猪圆环病毒2型疫苗研究进展-课件

猪圆环病毒2型疫苗研究进展1ppt课件目录圆环流行情况介绍A存在问题及展望C国内、外圆环疫苗情况B2ppt课件猪圆环病毒病是危害全球养猪业的重大经济影响性疾病，也是我国养猪业的三大疾病之一，与猪瘟和猪蓝耳病并称我国养猪业的三座大山。3ppt课件PMWSPCVAD4ppt课件5ppt课件6ppt课件

目前，对于猪2型圆环病毒（ＰＣＶ２）造成的相关疾病尚无有效的治疗措施，而且圆环病毒对各种消毒剂都有很强的抵抗性，猪场难将其净化，预防该病的首要方案是采用疫苗进行预防接种。7ppt课件PCV2属于圆环病毒科圆环病毒属成员，是一种共价闭合、单股环状负链DNA病毒，呈二十面体对称，无囊膜。PCV2病毒粒子直径为17nm，基因组大小约1.7kb，是目前发现的最小的动物病毒。PCV2的基因组结构存在11个开放阅读框(ORFs)，即ORF1-ORF11，ORFs之间大小相差悬殊，所编码的蛋白大小在2～36ku。ORF1与ORF2是PCV2最大的２个开放阅读框，分别编码与病毒复制相关的蛋白Ｒep和Ｒep’以及病毒的结构蛋白Ｃap。8ppt课件9ppt课件10ppt课件Ｃap蛋白作为病毒的主要结构蛋白，构成病毒的核衣壳，是PCV2的主要免疫保护性抗原，能诱导动物机体产生特异性免疫应答，是研制PCV2基因工程亚单位疫苗的理想靶抗原。ORF3为病毒复制的非必需基因，其编码的蛋白可诱导PCV2感染的细胞发生凋亡。许多学者在PCV2基因组结构与功能方面开展了大量研究，除ORF1,ORF2与ORF3的功能研究较为透彻外，其他ORFs的功能尚不十分清楚。11ppt课件目前，国际上统一将PCV2分为PCV2a、PCV2b、PCV2c三个基因亚型，其中PCV2a和PCV2b是目前存在的主要基因型，PCV2a仅分离自无PMWS感染猪场，PCV2b多分离自PMWS发生的猪群，PCV2c亚型毒株仅在20世纪80年代于丹麦分离，在致病性方面未见报道。PCV2在世界范围内广泛分布并且在猪群中存在至少有50多年，血清学和病原学调查己证实全世界范围内许多国家和地区的猪群均存在PCV2感染，几乎100%的商品化养猪场感染过PCV2，严重影响世界养猪业的发展。12ppt课件目前对该病毒的防控主要依靠疫苗，灭活疫苗、亚单位疫苗和嵌合病毒灭活疫苗已投入使用，核酸疫苗、活载体疫苗和标记疫苗等新型疫苗已成为PCV2疫苗研究的热点。13ppt课件PCV2国外流行情况

2003

2008OlveraPCV2aPCV2b14ppt课件Dupont等对GenBank中1997年至2006年间上传的218个PCV2全基因组进行遗传进化分析，结果发现2003年前猪群中主要流行PCV2a,之后世界范围内猪群PCV2感染存在转型趋势，主要以PCV2b基因型流行为主，同时PCVAD临床表现较2003年之前更为严重，但是这些国家不包括韩国、日本和澳大利亚。15ppt课件基于以上研究，TanjaOprissnig等分析了1996-2013年间分离自美国和加拿大的750份样品，1996-2004年间分离到的毒株均属于PCV2a基因型，2005年出现新基因型PCV2b,2006-2013年的流行株为PCV2b基因型。16ppt课件2012年５月，美国在一PCV2免疫失败猪场首次分离到毒力均强于PCV2a和PCV2b的突变毒株(Mutantporcinecircovirustype2b,ｍPCV2b），由于美国商品化疫苗基于PCV2a基因型，ｍPCV2b毒株的发现让人们更加关注当前PCV2a型疫苗的免疫效果。17ppt课件北美地区在2004年前仅流行PCV2a基因型,2005年爆发严重的PCVAD,PCV2b基因型替代PCV2a型在北美地区商业化猪场迅速蔓延，引起高发病率和死亡率。随后在中国、泰国、韩国、丹麦、瑞士也相继报道了PCV2b基因型的出现，并在一段时间内与PCV2a基因型循环流行。18ppt课件2007年Chae等在韩国分离到36株PCV2(PCVAD发病猪场分离到29株，PCVAD未发病猪场９株)，29株均属于PCV2b，PCVAD未发病猪场中有4株属于PCV2b。2006-2007年间，日本存在PCV2a与PCV2b两种亚型，但是以PCV2b为主要流行基因型。19ppt课件目前，PCV2b基因型替代PCV2a型成为优势基因型，有关PCV2流行毒株遗传变异的报道也逐渐增多，在遗传变异及免疫压力下可能出现其它形式的突变毒株。2008年Ｈess等报道了PCV2a与PCV2b重组毒株，随后有关不同PCV2b毒株之间以及PCV1与PCV2a之间毒株发生基因重组相继报道。同时进一步研究发现，重组毒有很高的体外繁殖能力，且抗原性发生改变，这些改变对致病性的影响有待进一步研究。20ppt课件PCV2基因型的漂移最早起源于欧洲，发生于2003年或更早时间，北美洲和亚洲约发生于2005年，大洋洲发生这种优势流行株转变约在2006年，时间上均比欧洲PCV2基因型的改变有轻微的推迟，潜在原因还未得到证实，可能与进口处于该病潜伏期的动物有关。基因型发生漂移的同时伴随着严重的圆环病毒病的爆发，虽然现有数据不能直接证明这些爆发是由PCV2b毒株导致，但是时间和地点上的巧合推测PCV2主导型的变化与PCVAD的发生存在很大关系，而基因型转变的原因与机制目前尚不清楚。相对于PCV2遗传变异，PCV2自然重组变异的报道比较少，其重组与病毒致病性和遗传进化的关系尚不明确。21ppt课件我国PCV2流行情况Ｗang等从全国分离到49株PCV2，其中2001年分离到３株均属于PCV2a型，2002-2006年分离到34株PCV2中PCV2b有18株，2007-2008年间分离到12株均为PCV2b型。Li对2001-2009年间分离自我国东部的136株PCV2进行遗传进化分析发现，PCV2b有127株，PCV2a仅有9株，其中8株PCV2a分离自2001-2005年间，从2005年以后，几乎所有的分离株都是PCV2b型，PCV2a型越来越少，中国东部地区PCV2流行毒株存在由PCV2a向PCV2b漂移的现象。22ppt课件王佳慧利用PCR方法对中国16个省市75个规模化猪场2010-2011年间的688份样品进行检测，被检猪场PCV2阳性率为58.67%,共分离到53株PCV2,与GenBank下载的192株中国分离株进行遗传变异分析，结果发现，53株PCV2中PCV2b基因型有50株,且2001年前我国优势PCV2基因型为PCV2a型,2002年之后流行的PCV2基因型转变为PCV2b型,但同期仍有PCV2a型毒株存在。23ppt课件赵英杰对2011-2012年间采集自我国18个省市932份样品分析发现，2011-2012年我国主要养猪地区规模化猪场PCV2的感染率高达67.8%，并选取具有代表性的74株PCV2进行全基因组测序，其中56株PCV2b基因型。同一时期，Wei等自我国南方14个商业化猪场分离到66株PCV2，其中92.42%的毒株属于PCV2b基因型。流行病学调查显示，我国优势流行基因型为PCV2b。24ppt课件目前，国外有很多关于PCV2流行毒株的变异的报道，但是我国对此研究比较少。2011年Cai分离到了5株PCV2a和PCV2b基因型间重组毒，重组位点均位于ORF2区段内。Guo对2004-2008年采集自我国10个省份疑似PCV2感染的病料中分离到19株PCV2，有4株病毒ORF2编码基因发生突变，同时选取了2株突变株进行致病性实验，发现突变株所造成的病理损伤、病毒血症、淋巴组织等免疫器官损伤明显严重，新出现的突变株如何增强毒力的分子机制还需进一步研究。25ppt课件PCV2在我国猪群中已经广泛存在，主要有PCV2a和PCV2b两种基因型，自2005以来主要以PCV2b基因型流行为主，同时出现mPCV2b毒株，未发现PCV2c基因型。26ppt课件国外上市疫苗有灭活疫苗、Cap亚单位疫苗和PCV1-2嵌合病毒灭活疫苗,均基于PCV2a基因型，虽然PCV2a疫苗能降低猪临床PCVAD,减少PCV2a的流行,但是不会显著减少PCV2b在猪群中的传播。日本研究者发现,PCV2疫苗的免疫效果与PCV2基因型有很大关系,流行毒株与疫苗株遗传关系越近，疫苗产生的免疫保护效力越好。为了进一步证实这一发现，TanjaOpriessniga用PCV2a型疫苗和PCV2b型疫苗分别免疫猪群，PCV2进行攻毒，检测结果发现，PCV2b型疫苗可以抵抗PCV2b、PCV2a/PCV2b共感染提供更好的免疫保护。27ppt课件国内上市疫苗属于PCV2b型灭活疫苗，虽然与流行毒株属于同一基因型，但是传统灭活疫苗抗原制备上病毒滴度低，生产周期长，且诱导的免疫应答主要为体液免疫，忽视了细胞免疫应答在PCV2免疫保护中的作用。虽然商品化疫苗的应用为有效防控PCV2感染发挥了重要作用，但是疫苗株与流行株分属不同基因型，且传统疫苗在免疫保护效力和生产制备上存在缺陷。随着基因工程技术的发展，基于PCV2b型的活载体疫苗、核酸疫苗及标记疫苗等新型疫苗也展现出良好的研究前景。28ppt课件PCV2灭活疫苗PCV2灭活疫苗是将PCV2感染的细胞培养物通过理化方法处理，使其丧失感染性但仍保持良好的免疫原性，然后加入佐剂乳化制备而成。该类疫苗具有使用安全，易于保存，性能稳定等优点。29ppt课件30ppt课件31ppt课件32ppt课件33ppt课件34ppt课件国外学者较早投入PCV2灭活疫苗的研究工作中，法国梅里亚公司于2006年成功研制出通过欧盟认证的首例PCV2全病毒灭活疫苗Circovac®。Opriessnig等研究发现，用Circovac®免疫妊娠母猪和仔猪均能降低仔猪PCV2病毒血症和各组织器官中病毒载量，促进新生仔猪的生长，其原因可能是由于在给妊娠母猪注射疫苗后，诱导机体产生了抗PCV2的特异性抗体，仔猪通过吮吸初乳获得了抵抗PCV2感染的被动免疫力。35ppt课件Kurmann用该疫苗免疫PCV2亚临床感染的母猪，共分３次免疫，首免和二免分别在妊娠前４周和２周进行，三免在妊娠期第12周进行，结果发现免疫母猪的血清抗体水平比未免疫母猪的血清抗体水平提高了３～９倍，新生仔猪的血清抗体水平也随之增加，并能提高仔猪平均日增重率，缩短仔猪育肥期。由此可见，Circovac®具备优良的免疫效果，能使免疫母猪和免疫仔猪获得稳定的群体免疫力，保护其免受PCV2感染。36ppt课件在国内，中国农业科学院哈尔滨兽医研究所刘长明研究员成功地研制出中国首例PCV2灭活疫苗(LG株)，该疫苗具有抗原含量高、免疫原性强、安全性好、抗母源抗体干扰及免疫效果好等特点，临床试验结果表明，疫苗接种猪群与空白对照组对比，主动免疫仔猪发病率下降15.1%，死淘率下降3.6%；被动免疫母猪结果显示，出生时死胎率下降2.3%，初生仔猪成活率提高7.6%，断奶时成活率提高7.5%。该疫苗的使用对我国PCV2流行有效地进行防控，给养猪业带来巨大的经济效益。此外，南京农业大学姜平教授研制的PCV2灭活疫苗（SH株）也已注册上市，目前正在全国大部分地区推广使用，展现出广阔的应用前景。这２种疫苗的成功研制和应用对防控我国PCV2感染发挥了重大作用。37ppt课件38ppt课件39ppt课件40ppt课件41ppt课件42ppt课件43ppt课件44ppt课件45ppt课件PCV2弱毒疫苗弱毒疫苗又称为减毒活疫苗，是将病原体的致病力通过自然筛选或人工致弱等方式减弱制备而成。尽管该类疫苗的毒力已经致弱，但仍然保持着原有的免疫原性，并能在动物体内繁殖，刺激动物机体免疫系统，从而诱导产生坚实的免疫力和持久的保护力。46ppt课件国内外对PCV2弱毒疫苗研究的报道较少，目前还没有商品化的PCV2弱毒疫苗，主要原因与病毒毒力易返强、致弱毒株毒力评价困难等因素有关。Fenaux等将PCV2分离株在PK15细胞上连续传代培养，结果发现第120代病毒(VP120)滴度约为第１代病毒(VP1)滴度的10倍，VP120感染的仔猪出现病毒血症的发生率明显低于VP1感染的仔猪，并且感染仔猪的血清中PCV2DNA拷贝数更低，眼观和病理组织学变化也更轻，表明体外传代可促进PCV2在细胞内的繁殖能力，并能减弱其致病力，这为研制PCV2弱毒疫苗提供了科学依据。由于单一PCV2感染对猪的致病性并不十分典型，病毒在体内持续存在，其毒力是否返强等关键问题没有阐明，试验数据有限，这种方法得到的毒力减弱毒株作为疫苗离应用还有很长的路要走。47ppt课件PCV2亚单位疫苗Cap蛋白是PCV2的主要结构蛋白和免疫保护性抗原，能刺激动物机体产生针对PCV2的特异性免疫应答，是研制PCV2基因工程亚单位疫苗的理想靶抗原。常用于PCV2亚单位疫苗生产的表达系统主要是昆虫细胞／杆状病毒表达系统。国外已有3种PCV2亚单位疫苗注册上市，分别是勃林格公司研制的IngelvacCircoFLEX®，英特威公司研制的Circumvent®以及先灵葆雅公司研制的Porcilis®PCV，这3种疫苗均为杆状病毒表达的Cap蛋白亚单位疫苗。48ppt课件Opriessnig等比较了单剂量的IngelvacCircoFLEX®和两剂量的Circumvent®对３周龄以上仔猪的免疫保护效力，结果发现在用PCV2、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)及猪流感病毒(SIV)感染免疫仔猪后，无论以单剂量还是两剂量疫苗免疫，均能明显降低病毒血症的发生率，减轻PCV2、PRRSV及SIV混合感染对淋巴组织的损伤。49ppt课件Fort等研究了单剂量Porcilis®

PCV对不同地区、不同基因型PCV2感染的免疫保护效果，结果发现该疫苗对来自不同地区、不同基因型的PCV2感染具有良好的免疫保护力，既能诱导免疫仔猪产生针对PCV2的特异性体液免疫应答，又能诱导产生细胞免疫应答，能显著减轻病毒血症，减少鼻腔和排泄物中PCV2的排出量，降低各组织器官中PCV2的病毒载量。50ppt课件51ppt课件52ppt课件青岛易邦生物工程有限公司常务副总经理范根成博士介绍了易邦“易圆净”拥有的几个突出特点：1）率先建立猪圆环疫苗评价体系，引领行业标准；2）表达病毒样颗粒抗原（VLPS/CAP），抗原性好，能高效诱导机体产生良好体液免疫与细胞免疫，免疫后15-20天100%转阳，持续时间可达5个月；3）水性佐剂+免疫增强剂，注射方便，无副反应；4）100多万头猪临场使用表明“易圆净”安全、高效、无副作用，免疫猪各项生产性能良好。只需一针，保护至出栏；5）2-4周龄猪免疫，每头2ml；管理良好猪场每头1-1.5ml；在未免疫或免疫失败猪群，在发病早期可以紧急接种，每头2ml。53ppt课件54ppt课件重组PCV2活载体疫苗PCV2病毒活载体疫苗腺病毒活载体疫苗伪狂犬病毒活载体疫苗假型杆状载体疫苗猪繁殖与呼吸综合症病毒载体疫苗噬菌体载体疫苗PCV2细菌活载体疫苗乳酸菌口服活载体疫苗博德特氏菌载体疫苗55ppt课件腺病毒活载体疫苗腺病毒作为基因转移载体具有诸多优势：宿主范围广，插入外源基因能力强，能在许多哺乳动物细胞和组织中表达重组蛋白，表达外源基因效率高，能对表达的外源蛋白进行精细的修饰。基于以上优势，腺病毒载体现已广泛应用于基因工程疫苗研发，基因治疗以及肿瘤治疗等领域。56ppt课件Wang等成功构建了表达PCV2ORF2基因的重组腺病毒rAD-Cap，然后通过动物免疫保护试验评价rAD-Cap对仔猪的免疫保护效果，结果发现，在首免后３７ｄ即能检测到抗PCV2的高水平ELISA抗体和病毒中和抗体，免疫仔猪的相对日增体质量率显著高于攻毒对照组，而组织损伤程度和病毒血症的发生率却明显低于攻毒对照组。57ppt课件Liu等成功构建了融合表达PCV2ORF2基因与猪IFN-γ基因的重组腺病毒PCV2ORF2-IFN-γ，并证实PCV2ORF2-IFN-γ在小鼠体内诱导产生PCV2特异性抗体的能力比单独表达Cap蛋白的PCV2ORF2强，表明猪IFN-γ作为细胞因子佐剂可以显著增强Cap蛋白的免疫原性。58ppt课件由此可见，表达Cap蛋白的重组腺病毒能诱导动物机体产生针对PCV2的特异性免疫应答，保护动物抵抗PCV2感染，是一种具有潜在应用价值的PCV2候选疫苗。然而，腺病毒作为表达载体也存在些许不足，如腺病毒载体由于不能整合到靶细胞的基因组DNA中，因此不能形成外源基因的稳定表达；腺病毒的靶向性差；腺病毒颗粒可被肝脏的Kupffer细胞非特异性吸收，表现出很强的首过效应等。因此，只有对腺病毒载体不断进行改进和完善，才能充分发挥其潜在的应用价值。59ppt课件伪狂犬病毒活载体疫苗伪狂犬病毒基因组是线状双链DNA分子，大小约150ｋｂ，含有许多病毒非必需基因，可以插入和表达多种病原体的免疫保护性抗原基因。伪狂犬病毒较稳定，免疫原性持久；缺失毒力基因的伪狂犬病毒安全性好，能诱导动物机体产生持续的体液免疫与细胞免疫应答，因此，该病毒已逐渐发展成为哺乳动物细胞系统的高效表达载体之一，广泛应用于基因工程药物和基因工程疫苗的开发与研制等领域。60ppt课件Ju等成功构建了表达PCV2ORF1-ORF2融合蛋白的重组伪狂犬病毒PRV-PCV2，Westernblot试验证实ORF1-ORF2融合蛋白在重组病毒中正确表达，用PRV-PCV2免疫小鼠后，能在小鼠体内诱导产生抗PRV-PCV2的特异性抗体，保护小鼠抵抗PRVEa强毒株攻击；而且，仔猪免疫试验也证实PRV-PCV2能诱导仔猪产生针对PRV和PCV2的特异性免疫应答。61ppt课件Song等将PCV2ORF2基因插入ｐIECMV质粒中，并同伪狂犬病毒Tk-/gE-/LacZ+基因组共转染IBRS-2细胞，通过同源重组成功构建了Tk-/gE-/ORF2重组病毒，Westernblot和间接免疫荧光试验证实PCV2ORF2基因在重组病毒中正确表达。４周龄仔猪接种Tk-/gE-/ORF2后，PRV-ELISA、PRV－中和试验、ORF2-ELISA和ORF2特异性淋巴细胞增殖试验证实重组病毒具有良好的免疫原性，能产生针对PRV和PCV2的特异性免疫应答。由此可见，重组伪狂犬病病毒能诱导动物机体产生针对PRV和PCV2的特异性免疫应答，保护动物抵抗PRV和PCV2感染，与重组腺病毒对比，该重组伪狂犬病毒能在猪体内很好地繁殖，因此，在PRV-PCV2二联活载体疫苗研制方面具有巨大的潜力和应用价值。62ppt课件假型杆状病毒载体疫苗Ｆan等将水疱性口炎病毒糖蛋白(VSV-G)基因克隆至杆状病毒转移载体pFastBac１多角体蛋白基因启动子下游，并在VSV-G表达元件下游引入巨细胞病毒早期（CMV-1E）启动子和BGHpoly(A),成功构建了一种类似杆状病毒的假型杆状病毒BV-G-CMV，但其能感染哺乳动物细胞，并能在病毒粒子囊膜展示VSV-G。63ppt课件随后，Fan等将PCV2ORF2基因定向插入BV-G-CMVCMV-1E启动子下游，转染Sf9昆虫细胞后获得了重组假型杆状病毒BV-G-ORF2，Westernblot与流式细胞术检测结果显示BV-G-ORF2能在PK15细胞中高效表达Cap蛋白。64ppt课件以1×108或1×109PFU剂量的BV-G-ORF2免疫小鼠，结果发现能诱导小鼠产生抗PCV2特异性ELISA抗体、中和抗体及细胞免疫应答，而且即使以1×108PFU剂量免疫，BV-G-ORF2也展现出比PCV2DNA疫苗更强的免疫原性。BV-G-CMV作为基因转移载体具有操作简单、病毒易培养、无毒性、免疫原性强及宿主体内不存在抗杆状病毒的抗体等优点，因此，假型杆状病毒可用于新型PCV2活载体疫苗的研究。65ppt课件猪繁殖与呼吸综合征病毒载体疫苗Pei等在PRRSVcDNA克隆的ORFs1b与2a之间插入２个限制性酶切位点和１个转录调控序列TRS6，将其改造成一个通用的病毒载体，然后将PCV2ORF2基因插入２个限制性酶切位点之间，由TRS6启动转录，构建了表达Cap蛋白的重组质粒，用重组质粒转染Marc-145细胞成功获得了P129-PCV重组PRRSV。66ppt课件动物免疫试验证实：免疫５周后，在P129-PCV免疫的猪体内能诱导产生抗PCV2特异性抗体应答，表明重组PRRSV能在体内和体外成功表达Cap蛋白，并诱发特异性免疫应答，可作为一种表达载体用于PCV2及其他猪病活载体疫苗的研究。然而，该重组PRRSV体外传代是否稳定、目的基因经传代是否会丢失等问题有待进一步的试验数据加以证实。67ppt课件

噬菌体载体疫苗研究表明，噬菌体表面展示技术现已应用于疫苗的开发与研究。将病原体的保护性抗原与噬菌体的外壳蛋白以融合蛋白形式展示于噬菌体的表面，以此来构建表达外源抗原的重组噬菌体颗粒，即噬菌体载体疫苗。噬菌体载体疫苗因安全，稳定，不需要佐剂及易于规模化生产等特点而日益受到研究人员的重视。68ppt课件Gamage等将PCV2Cap蛋白的优势表位区克隆至λ噬菌体展示颗粒(LDP)头部蛋白(D)基因下游形成融合基因，成功构建了表达融合蛋白D-CAP的重组λ噬菌体展示载体LDP-D-CAP，ELISA和Westernblot检测结果显示D-CAP在LDP的表面正确表达，用LDP-D-CAP免疫仔猪后，没有出现任何不良反应，首免后即可诱导产生抗PCV2的特异性免疫反应，不仅能诱导产生PCV2中和抗体，而且能诱导产生细胞免疫应答，表明PCV2噬菌体载体疫苗有望作为一种新型的活载体疫苗用于防控PCV2感染。69ppt课件

乳酸菌口服活载体疫苗乳酸菌在食品工业中具有广泛的应用，是一类安全的口服细菌，可以作为活疫苗载体表达外源抗原，因而日益受到研究者的重视。Wang等将缺失核定位信号区的PCV2ORF2基因克隆入大肠杆菌／乳酸链球菌穿梭载体pSEC:LEISS，构建了重组穿梭载体pSEC:LEISS-dCap,电转化乳酸菌后获得了重组乳酸菌NZ9000/pSEC:LEISS-dCap,Westernblot试验证实Cap蛋白在乳酸链球菌中正确表达，在给小鼠口服重组乳酸链球菌培养物后可检测到高水平的PCV2特异性抗体，表明乳酸链球菌作为抗原转移载体可用于PCV2口服活疫苗的研发，具有开发潜力和应用前景。70ppt课件博德特氏菌载体疫苗研究证实，支气管炎博德特氏菌具有很强的感染性，这使得其很容易定植于呼吸道黏膜，因此，应用致弱的支气管炎博德特氏菌作为活载体将异种抗原递呈至哺乳动物乃至人的呼吸道是可以实现的。Kim等将PCV2ORF2基因定向克隆入aroA突变的支气管炎博德特氏菌，电转化后获得了表达Cap蛋白的重组博德特氏菌(BBS-MCP)，然后用活BBS-MCP免疫小鼠和猪，ELISA检测结果显示在血清中存在高水平的抗Cap蛋白特异性IgG抗体，用PCV2感染后，在活BBS-MCP免疫的猪淋巴结中检测不到PCV2DNA，结果表明BBS-MCP免疫能有效保护猪群抵抗PCV2感染，这一发现为PCV2减毒活疫苗的研发提供了新的思路。71ppt课件此外，酵母表达系统作为一种真核表达系统，因其操作简单、细胞生长快速、能大规模发酵生产，而且能对重组蛋白进行相对正确的折叠和翻译后加工修饰等优点，现已广泛应用于外源蛋白的商品化疫苗研发。Bucarey等将PCV2Cap蛋白基因密码子优化后克隆入大肠杆菌／酿酒酵母穿梭载体(pYES2)，然后转化宿主菌INVSc1，Westernblot试验证实Cap蛋白在酵母细胞中正确表达，电镜下观察到Cap蛋白表达后可以自我组装形成类似PCV2的病毒样颗粒，给小鼠口服含Cap蛋白的酵母提取物后，在血清中可检测到抗Cap蛋白的特异性抗体，表明酿酒酵母作为一种非常有吸引力的表达载体可用于PCV2口服活疫苗的研制。72ppt课件

PCV2核酸疫苗核酸疫苗作为一种新型的基因工程疫苗，因免疫效果好，免疫应答持久，制备简便，稳定性强，安全性好，成本低廉，适于规模化生产等优点，现已成为疫苗学领域研究的热点。研究证实，含PCV2ORF2基因的质粒载体（ｐORF2）能在小鼠体内诱导PCV2特异性抗体阳转，能诱导仔猪产生抗PCV2感染的保护性免疫应答，而且ｐORF2免疫的小鼠诱导产生PCV2中和抗体的能力比单独用Cap蛋白免疫的小鼠强，攻毒后免疫组小鼠临床症状和病理变化明显减轻，PCV2病毒载量也显著下降。73ppt课件Fenaux等用PCV1-2嵌合病毒DNA疫苗免疫仔猪，免疫后42d，检测到大部分仔猪PCV2抗体阳转，攻毒后21d，对照组仔猪出现病毒血症，淋巴结肿大，淋巴组织衰竭等症状，而免疫组仔猪未出现病毒血症，淋巴组织损伤程度较轻，淋巴组织的病毒载量显著降低，表明PCV1-2嵌合病毒DNA疫苗可以有效预防PCV2感染。74ppt课件Ａｒａｖｉｎｄａｒａｍ等分别构建了含PCV2ORF-1、ORF-2、ORF-3的重组质粒p3224-ORF-1、-2和-3，3种重组质粒单独或联合免疫小鼠２周后，用相应的MVA-ORF-1、-2和-3以单独或联合形式加强免疫，结果发现ORF-2/-3与ORF-1/-2/-3这２种组合免疫诱导产生的IFN-γ、TNF-α、GM-CSF以及PCV2抗体水平均较其它免疫组高，攻毒后这２种组合免疫组PCV2病毒载量显著减少，小鼠的肺部病变也明显减轻。尽管核酸疫苗具有诸多优点，但外源基因在体内的表达调控及其在体细胞中的转移可能会产生意外的免疫病理反应等瓶颈问题使得目前绝大部分核酸疫苗的研究还仅局限于实验室。75ppt课件PCV1-2嵌合疫苗嵌合疫苗是应用基因工程手段来构建的一类新型疫苗，美国富道公司已经研发出商品化的PCV1-2嵌合疫苗Suvaxyn®PCV2OneDoseTM，其原理是用PCV2ORF2基因置换无致病性的PCV1ORF2基因，构建PCV1-2嵌合病毒，然后将其灭活制备而成，该类疫苗现已在美国、加拿大、墨西哥、丹麦、菲律宾及新西兰等国申请注册。2011年，美国辉瑞公司与富道公司合并后，将Suvaxyn®PCV2OneDoseTM更名为FosteraTMPCV。76ppt课件Ｓｅｇａｌéｓ等对Suvaxyn-PCV2的免疫保护效力进行了研究，结果发现免疫猪群的临床症状大大减轻，淋巴组织和血液中PCV2的病毒载量、保育猪和育肥猪的死亡率以及PMWS的发生率均显著降低，表明Suvaxyn-PCV2能有效诱导动物机体产生PCV2中和抗体，保护猪群抵抗PCV2感染，并降低PMWS的发生率，这与其他学者的研究结果一致。77ppt课件众所周知，如果仔猪体内存在母源抗体，将会干扰疫苗的免疫效能，为验证母源抗体的存在对Suvaxyn®PCV2OneDoseTM免疫效能的影响，Ｏｐｒｉｅｓｓｎｉｇ等选择有母源抗体存在的仔猪作为实验动物，在Suvaxyn®PCV2OneDoseTM免疫后28d进行PCV2感染试验，结果发现，与对照组对比，免疫组仔猪血清中PCV2病毒载量显著降低，淋巴组织损伤程度也明显减轻，表明即使存在母源抗体，Suvaxyn®PCV2OneDoseTM仍能显著提高仔猪对PCV2感染的免疫力。78ppt课件79ppt课件

PCV2标记疫苗PCV2标记疫苗是指应用DNA重组技术将分子标记插入PCV2基因组中而研制的一类新型的重组疫苗，该类疫苗毒株可与野毒株相区别。80ppt课件Beach等将GLU或KT3标签定向克隆至PCV1-2嵌合病毒Cap蛋白