤细胞起防御与杀伤作用。香菇多糖通过激活巨噬细胞,增强抗体依赖性细胞诱导的细胞毒(ADDC),发挥抗肿瘤活性;此外,香菇多糖还能使肿瘤部位的血管扩张和出血,导致肿瘤出血坏死和完全退化2.香菇多糖的免疫调节
香菇多糖的免疫调节作用是其生物活性的重要基础。香菇多糖是典型的T细胞激活剂,促进白细胞介素的产生,还能促进单核巨噬细胞的功能,被认为是一种特殊免疫增强剂。其免疫作用特点在于它能促进淋巴细胞活化因子(LAE)的产生,释放各种辅助性T细胞因子,增强宿主腹腔巨噬细胞吞噬率,恢复或刺激辅助性T细胞的功能。另外,香菇多糖还能促进抗体生成,抑制巨噬细胞释放。3.香菇多糖的抗病毒活性
日本石田博士研究认为,香菇含有一种双链核糖核酸,能刺激人体网状细胞及白血球释放干扰素,而干扰素具有抗病毒作用。香菇菌丝体提取物可抑制细胞的吸附疱疹病毒,从而防治单纯疱疹病毒、巨细胞病毒引起的各类疾病。英国从培养的香菇菌丝体中提取到一种物质,可使因艾滋病病毒感染的T淋巴细胞复原,刺激巨噬细胞,有助于产生抗体治疗艾滋病,且安全无副作用。近年来,有学者发现硫酸化香菇多糖具有抗艾滋病病毒(HIV)的活性,可干扰反转录病毒及其他病毒的吸附和侵入。日本学者报道,从香菇子实体中获得的一种具有良好抗肿瘤作用的葡聚糖的硫酸化衍生物可抑制HIV的活性。4.香菇多糖抗感染作用
据报道,香菇多糖能提高巨噬细胞功能。香菇多糖对Abelson病毒、12型腺病毒及流感病毒感染均有抑制作用,是治疗各种肝炎特别是慢性迁移型肝炎的良好药物。
香菇多糖的提取
香菇多糖主要的提取方法有热水浸提法、稀酸(碱)浸提法、酶解法、超声波提取法、微波提取法和深层发酵培养提取法等。本论文主要介绍热水浸提法。稀酸(碱)提取法:从香菇中提取多糖的提取剂有:酸液、碱液、酶及热水等,提取剂为酸(碱)时,即所谓的酸(碱)提取法。酶解法:酶解法就是指在浸提的过程中加入相应的酶来水解纤维素、果胶、蛋白质分子等,以使多糖从细胞中分离出来微波波提取法:微波提取法是一种新型提取法,由于溶剂及细胞液吸收微波能,微波射线辐射于溶剂并透过细胞壁内部时,细胞内部温度升高压力增大,当压力超过细胞的承受能力时,细胞壁破裂,位于细胞内部的多糖就从细胞中释放出来。超声波提取:香菇多糖的超声波(20KHz一50MHz)提取利用超声波的空化作用分散破坏植物组织,加速植物多糖成分的浸出提取深层发酵提取法:深层液体培养法也叫液体深层发酵法,它是目前发酵工业上常用的一种发酵方法。该方法在发酵罐内完成,使用的培养基是液态的发酵液,在向发酵罐中投入培养液后,经历有灭菌、接种、发酵等过程,在发酵中,根据需要还可以向发酵罐中补充氧气或底物,使微生物的生长代谢达到极致,大大提高了生产效率。目前,香菇多糖主要从香菇子实体中提取。人工培养香菇子实体,生产周期长达半年以上,而深层培养发酵法获得香菇菌丝体和香菇多糖,生产周期将缩短至一周左右。热水浸提法:具体方法:香菇粉
加蒸馏水90℃水浴提取
静置
过滤,滤液浓缩后加入
甲醇,充分混匀,静置
离心,取上清浓缩
加入甲醇,静置
,离心得沉淀加甲醇、乙醚洗涤后,自然风干得粗香菇多糖,称重。
热水浸提时影响因素:浸提时的料液比;温度;时间;pH;醇析时的乙醇添加倍数;提取次数;本文的具体纯化过程:
DEAE-52柱层析首先用蒸馏水进行洗脱,洗脱400mL,然后用磷酸盐缓冲液梯度洗脱,洗脱800mL,流动相A:0.01mol/L的磷酸盐缓冲液(pH5.8),流动相B:0.01mol/L的磷酸盐缓冲液(pH5.8,含1mol/LNacl),梯度洗脱:0~400min,A100%~15%,B0%~85%。控制流速为2mL/min,每10mL
收集一管。测定其中的多糖含量,以490nm处吸光度(A490)为纵坐标,洗脱管数为横坐标得到多糖的洗脱曲线,收集主要吸收峰中间部分,透析,冷冻干燥。粗多糖经DEAE-52层析柱后分离得到Len1、Len2两个组分(见图),Len1在蒸馏水洗脱阶段被洗脱,Len2在磷酸盐缓冲液梯度洗脱阶段被洗脱。从香菇中提取的粗多糖经过DEAE-52层析柱层析柱进一步分离纯化,得到两个香菇多糖组分Len1-A、Len2-A,糖质量分数达到91.15%和92.13%,相对分子质量分别为375×103、718×103,红外光谱显示Len1-A、Len2-A均有多糖的特征吸收峰,且均为A-构型的吡喃糖。香菇多糖的功能研究表明香菇的活性多糖成分β—(1—3)—D—葡聚糖对抑制异源的、同源的、甚至遗传性的肿瘤都有效。经热水提取的香菇多糖可调节人体内有免疫功能的T细胞活性,可降低甲基胆蒽诱发肿瘤的能力。香菇对癌细胞有强烈的抑制作用,对小白鼠肉瘤180的抑制率为97.5%,对艾氏癌的抑制率为80%。香菇还含有双链核糖核酸,能诱导产生干扰素,具有抗病毒能力。香菇多糖的应用1.香菇多糖在医药领域的应用
香菇多糖在治疗胃癌、结肠癌、肺癌等方面具有良好疗效。作为免疫辅助药物,香菇多糖主要用来抑制肿瘤的发生、发展与转移,提高肿瘤对化疗药物的敏感性,改善患者的身体状况,延长其寿命。香菇多糖与化疗剂联合使用,有减毒、增效的作用。化疗药物杀伤肿瘤细胞的选择性较差,对正常细胞也具有杀伤作用,产生毒副作用,造成化疗不能按期按量进行;由于化疗的剂量不足,常引起肿瘤细胞的耐药性,成为难治性癌症,影响疗效。化疗过程中服用香菇多糖,可以增强化疗的疗效,并减轻化疗的毒性作用;同时,化疗过程中患者的白细胞下降的发生率、胃肠毒性、肝功能损害及呕吐的发生明显降低。这充分说明了香菇多糖与化疗并用可以增效、减毒,并增强患者机体的免疫功能。香菇多糖配合其他药物治疗慢性乙型肝炎,可提高乙肝病毒标志物的转阴作用,减少抗病毒药物的副作用。此外,香菇多糖可用于治疗结核杆菌感染。
2.多糖在保健食品领域的应用
香菇多糖是一种特殊的生物活性物质,是一种生物反应增强剂和调节剂,它能增强体液免疫和细胞免疫功能。香菇多糖的抗病毒作用机制可能在于其提高感染细胞免疫力,增强细胞膜的稳定性,抑制细胞病变,促进细胞修复等功能。同时,香菇多糖还具有抗逆转录病毒活性。因此,香菇多糖是一种有待开发的抗流感的保健食品。随着分子生物学的发展和香菇多糖研究的不断深入,科学家们已经开始在基因水平探讨香菇多糖生物活性的机制。多糖生物活性与结构间的关系的研究还落后于核酸与蛋
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