动物疫病实验室检验采样方法

动物疫病实验室检验采样方法ny/t541—2002前言动物病料样品的采集是动物疾病诊断、流行病学调查或免疫监测所不可缺少的重要步骤，在各国的兽医学标准中都把这一部分纳入第一重要内容，广泛应用于动物疾病流行病学调查、动物检疫和科研教学。世界动物卫生组织[worldorganizationforanimalhealth（英），officeintentionaldesepizootic（法），oie]推荐的诊断方法中，也将该部分内容列为第一部分内容。本标准是依据世界动物卫生组织（oie）《诊断试验和疫苗标准手册》（2000版）（manualofstandardsfordiagnostictestsandvaccines，2000）第1·1.1章"samplingmethods"的技术要求编写的。本标准与该章的非原则性差异在于：——本标准结合本国实践经验对操作程序和条件作了更具体的陈述和规定；——本标准根据gb/t1.1-2000的规定和汉语习惯将该章的陈述性文本改为规范性标准文件。本标准的附录a为规范性附录。本标准由农业部畜牧兽医局提出。本标准由全国动物检疫标准化技术委员会归口。本标准起草单位：农业部动物检疫所。本标准主要起草人。吴延功、杜元钊、朱万光、刘佩兰、仰惠芬。1范围本标准规定了动物疫病诊断实验室的样品采集方法。本标准适用于病因（原）学、病理组织学、血清学、免疫学等实验室检验所需样品的采集。2样品采集的一般原则和采集前的准备2.1样品采集所遵循的一般原则2.1.1凡发现患畜（包括马、牛、羊及猪等）有急性死亡时，如怀疑是炭疽，则不可随意解剖，应采取患畜的血液，万不得已时局部解剖作脾脏触片的显微镜检查。只有在确定不是炭疽后，方可进行剖检。2.1.2采取病料的种类，根据不同的疾病或检验目的，采其相应的脏器、内容物、分泌物、排泄物或其他材料；进行流行病学调查、抗体检测、动物群体健康评估或环境卫生检测时，样品的数量应满足统计学的要求。采样时应小心谨慎，以免对动物产生不必要的剌激或损害和对采样者构成威胁。在无法估计病因时，可进行全面的采集。检查病变与采集病料应统筹考虑。2.1.3内脏病料的采取，如患畜已死亡，应尽快采集，最迟不超过6h。2.1.4血液样品在采集前一般禁食8h。2.1.5应做好人身防护，严防人畜共患病感染。2.1.6应防止污染环境，防止疫病传播，做好环境消毒和病害肉尸的处理。2.2使用器械的消毒刀、剪、镊子等用具煮沸消毒30min，使用前用酒精擦拭，用时进行火焰消毒。器皿（玻制、陶制等）经103kpa高压30min，或经160℃干烤2h灭菌；或放于0.5%～1%的碳酸氢钠（nahco3）水中煮沸10min～15min，水洗后，再用清洁纱布擦干，保存于酒精、乙醚等溶液中备用。注射器和针头放于清洁水中煮沸30min。一般要求使用"一次性"针头和注射器。采取一种病料，使用一套器械与容器，不可用其再采其他病料或容纳其他脏器材料。采过病料的用具应先消毒后清洗。检查过传染性海绵状脑病的器械要放在2mol/l的氢氧化纳（naoh）溶液中浸泡2h以上，才可再使用。3样品的采集3.1血液3.1.1采血部位大的哺乳动物可选用颈静脉或尾静脉采血，也可采胫外静脉和乳房静脉血。毛皮动物小量采血可穿刺耳尖或耳壳外侧静脉，多量采血可在隐静脉采集，也可用尖刀划破趾垫10.5cm深或剪断尾尖部采血。啮齿类动物可从尾尖采血，也可由眼窝内的血管丛采血；兔可从耳背静脉、颈静脉或心脏采血。禽类通常选择翅静脉采血，也可通过心脏采血。3.1.2采血方法对动物采血部位的皮肤先剃毛（拔毛），75%的酒精消毒，待干燥后采血，采血可用针管、针头、真空管或用三棱针穿刺，将血液滴到开口的试管内。禽类等的少量血清样品的采集，可用塑料管采集。用针头刺破消毒过的翅静脉，将血液滴到直径为3mm～4mm的塑料管内，将一端封口。3.1.3采血种类3.1.3.1全血样品进行血液学分析，细菌、病毒或原虫培养，通常用全血样品，样品中加抗凝剂。抗凝剂可用0.1%肝素、阿氏液（见第a.l章）（阿氏液为红细胞保存液，使用时，以1份血液加2份阿氏液），或枸橼酸钠（3.8%～4%的枸橼酸钠0.1ml，可抗1ml血液）。采血时应直接将血液滴入抗凝剂中，并立即连续摇动，充分混合。也可将血液放入装有玻璃珠的灭菌瓶内，震荡脱纤维蛋白。3.1.3.2血清样品进行血清学试验通常用血清样品。用作血清样品的血液中不加抗凝剂，血液在室温下静置2h～4h（防止曝晒），待血液凝固，有血清析出时，用无菌剥离针剥离血凝块，然后置4℃冰箱过夜，待大部分血清析出后取出血清，必要时经低速离心分离出血清。在不影响检验要求原则下可因需要加入适宜的防腐剂。做病毒中和试验的血清避免使用化学防腐剂（如硼酸、硫柳汞等）。若需长时间保存，则将血清置20℃以下保存，但要尽量防止或减少反复冻融。样品容器上贴详细标签。3.1.3.3血浆的采集采血试管内先加上抗凝剂（每10ml血加柠檬酸钠0.04g～0.05g），血液采完后，将试管颠倒几次，使血液与抗凝剂充分混合，然后静止，待细胞下沉后，上层即为血浆。3.2一般组织3.2.1采样方法用常规解剖器械剥离死亡动物的皮肤，体腔用消毒的器械剥开，所需病料按无菌操作方法从新鲜尸体中采集。剖开腹腔后，注意不要损坏肠道。作病原分离用。进行细菌、病毒、原虫等病原分离所用组织块的采集，可用一套新消毒的器械切取所需器官的组织块，每个组织块应单独放在已消毒的容器内，容器壁上注明日期、组织或动物名称。注意防止组织间相互污染。3.2.2采样种类3.2.2.1病原分离样品的采集用于微生物学检验的病料应新鲜，尽可能的减少污染。用于细菌分离的样品的采集，首先以烧红的刀片烫烙脏器表面，在烧烙部位刺一孔，用灭菌后的铂耳伸入孔内，取少量组织或液体，作涂片镜检或划线接种于适宜的培养基上。3.2.2.2组织病理学检查样品的采集采集包括病灶及临近正常组织的组织块，立即放入10倍于组织块的10%福尔马林溶液中固定。组织块厚度不超过0.5cm，切成1cm2～2cm2（检查狂犬病则需要较大的组织块）。组织块切忌挤压、刮摸和用水洗。如作冷冻切片用，则将组织块放在0℃～4℃容器中，尽快送实验室检验。3.3肠内容物或粪便肠道只需选择病变最明显的部分，将其中的内容物弃去，用灭菌生理盐水轻轻冲洗；也可烧烙肠壁表面，用吸管扎穿肠壁，从肠腔内吸取内容物，将肠内容物放入盛有灭菌的30%甘油盐水缓冲保存液（见第a.2章）中送检。或者，将带有粪便的肠管两端结扎，从两端剪断送检。从体外采集粪便，应力求新鲜。或者，用拭子小心地插到直肠粘膜表面采集粪便，然后将拭子放入盛有灭菌的30%甘油盐水缓冲保存液中送检。3.4胃液及瘤胃内容物3.4.1胃液采集胃液可用多孔的胃管抽取。将胃管送入胃内，其外露端接在吸引器的负压瓶上，加负压后，胃液即可自动流出。3.4.2瘤胃内容物采集2反刍动物在反刍时，与食团从食道逆入口腔时，立即开口拉住舌头，另一只手深入口腔即可取出少量的瘤胃内容物。3.5呼吸道应用灭菌的棉拭子采集鼻腔、咽喉或气管内的分泌物，蘸取分泌物后立即将拭子浸入保存液中，密封低温保存。常用的保存液有ph7.2～7.4的灭菌肉汤（见第a.3章）或磷酸盐缓冲盐水，如准备将待检标本接种组织培养，则保存于含0.5%乳蛋白水解物的汉克氏（hanks）液中。一般每支拭子需保存液5ml。3.6生殖道可采集阴道或包皮冲洗液，或者采用合适的拭子，有时也可用尿道拭子采集。3.7眼睛眼结膜表面用拭子轻轻擦拭后，放在灭菌的30%甘油盐水缓冲保存液中送检。有时，也采取病变组织碎屑，置载玻片上，供显微镜检查。3.8皮肤病料直接采自病变部位，如病变皮肤的碎屑、未破裂水泡的水泡液、水泡皮等。3.9胎儿将流产后的整个胎儿，用塑料薄膜、油布或数层不透水的油纸包紧，装入木箱内，立即送往实验室。3.10小家畜及家禽将整个尸体包入不透水塑料薄膜、油纸或油布中，装入木箱内，送往实验室。3.11骨需要完整的骨标本时，应将附着的肌肉和韧带等全部除去，表面撒上食盐，然后包入浸过5%石炭酸溶液的纱布中，装入不漏水的容器内送往实验室。3.12脑、脊髓3.12.1全脑、脊髓的采集如采取脑、脊髓做病毒检查，可将脑、脊髓浸入30%甘油盐水液中或将整个头部割下，包入浸过消毒液的纱布中，置于不漏水的容器内送往实验室。3.12.2脑、脊髓液的采集3.12.2.1采样前的准备采样使用特制的专用穿刺针，或用长的封闭针头（将针头稍磨钝，并配以合适的针芯）；采样前，术部及用具均按常规消毒。3.12.2.2采样方法3.12.2.2.1颈椎穿刺法。穿刺点为环枢孔。将动物实施站立或横卧保定，使其头部向前下方屈曲，术部经剪毛消毒，穿刺针与皮肤面呈垂直缓慢刺入。将针体刺入蛛网膜下腔，立即拔出针芯，脑脊髓液自动流出或点滴状流出，盛入消毒容器内。3.12.2.2.2腰椎穿刺法。穿刺部位为腰荐孔。实施站立保定，术部剪毛消毒后，用专用的穿刺针刺入，当刺入蛛网膜下腔时，即有脑脊髓液滴状滴出或用消毒注射器抽取，盛入消毒容器内。3.12.2.3采样数量大型动物颈部穿刺一次采集量35ml～70ml，腰椎穿刺一次采集量15ml～30ml。3.13液体病料采集胆汁、脓、粘液或关节液等样品时，用烫烙法消毒采样部位，用灭菌吸管、毛细吸管或注射器经烫烙部位插入，吸取内部液体材料，然后将材料注入灭菌的试管中，塞好棉塞送检。也可用接种环经消毒的部位插入，提取病料直接接种在培养基上。供显微镜检查的脓、血液及粘液抹片的制备方法。先将材料置玻片上，再用一灭菌玻棒均匀涂抹或另用一玻片推抹。组织块、致密结节及脓汁等亦可在两张玻片中间，然后沿水平面向两端推移。用组织块作触片时，持小镊将组织块的游离面在玻片上轻轻涂抹即可。3.14乳汁乳房先用消毒药水洗净（取乳者的手亦应事先消毒），并把乳房附近的毛刷湿，最初所挤的3～4把乳汁弃去，然后再采集10ml左右乳汁于灭菌试管中。进行血清学检验的乳汁不应冻结、加热或强烈震动。3.15精液精液样品用人工方法采集，所采样品应包括"富精"部分，并避免加入防腐剂。3.16尿液的采集3在动物排尿时，用洁净的容器直接接取。也可使用塑料袋，固定在雌畜外阴部或雄畜的阴茎下接取尿液。采取尿液，宜早晨进行。3.17环境为监测环境卫生或调查疾病，可从遗弃物、通风管、下水道、孵化厂或屠宰场采集有代表性样品。4送检样品的记录送往实验室的样品应有一式三份的送检报告，一份随样品送实验室，一份随后寄去，另一份备案。样品记录至少应包括以下内容：a）畜主的姓名和畜禽场的地址；b）畜（农）场里饲养的动物品种及其数量；c）被感染的动物种类；d）首发病例和继发病例的日期及造成的损失；e）感染动物在畜群中的分布情况；f）死亡动物数、出现临床症状的动物数量及其年龄；g）临床症状及其持续时间，包括口腔、眼睛和腿部的情况，产奶或产蛋的记录，死亡情况和时间，免疫和用药情况等；h）饲养类型和标准，包括饲料种类；i）送检样品清单和说明，包括病料的种类、保存方法等；j）动物治疗史；k）要求做何种试验；l）送检者的姓名、地址、邮编和电话；m）送检日期。5样品的运送所采集的样品以最快最直接的途径送往实验室。如果样品能在采集后24h内送抵实验室，则可放在4℃左右的容器中运送。只有在24h内不能将样品送往实验室并不致影响检验结果的情况下，才可把样品冷冻，并以此状态运送。根据试验需要决定送往实验室的样品是否放在保存液中运送。要避免样品泄漏。装在试管或广口瓶中的病料密封后装在冰瓶中运送，防止试管和容器倾倒。如需寄送，则用带螺口的瓶子装样品，并用胶带或石蜡封口。将装样品的并有识别标志的瓶子放到更大的具有坚实外壳的容器内，并垫上足够的缓冲材料。空运时，将其放到飞机的加压舱内。制成的涂片、触片、玻片上注名号码，并另附说明。玻片两端用细木条分隔开，层层叠加，底层和最上一片，涂面向内，用细线包扎，再用纸包好，在保证不被压碎的条件下运送。所有样品都要贴上详细标签。附录a（规范性附录）待检样品保存液的配制a.1阿（alserer）氏液葡萄糖2.05g柠檬酸钠（na3c6h5o7·2h2o）0.80g氯化钠（nacl）0.42g蒸镏水（或无离子水）加至100ml溶解后，以10%柠檬酸调至ph为6.1分装后，70kpa10min灭菌，冷却后4℃保存备用。a.230%甘油盐水缓冲液甘油30ml氯化钠4.2g磷酸二氢钾1.0g磷酸氢二钾3.lg0.02%酚红1.5ml蒸馏水加至100ml4加热溶化，校正ph值为7.6，100kpa15min灭菌，冰箱保存备用。a.3肉汤（broth）牛肉膏3.5g蛋白胨10g氯化钠5g充分混合后，加热溶解，校正ph为7.2～7.4，再用流通蒸气加热30min，用滤纸过滤，获苗黄色透明液体，分装于试管或烧瓶中，以100kpa20min灭菌。保存于冰箱中备用。第二篇：食品微生物检验采样方法食品微生物检验采样方法按照上述采样方案，能采取最小包装的样品就采取完整包装，必须拆包装取样的应按无菌操作进行。不同类型的食品应采用不同的工具和方法：1.液体样品：充分混匀，以无菌操作开启包装，用100ml无菌注射器抽取，注入无菌容器。2半固体样品：以无菌操作拆开包装，用无菌勺子从几个部位挖取样品，放入无菌容器。3.固体食品。大块整体食品应用无菌刀具和镊子从不同部位割取，割取时应兼顾表面与深部，注意样品的代表性;小块大包装食品应从不同部位的小块上切取样品，放入无菌容器。若为检验食品的污染情况，可取表层样品；若为检验食品品质的情况，应从深部取样。4.冷冻食品。大包装小块冷冻食品按小块个体采取;大块冷冻食品可以用无菌刀从不同部位削取样品或用无菌小手锯从冻块上举取样品，也可以用无菌钻头钻取碎屑状样品，放入容器。固体食品和冷冻食品的取样还应注意检验目的，若需检验食品污染情况，可取表层样品;若需检验其品质情况，应取深部样品。5.生产工序监测（1）车间用水。自来水样从车间各水龙头上采取冷却水;汤料等从车间容器不同部位用100ml无菌注射器抽取。（2）车间台面、用具及加工人员手的卫生监测。用5cm2孔无菌采样板及5支无菌棉签擦拭25cm2面积。若所采表面干燥，则用无菌稀释液润湿棉签后擦拭;若表面有水，则用干棉签擦拭，擦拭后立即将棉签头用无菌剪刀剪入盛样容器。（3）车间空气采样。直接降尘法。将5个直径90mm的普通营养琼脂平板分别置于车间的四角和中部，打开平皿盖5min，然后盖盖送检。第三篇：动物病原微生物实验室检验实习总结山西农业大学教学实习总结专业动物检疫年级班级姓名学号指导教师赵宇军职称副教授动物病原微生物实验室检验实习总结实习时间：2012年5月8日至8月13日实习地点：山西农业大学兽医微生物与免疫学实验室指导老师：赵宇军实习内容。时间过的很快，转眼间三年的大学生活就结束了，我们动物检疫专业的同学从五月份开始了为期3个多月的教学实习，在众多辅导老师之中，我有幸跟随我校动物科技学院预防系的赵宇军教授进行学习。实习地点为我校兽医微生物与免疫学实验室。实习内容自行选择。在老师的带领下我进行了大肠杆菌的实验室检测和食物中金黄葡萄球菌的检验。下面我们来回顾这次实验。大肠杆菌的实验室检测一、培养基配置我们一般用lb液体培养基来扩大培养大肠杆菌，培养后可在lb固体培养基上划线分离。以下为本实验中培养基配置步骤：1.称量。准确称取各成分。蛋白胨0.5g，酵母提取物0.25g，氯化钠0.5g，加水50ml。配置lb固体培养基时还需加1g琼脂。2.溶化。加热熔化，用蒸馏水定容到50ml。配置lb固体培养基时还需加琼脂，整个过程不断用玻棒搅拌，目的是防止琼脂糊底而导致烧杯破裂。3.调ph。用1mol/lnaoh溶液调节ph至偏碱性。4.灭菌。在两个250ml的三角瓶中分别装入50mllb液体培养基和50mllb固体培养基，加上棉塞。将培养皿用牛皮纸包好，放入灭菌锅内，1kg压力灭菌15min。5.倒平板：灭菌后，待固体培养基冷却至60℃左右时在酒精灯火焰附近操作进行。其过程是：①将灭过菌的培养皿放在火焰旁，右手拿装有培养基的三角瓶，左手拔出棉塞；②右手拿三角瓶，使三角瓶的瓶口迅速通过火焰；③用左手将培养皿打开一条稍大于三角瓶口的缝隙，右手将培养基倒入培养皿，立刻盖上皿盖；④待平板冷却凝固后，将平板倒过来放置。二、灭菌和消毒1.无菌技术。①对实验操作空间、操作者的衣着和手进行清洁和消毒；②将培养器皿、接种用具和培养基等器具进行灭菌；③为避免周围微生物污染，实验操作应在酒精灯火焰旁进行；④避免已灭菌处理的材料用具与周围的物品相接触。2.消毒方法。①日常生活经常用到的是煮沸消毒法；②对一些不耐高温的液体，则使用巴氏消毒法；③对接种室、接种箱或超净工作台首先喷洒石炭酸或煤酚皂等溶液以增强消毒效果，然后使用紫外线进行物理消毒；④实验操作者的双手使用酒精进行消毒。3.灭菌方法。①接种环、接种针、试管口等使用灼烧灭菌法；②培养基、无菌水等使用高压蒸汽灭菌法，所用器械是高压蒸汽灭菌锅；③表面灭菌和空气灭菌等使用紫外线灭菌法，所用器械是紫外灯。三、细菌的分离采用划线分离法，其操作步骤是。将培养皿底部用拇指和无名指固定成倾斜状态，在火焰旁将培养皿稍微打开。在此同时，用环状接种针在火焰旁取少许菌悬液，迅速送入培养皿内，在平板培养基的一边，作第1次平行划线3～5条，转动培养皿约70°角，用烧过冷却的接种针，通过第1次划线部分作第2次平行划线，然后再用同样方法，通过第二次平行划线部分作第三次平行划线和通过第三次平行划线部分作第四次平行划线。划线时，接种针应与平板表面成30°角左右。不要使接种针碰到培养皿边缘，也不要将培养基划破。划线完毕后，盖上皿盖，倒置于恒温箱培养。四、菌落和菌种种类的辨认细菌的菌落表面一般是光滑而湿润的，有黏稠性，多数透明或半透明，但也有细菌的菌落表面是干燥、有褶皱的；放线菌由于有纤细的菌丝并可产生孢子，所以菌落表面是紧密的绒状、坚实多皱，长孢子后就成粉末状，由于菌丝和孢子有多种色素，所以在菌落培养基底部和菌落表面都有不同的颜色，菌落不易用接种环挑动；酵母菌落类似于细菌菌落，表面光滑而湿润，有黏稠性但大多呈乳白色，少数呈红色。食品中金黄葡萄球菌的检测方法金黄色葡萄球菌是一种引起人类和动物化脓感染的重要致病菌，也是造成人类食物中毒的常见致病菌之一。本菌广泛分布于自然界，如空气、土壤、水及其它环境中。在人类和动物的皮肤及外界相通的腔道中，也经常有本菌存在。据报导，在正常人群中的带菌率可达30%~80%，其中皮肤带菌率为8~22%，鼻腔和咽喉部等上呼吸道的带菌率在40~50%以上，因此其可通过各种途径和方式，尤其是经工作人员的手和上呼吸道而污染食品。由于致病金黄葡萄球菌能产生肠毒素，故一旦细菌污染食品，并在合适的温度环境下，细菌可以大量繁殖并产生肠毒素，从而引起消费者食物中毒。我国对金黄色葡萄球菌目前采用的方法是以国家标准gb.4789-10-84及检验检疫系统行业标准sn.0172-92作为依据。整个检测过程获得最终结果须时5天左右，既费时又费力，并造成货物积压，也影响货物的及时出运，并使货主的仓储成本提高，造成较大的经济损失。多年来很多食品微生物实验室都在探索和寻找一些准确性高，并快速的检测方法，最近我们分别从美国3m公司和法国生物梅里埃公司获得两种快速检测致病性金黄色葡萄球菌的培养基，其名称为：①petrifilmrsa.countplate（由美国3m公司研制生产），是一种薄膜型快速检测金黄色葡萄球菌的计数平板。②baird-parker+rpfagar.（由法国生物梅里埃公司研制生产的用baird-parker琼脂加免血浆纤维蛋白原的金黄色葡萄球菌检测计数平板）。一、实验原理petrifilm.rsa.测试薄膜是由二部分组成。第一部分是由黄金色葡萄球菌培养基片，此培养基中含有经修正的barid-parker，营养成分加上以冷水可溶解的胶质。第二部分是一种耐热核酸酶（tnase）反应片，含有dna及甲苯胺兰（toluidineblue-o）及四唑指示剂（tetraeolium）。此指示剂有助于菌落的计数及确定葡萄球菌耐热核酸酶的存在。耐热去氧核糖核酸（deoxyribonulcasdnase）为产毒金葡菌之典型特征，此酶非常耐热，在100℃加热30min，不易丧失活性，在130℃之下，其d值为16.6min，此酶之分子量为16800，等电点ph为9.6，耐热去氧核糖酸与检测血浆凝固酶相似，是一种鉴定金黄色葡萄球菌的方法，在petrifilm.rsa检测片上，耐热dna酶反应看起来，呈粉红色环带包围着一个红色或兰色的菌落。petrifilm.rsa检测片，必须与peyrifilm耐热核酸酶反应片一起使用，单独使用将不会显示菌落，因为具有辅助计数菌落的指示剂是在反应片上，而不是在petrifilm.rsa检测片上。baird-parker+rpfagar，这一培养基中含有丰富的营养成分，其中以氯化锂代替亚碲酸钾，使菌落颜色呈黑色，rpf补充有兔血浆和牛纤维蛋白原，以便检测凝固酶活力，胰酶可以抑制全部或部分围绕凝固酶阳性菌落周围沉淀晕环纤维蛋白的溶解，因此凡存在血浆凝固酶阳性的金黄色葡萄球菌，将在培养基中呈现有晕环的黑色菌落，即可确认，并作计数。二、实验步骤材料和方法：本次实验采用以下3种试剂：1.美国3m公司提供的petrifilm.rapid.s.aureuscountplate.2.法国生物~梅里埃公司提供的baird-parker+rpfagar.3.实验室自配baird-park琼脂（英国oxoid）及新鲜兔血浆。菌种来自美国菌种保存中心（americatypculturecollection）。金黄色葡萄球菌共10株菌株，其菌号分别为：atcc27661atcc27664atcc13565atcc51704atcc（k）12600atcc（r）65389atcc25923atcc29213atcc8095atcc12598非金黄色葡萄球菌菌种5株，其菌号分别为：atcc51813（大肠杆菌）、atcc624（无乳链球菌）、atcc51816（阴沟肠杆菌）、atcc6051（枯草杆菌）、atcc49214（肠炎沙门氏菌）、自然食品检样，任意购自市场。本次实验是以同一测试样品经均质并通过无菌生理盐水作10倍递增稀释后取1至2个稀释度同时接种上述三种培养基作平行实验，在取得最终结果后相互进行比对。上述三种培养基的接种方法是按生产商所提供的使用说明进行操作，另外baird-parkeragar培养基是按sn0172-92标准进行操作。a、本次实验共测试已知标准菌种共15株，其中葡萄球菌10株，其他菌种5株（包括大肠杆菌、阴沟肠杆菌、肠炎沙门氏菌、枯草杆菌和无乳链球菌）。b、测试自然食品检样共101只（其中包括肉11只、肉类14只、水产品17只、牛奶25只、蔬菜22只、豆制品12只）。三、实验结果：a、被检菌种10株，金黄色葡萄球菌在三种培养基上都能检出生长情况良好，同一稀释度的菌液，除个别菌株外在3种培养基计数检测结果基本都在一个数量级上，无显著差异。而5株非金黄色葡萄球菌的菌株在三种培养基上全部不能生长。b、自然食品检样共接种101只，每一检样同一稀释浓度分别同时种三种培养基，最终共检出金黄色葡萄球菌45只，占全部检样的44.5％，其中petrifilmrsa检出阳性结果为42只，占全部阳性检样的93.3％，baird-parker＋rpfagar.检出阳性结果26只，占全部阳性检样的57.7％。baird-parker.agar检出阳性结果32只，占全部阳性检样的71.1％。四、实验讨论1.用15株标准菌在3种培养基中的检测，10株金黄色葡萄球菌以同一浓度接种，结果生长良好，其最终计数基本一致，定位在同一数量级，5株非金黄色葡萄球菌接种上述三种培养基全部不长，说明上述三种培养基对金黄色葡萄球菌选择良好。2.以101只自然样品同一均质稀释液，同时接种三种培养基，从最终结果来看，对金黄色葡萄球菌的阳性检出率为44.5％3.从检测程序来年，petrifilm.rsa及baird-parker＋rpf.agar.都在样品接种后28~30h观察结果，并不必再做证实试验，而如以baird-parkeragar检测，须在接种后48h观察平板，并挑取可疑菌落转种到营养肉汤中，在经18-24h后做血浆凝固酶或耐热dna酶试验进行证实，最终计数，前后约须80h。4.从本次试验中观察，使用上述三种培养基对食品中金黄色葡萄球菌含量的直接计数检测，其样品接种液的含量拟控制在100个/ml以内，比较容易分清并计数，如菌量过浓，则将会影响最后的读数，因此对新送的被检样品，如在不了解污染的情况下一般必须要做2个以上的稀释度，同时分别接种，才能获得较为满意的结果。而在baird-parker＋rpfagar及baird-parker.agar接种时必须将1ml样液作三只平板涂布（0.3、0.3、0.4ml）这样就会造成手续繁琐试剂消耗较大，但baird-parker.rpf.培养基也可以1ml样液作倾注培养，并作计数。5.在整个测试过程中，我们发现，按使用说明对petrifilm.rsa.及barid-parker＋rpf.agar，操作规定在接种24h后观察结果，此时往往由于菌落长得经较小，特征瓜不明显，但如果继续放置一夜以后金葡萄菌落特征明显，并可能会经第一天观察数量有所增加，这样可以提高检测结果的可信度。6.由于对上述两种培养基的试用期间我们尚未获得供应商的报价，故无法测算每一样品的测试成本价格。但可以予计上述两面种快速检测培养基的耗材费用要高于常规经典方法（baird-parkeragar）的费用。7.通过本次实验，我们感到使用美国3m公司生产的petrifilm.rsaplate培养基和法国生物－梅利埃公司生产的baird-parkerrpf.agar培养基检测中的金黄色葡萄球菌。可以比目前常规检测方法时间可缩短一半。并可以明显节省大量人力。这完全符合实验室快速检测的要求，尤其是对基层较简陋的实验室条件中，更显其使用方便的优越性。实习总结。通过这次严谨而有序的实验实习，为我们先前在教学中学习到的知识提供了一个实际的操作实施平台，也为今后在这方面检验技术的工作起到了指引作用。在过去的学习中，我们并不了解具体的病原微生物实验室检验技术的具体流程，注意事项等等非常关键和必须的防御手段。通过此次生产实习，使我们对以前所不熟知的问题有了深入的认识，也对目前的情况有所思考和感悟。在我看来，动物检疫人员在我国国民生活中起到了关键作用，民以食为天，没有认真负责的实验检测，将给社会带来巨大的饮食灾难，为此，我感到非常自豪和骄傲。在今后的工作学习中，我将一如既往的认真下去，无愧自己的职责和称号。在此感谢我院的各级领导，特别是我的指导老师赵宇军教授。第四篇：靖远县动物疫控中心实验室2012年动物疫病监测工作计划靖远县动物疫控中心实验室2012年动物疫病监测实施方案为及时掌握动物疫病免疫状况、流行规律和疫情动态，增强重大动物疫情预警预报能力，根据市畜牧兽医局《2012年白银市动物疫病监测计划实施方案》要求，现制订靖远县动物疫病预防控制中心2012年动物疫病监测工作实施方案。一、指导思想全面掌握和分析高致病性禽流感、口蹄疫、高致病性猪蓝耳病、新城疫等主要动物疫病病原分布和流行规律，评估重大动物疫病免疫效果，及时掌握疫情动态，消除疫情隐患，发布预警预报，科学开展防控工作。二、组织与分工（一）疫控中心主任负责监测工作的全面管理，组织贯彻市局下达的任务及监测工作中重大事务的决策；主管实验室工作的疫控中心副主任负责具体工作的安排及各部门的协调。（二）乡镇兽医站1、按照疫控中心分解的任务保质保量及时完成免疫抗体监测、病原学监测采样工作。采集的样品送疫控中心实验室检测。采样数量和采样要求见《采样分配表》；2、按照要求正确填写采样单，认真完成“春秋”两防的信息收集统计工作；3、负责及时将动物疫情监测报告送达样品采集场户；4、负责本乡镇动物疫情收集、汇总、上报及重大动物疫情预报、预警工作。（三）中心实验室负责具体实施动物疫病的监测工作，主要任务是：1、承担全县主要动物疫病实验室免疫抗体监测工作；2、负责全县主要动物疫病的定点定期监测工作，重点是种畜禽场、大型规模化养殖场；3、负责对全县动物疫病监测工作进行监督指导，协助各乡镇解决在监测中发现的疑难技术问题；4、进场入户积极开展两病监测和防控工作；5、负责在全县范围内进行不定点不定期的随机抽样监测工作，以及上级临时下达的其他检测任务；6、负责汇总分析全县动物疫病监测结果，并按规定上报；7、负责检验试剂、耗材等物品的采购供应并确保试剂耗材的质量、数量，满足监测工作需要。三、监测工作的安排（一）组织实施工作1、拟定于3月份召开的全县春防工作会议上，安排部署具体的采样监测工作。2、2012年底至2013年初召开全县动物疫病监测工作总结会。（二）日常监测1、县级定点定期监测工作：列入到县级定点监测单位的种畜禽场、大型规模化养殖场，由中心实验室按照监测方案要求的单位和数量，在每月15日前完成血清样品和病原学检测样品的采集工作；2、监测时间：中心实验室在集中免疫结束后10天内完成检测任务，包括：高致病性禽流感、口蹄疫、猪瘟、鸡新城疫主要动物疫病的日常监测工作。5月至6月份开展奶牛两病筛查工作。（三）紧急监测在日常工作中发现可疑病例，应随时采样，及时检测。四、监测结果的报告（一）中心实验室对全县的结果进行统计、汇总和分析，并将全县的监测结果上报畜牧兽医局，年终报送一次监测工作总结。（二）疫情测报人员每月底前将本月的监测结果上报中国动物疫病预防控制中心。（三）对监测中发现疑似重大动物疫病或检出的两病阳性结果的，及时按规定上报第五篇：动物疫病防治技术1、试述猪瘟免疫程序答。猪瘟免疫效果的好坏，取决于母源抗体的高低，接种时间，接种剂量和所用疫苗等问题。试验结果表明仔猪母源抗体的消长规律，与母猪免疫时间相关联，即母猪免疫至仔猪产出的时间越短，仔猪母源抗体相对较多，持续时间长。相反，母猪免疫至仔猪产出的时间越长，所产仔猪的母源抗体相对较少，持续时间短。要使母猪和仔猪保持相对稳定的猪瘟抗体，母猪必须每6个月接种一次猪瘟冻干苗。经每6个月接种一次猪瘟冻干苗的母猪所产仔猪，在30日龄左右接种一头剂猪瘟冻干苗，接种后275天用石门系强毒攻毒获百分之百保护，此时绝大多数肉猪已出栏。据此猪瘟免疫程序为（1）猪瘟控制区应用经产母猪每6个月用猪瘟冻干苗1头剂接种一次，仔猪30日龄左右用猪瘟冻干苗1头剂接种一次，种公猪每年春，秋用猪瘟冻干苗1头剂接种一次。（2）猪瘟非控制区应用经产母猪，种公猪每6个月接种一次，仔猪20，65日龄时各接种一次，每次接种猪瘟冻干苗1头剂。此外还可根据当地实际，采用哺乳前一次接种。至于腹腔注射，阴道注人，人工授精接种方法，必须接种后3～4个月再行接种一次。2、试述农户散养鸡新城疫的免疫答。根据我国目前国情，养鸡业多以农户养为主，如何将农户散养的鸡免疫接种好，使之不发病或少发病，是兽医工作者必须考虑的问题。首先要选用有效疫苗新城疫叭苗具有耐热性（38℃保存45天能存活），同居感染免疫性，稳定性，免疫期较长等优点。新城疫工系苗属中等毒力疫苗，免疫期长。这三种疫苗联合运用，适合于农户散养鸡新城疫的免疫。其次要采用科学的接种方法7～10日龄雏鸡，先停水，将新城疫v4苗按每只2羽份，用适量凉开水稀释，让鸡自饮。饮完后，停水，再将新城疫v4苗按每只2羽份，用适量凉开水稀释，让鸡自饮。120～125日龄鸡用新城疫工系苗肌肉注射，每只1羽份。第三是接种方式利用新城疫v4苗耐热的特点，农户可在乡镇兽医防疫站购苗，自行给鸡饮水免疫接种，以及每年春秋由乡镇兽医防疫站进行新城疫工系苗肌肉注射免疫接种。虽然上述新城疫免疫程序不如集约化鸡场的免疫接种科学，但就目前农户散养鸡来说，其方法实用，有效，可行。3、试述良种肉鸭主要疾病的综合防治答。良种肉鸭生长周期性短，一般在25～30天即可育肥出栏，加之多数是集约化饲养，疫病流行非常快，死亡多，经济损失大，所以对良种肉鸭的疾病防治应有足够认识。经调查良种肉鸭的主要疾病有病毒性传染性肝炎，浆膜炎，副伤寒，大肠杆菌病，巴氏杆菌病，鸭瘟等。根据这些疾病发生时间不同，主要防治技术有以下几项。（1）消毒技术育雏室，育成室和所用器具的消毒。（2）育雏室内的保温技术（冬天应升温至35℃左右）。（3）副伤寒的防治技术可采用广谱抗生素饮水或注射。（4）病毒性传染性肝炎的防治技术7～9日龄时皮下注射抗肝炎高免血清，一般不用肝炎疫苗注射。（5）浆膜炎的防治技术肉鸭在10，15，20日龄时用广谱抗菌素注射。同时防治巴氏杆菌病和大肠杆菌病。（6）鸭瘟病的防治技术根据鸭瘟多发生于成鸭，一月龄以内的鸭发病少的原则，良种肉鸭的鸭瘟防治，采取发病后立即用鸭瘟疫苗进行紧急预防接种的措施，效果好。4、试述仔猪主要疾病的综合防治答。仔猪（（60日龄内的小猪）培育期间的主要疾病包括仔猪黄痢，白痢，缺铁性贫血，猪瘟，仔猪副伤寒，寄生虫等。针对这些疾病的发生时间和危害程度，特提出以下综合防治措施。（1）母猪在配种前30天左右接种猪瘟冻干苗，旨在确保母猪对猪瘟病的免疫和具有足够母源抗体传递给仔猪，使仔猪在30日龄内不患猪瘟病。（2）怀孕母猪的产仔前10～20天接种大肠杆菌k88，k99双价基因工程苗，仔猪通过吃乳获得抵抗黄痢，白痢的抗体，使之不患黄痢，白痢病。（3）仔猪出生前三天对母猪圈舍，垫草，仔猪栏等要彻底消毒。（4）仔猪的早期护理，其中主要内容要让每头仔猪都能吃足初乳，提高抗病力。（5）仔猪出生后3日龄内用右旋糖酐铁进行注射补铁。（6）仔猪出生后第二天开始口服生物活菌制，调整仔猪胃肠道的微生态平衡，预防黄，白痢的发生。（7）仔猪在30日龄左右接种猪瘟冻干苗。（8）仔猪在35日龄进行仔猪副伤寒菌苗的接种。（9）仔猪40日龄进行驱