体内药物分析 体内样品分析 （药物分析课件）

体内药物分析一、样品的种类体内药物分析采用的生物样品种类包括体内的各种体液和组织。其中最常用的是血液（血浆、血清、全血）、尿液和唾液。二、样品的采集所取样品应能正确反映药物浓度与效应之间的关系；采集原则样品应易于获取，便于处理、分析。根据不同的分析目的和要求进行选取；二、样品的采集（一）血样血样包括血浆、血清和全血，是体内药物分析中最常用的样品。血样采集方法：静脉取血或毛细血管取血。血样采集的量：一般取血量为1～3ml。动物：采血量不宜超过动物总血量的1/10。二、样品的采集采集的静脉血液中加入抗凝剂，混合后，离心，使与血细胞分离，所得淡黄色上清液即为血浆。（一）血样血浆（plasma）的制备：二、样品的采集将采集的静脉血液放置30分钟～1h，离心，上层澄清的淡黄色液体即为血清，血清制取的量：全血的20%～40%。（一）血样血清（serum）的制备：全血（wholeblood）的制备：将采集的血液中加入抗凝剂,不经离心操作，保持血浆和血细胞混合在一起。（一）血样二、样品的采集（一）血样血浆=血清+纤维蛋白原药物与纤维蛋白几乎不结合，因此血浆与血清中的药物浓度通常是相同的；作为血药浓度测定的样品，血浆和血清可任意选用，测定药物浓度的分析方法也可相互通用；由于血浆制取的量多于血清，多数研究者使用血浆样品，若血浆中含有的抗凝剂干扰药物测定时，应使用血清样品。二、样品的采集测定尿药浓度主要用于药物的剂量回收、肾清除率和生物利用度的研究以及药物代谢类型的测定。体内兴奋剂检测的样品主要是尿液。（二）尿液二、样品的采集唾液的pH约在6.9±0.5，个体差异较大，此外尚受到一些其他因素，如有无刺激，剌激类型、强度与持续时间，年龄，性别，疾病，药物等的影响。一些药物的唾液浓度与血浆浓度相关，样品易得，取样无损害。（三）唾液二、样品的采集（四）组织样品的制备在测定之前，组织样品首先需均匀化制成水性基质匀浆溶液，然后再用适当方法预处理。匀浆化操作：组织样品中加入一定量的水或缓冲液，在刀片式匀浆机中匀浆1.血浆或血清尽快从全血中分离出来，分离后再进行冷冻保存。（一）贮存2.

尿液冷藏或加防腐剂。3.

组织性样品﹣20℃速冻，不需加防腐剂。三、样品的贮存三、样品的贮存生物样品中药物的稳定性往往涉及两种情况：（二）稳定性待测样品贮存中的稳定性；添加对照品的标准品的使用期限。样品的制备样品制备是体内药物分析极其重要的一个环节，往往也是分析中最难、最烦琐的步骤。药物在生物样品中常以多种形式存在。生物样品的介质组成比较复杂，有大量的内源性物质。四、样品的制备及测定（一）样品制备方法选择的一般原则生物样品的类型药物的理化性质和浓度范围药物测定的目的样品制备与分析技术的关系样品的制备四、样品的制备及测定（1）加入沉淀剂和变性试剂：加入中性盐、加入酸、加入金属离子。（2）加入可与水混溶的有机溶剂：如甲醇、乙醇、丙酮、乙腈、四氢呋喃等。（3）酶消化法：最常用的酶是蛋白水解酶中的枯草菌溶素。（二）样品的制备方法1.去蛋白法四、样品的制备及测定药物经人体代谢后，多与内源性物质结合形成缀合物经尿液排出。所以在提取之前需要将缀合物中的药物释放，常用酸水解、酶水解及溶剂水解的方法。酸水解：通常加入适量的盐酸溶液；酶水解：常用葡萄糖醛酸苷酶或硫酸酯酶或葡萄糖醛酸苷硫酸酯酶的混合酶。（二）样品的制备方法2.缀合物水解法四、样品的制备及测定液-液萃取法在体内药物分析中应用相当广泛，萃取一次即可除去大部分杂质，从大量的样品中提取药物经浓集后作为分析用样品，萃取时应注意溶剂的pH调节和提取溶剂的选择。（二）样品的制备方法3.萃取分离法（1）液-液萃取法四、样品的制备及测定（1）液-液萃取法溶剂的pH调节：对于碱性药物的最佳pH要高于pKa值1～2个pH单位；对于酸性药物则要低于pKa值1～2个单位。（二）样品的制备方法3.萃取分离法提取溶剂的选择：一般选择原则是在满足提取需要的前提下，尽可能选用极性小的溶剂。四、样品的制备及测定亲水性载体：硅藻土； 疏水性或离子交换树脂载体：活性炭、聚苯乙烯、十八烷基键合硅胶等。（二）样品的制备方法（2）液-固萃取法3.萃取分离法将具有吸附分配或离子交换性质的、表面积大的载体作为填充剂，装于小分离管中，使生物样品的干扰物或药物保留在载体上而进行分离的方法。四、样品的制备及测定在色谱过程中，用特殊的化学试剂借助化学反应给样品化合物接上某个特殊基团，使其转变为相应衍生物之后进行检测的方法。（二）样品的制备方法4.化学衍生化法分离前将药物进行化学衍生化的主要作用是使药物变成具有能被分离的性质，提高检测灵敏度，增强药物的稳定性，以及提高对光学异构体分离的能力等。四、样品的制备及测定方法检出限量10-9g（ng）专一性（分离度）分光光度法紫外-可见分光光度法100－荧光分光光度法1+－原子吸收分光光度法1+薄层扫描法紫外扫描10++荧光扫描1++气相色谱法氢火焰监测器1~10++氮磷检测器0.1~0.01+++电子捕获监测器0.01+++质量碎片选择离子监测器0.001++++高效液相色谱法紫外检测器1++荧光检测器0.1+++电化学检测器0.01~0.001+++免疫法放射免疫法0.001++酶免疫法0.01++荧光免疫法0.1~0.01++游离基免疫法0.001++五、样品的测定方法（一）免疫分析法利用样品中待测药物与标记药物之间的竞争，使标记药物从标记的抗原-抗体结合物上被取代，而其取代量与加入的待测药物的量成一定的比例关系，通过测定被取代的标记药物来定量分析待测药物。五、样品的测定方法1.放射免疫法（RIA）2.酶免疫法（EIA）3.荧光免疫法（FIA）4.游离基免疫法（FRAT）（一）免疫分析法放射免疫分析法[RIA]酶免疫分析法[EIA]荧光免疫分析法[FIA]五、样品的测定方法（二）色谱分析法1.气相色谱法适用于具有挥发性或经衍生化后具有挥发性的药物及其代谢物的测定。2.

高效液相色谱法广泛用于体内药物浓度的测定。气相色谱法高效液相色谱法LC-MSLC-MS/MS五、样品的测定方法（一）治疗药物监测（TDM）指在临床进行药物治疗过程中，定时采集患者的血液（尿液或唾液），并测定其中的药物浓度，以便根据患者的具体情况，使给药方案个体化。从而达到满意的疗效及避免发生毒副作用，同时也可以为药物过量中毒的诊断和处理提供有价值的实验室依据。六、体内