热激蛋白基因克隆

热激蛋白基因克隆第一页，共十四页，编辑于2023年，星期三项目的结构和主要内容

第一部分：立项依据第二部分：实验条件第三部分：研究内容第四部分：研究方法第五部分：特色与创新之处第六部分：年度研究计划及预期成果第二页，共十四页，编辑于2023年，星期三第一部分立项依据

1研究意义

高温常常限制作物、蔬菜、食用菌等的生长和推广，获得温度耐受性强的转基因新品种，解除温度限制，将大大降低推广栽培的成本。本研究预期目标若能实现，对建立食用菌基因工程研究平台具有较好的现实意义，我们将为我国食用菌行业增添一个新的珍稀品种，为甘肃食用菌产业的发展培育出一个新的增长点和新的支撑点，产生显著经济效益。第三页，共十四页，编辑于2023年，星期三

2研究现状研究发现，许多细胞的耐热能力取决于细胞内热激蛋白70（HSP70）的合成，HSP70具有热保护作用。目前，人们对植物和动物体内热激蛋白已有较深刻的认识，而关于微生物热激蛋白却鲜有报道，关于荷叶离褶伞的热激蛋白尚未见报道。本研究采用RT-PCR技术克隆荷叶离褶伞HSP70全长基因，构建HSP70全长基因的gpd启动子驱动的真菌表达载体。

第四页，共十四页，编辑于2023年，星期三第二部分实验条件

已通过响应面法优化了荷叶离褶伞的DNA提取，获得了高质量的DNA。在实验室已培育出高产菌株，实验中用到的菌株、载体由梁倩倩老师保存，分子生物学实验室的实验仪器能够满足实验要求，指导老师梁倩倩多年从事基因克隆方面的分子研究，可以给予很好的指导。第五页，共十四页，编辑于2023年，星期三第三部分研究内容一研究目标

1克隆姬菇和荷叶离褶的HmHSP70基因

2构建HmHSP70克隆载体；注册GENEBANK；

3省级以上期刊发表研究论文1篇。第六页，共十四页，编辑于2023年，星期三二研究内容

1提取姬菇、荷叶离褶伞的DNA、RNA2采用PCR或RT-PCR技术克隆HmHSP70基因；

3HmHSP70克隆载体；

4测序及序列分析；

5注册GENEBANK。第七页，共十四页，编辑于2023年，星期三三拟解决的关键问题

荷叶离褶伞为祁连山低温型优良食用菌，由于甘肃河西地区日夜温差大，夏天高温可达35℃，本项目预期指标的实现，可望获得温度耐受性强的转基因荷叶离褶伞新品种，解除温度对荷叶离褶伞栽培及推广的限制，能在很大程度上降低推广栽培的成本。第八页，共十四页，编辑于2023年，星期三四实验材料

姬菇荷叶离褶伞

第九页，共十四页，编辑于2023年，星期三第四部分研究方法研究路线如下：

姬菇、荷叶离褶伞DNA提取RNA提取引物设计合成PCR扩增HSP70基因片段克隆载体扩建测序表达载体构建姬菇、荷叶离褶伞DNA提取RNA提取引物设计合成姬菇、荷叶离褶伞DNA提取RNA提取引物设计合成姬菇、荷叶离褶伞DNA提取RNA提取引物设计合成姬菇、荷叶离褶伞DNA提取RNA提取引物设计合成姬菇、荷叶离褶伞DNA提取RNA提取引物设计合成姬菇、荷叶离褶伞DNA提取RNA提取引物设计合成姬菇、荷叶离褶伞DNA提取RNA提取引物设计合成姬菇、荷叶离褶伞DNA提取RNA提取PCR扩增HSP70基因片段引物设计合成姬菇、荷叶离褶伞DNA提取RNA提取PCR扩增HSP70基因片段引物设计合成姬菇、荷叶离褶伞DNA提取RNA提取克隆载体扩建PCR扩增HSP70基因片段引物设计合成姬菇、荷叶离褶伞DNA提取RNA提取克隆载体扩建PCR扩增HSP70基因片段引物设计合成姬菇、荷叶离褶伞DNA提取RNA提取测序克隆载体扩建PCR扩增HSP70基因片段引物设计合成姬菇、荷叶离褶伞DNA提取RNA提取第十页，共十四页，编辑于2023年，星期三第五部分特色与创新之处

1目前以基因工程技术培育食用菌新品种的研究工作不是很多，关于荷叶离褶伞的这方面工作国内外尚属空白。

2本研究首次克隆荷叶离褶伞的HmHSP70基因，构建载体后，基因还可用于转化其他食用菌以提高品质，应用范围广泛。第十一页，共十四页，编辑于2023年，星期三第五部分年度研究计划与预期成果一年度研究计划

第一阶段（12.12-13.1）阅读文献资料，设计试验方案，准备试验材料；第二阶段（13.1-13.3）提取DNA、RNA；第三阶段（13.3-13.6）PCR扩増目标片段、构建克隆载体；第四阶段（13.6-13.12）测序、构建表达载体，发表文章；第五阶段（13.12）撰写及修改论文准备答辩。第十二页，共十四页，编辑于2023年，星期三二预期研究成果

获得姬菇、荷叶离褶伞HmHSP70基因，