高级生物化学汇总

PAGEPAGE3高级生物化学课件总结核酸部分第二章核酸的化学组分糖环的折叠：折叠。核酸组分的分离方法：纸电泳、胶电泳、离子交换层析、薄层层析，反相层析等核酸组分的鉴定方法：紫外吸收法、紫外光谱法、第三章核酸的化学结构与性质DNA：DNA性，又称为简单序列DNA，又因为其不同寻常的核苷酸组成，经常在浮力密度梯度离心中从整个基因DNADNA。多态性：脱氧核糖和磷酸组成的骨架上的许多键都可以全动，随着热力学的变化，可以使链弯曲、伸DNADNA为多态性。DNA结构变异的三个方面：a.脱氧核糖的五元环能折叠成多种构象；b.组成磷酸脱氧核糖骨架的连续的键可以转动；c.C-N1发夹结构，茎环结构：具有不完善的两侧对称结构的区域形成的二级结构。两端互补的序列可配对形内特殊的减价配对及碱基堆积力，三到四个碱基形成的环特别稳定。在许多生物系统中，发家结构及tRNArRNARNA-蛋白的相互作用位点。DNAa.沟（特别是大沟）的特征在遗传信息表达过程中其关键作用；bDNADNADNA回文结构：又称反向重复序列，是一段能自我互补的序列，即同其互补链一样的序列（5’-3’）.能形成发夹结构或十字形结构。HoogsteenDNADNADNAWatson-Crick配对，从而形成DNA的三级结构，这种非Watson-CrickHoogsteen能进一步形成一些氢键。特别是大沟中一些功能基因的重排。DNA（双螺旋）体三维形状有影响的相互作用，包括不同二级结构元件的相互作用、单链与二级结构元件间的相互作用以及核酸的拓扑特征。DNADNA松弛态。DNA如果DNADNA张力不能释放掉，DNA分子就会发生扭曲，用以抵消这种张力，这种扭曲成为超螺旋，这种状态成为紧张态。（1）水解磷酸二酯键的酶。a.磷酸二酯酶：非特异水解磷酸二酯键的酶；b.核酸酶：专一水解核酸的磷酸二酯键的酶。按第五专一性分为核糖核酸酶和脱氧核糖核酸酶；按对底物的作用方式分为核酸内切酶和核酸外切酶（2）NN-糖苷酶。30-40DNA260nmPH碱基间的碱基堆集力受到了破坏，有规则的双螺旋结构变为无规则的单链线团状，这个变形过程称为熔解(Tm)。变性不涉及共价键的断裂。变性的因素：热力、强碱、强酸（甲酸等、有机溶液、变性剂（尿素、甲酰胺、射线、机械力等。Tm（全变性）一半（双螺旋结构失去一半）DNATm与下列因素有关：a.核酸的均一程度，均一性愈高的样品，变性过程的温度范围愈小。B.TmG-Cc.Tm复性DNA（PHpH合成为双螺旋结构，此过程称为复性（慢慢降温复性又称退火。复性的条件0.150.50mol/LNaClbTm20-25℃的温度。复性的机理（1）DNA（2）DNA一步又叫成核作用，反应较慢，第二步又叫拉拉链作用，反应很快。复性反应的影响因素（1）DNA片段的大小（大的线性单链，扩散速度受到妨碍，减少互补链的碰撞（2）DNA（浓度高增加互补链的相碰机会（3）DNA（原核为单一顺序，所以复DNA（4（Tm25℃为最佳（5）盐浓度（NaCl0.15-0.50mol/L。但太高会导致低严禁型杂交分子。Cot：分子杂交技术依据（1）2）有标记探针。分子杂交的应用（1）DNA（2）DNA（3）DNADNADNARNA（基因定位、克隆含量很少的但拷贝基因等（4）基因芯片与生物计算机。突变：能够产生永久（可遗传）的遗传密码改变的DNA突变的来源：DNADNA甲基化酶（据活性：DNADNA（DNA）上。外遗传信息（epigeneticinformation）:DNADNA可遗传的性质（即最终将影响器官的表现型。染色质的结构、分子的构象和拓扑特征等也是外遗传信息的形式。第四章核酸的种类与分布基因：将遗传信息由亲代传递给子代；二是经转录对表现型有一定的效应；可突变形成各种等位基因。RNAa.控制蛋白质合成；b.作用于RNAc节；d.生物催化与其他细胞持家功能；e.遗传信息的加工与进化；f.染色体、核糖体、核酶等的骨架构成成分；g.信号识别与传导。ribozyme(核酶)：RNAPtRNA5’-端多余的核苷酸使tRNA第五章核酸的分离与纯化1.分离纯化核酸时的注意事项（1）防止物理因素的降解。a.尽量简化操作步骤，缩短提取时间，以减少变性机会；b.防止热变性，避免高温，一般0-4℃；c（2）防止化学因素的降解。A.避（3）防止核酸酶的降解（4）防止DNAADNARnaseDNA（5）RNAA.带一次性手套、口罩；bDEPCtrisDEPC尽早出去蛋白质（RNase）,并加抑制剂。第六章DNA科学基本工具与技术（核酸工具酶）DNARNA-DNADNADNA；c.具有核糖核酸酶HRNA-DNARNA。DNA按限制性内切酶的作用位点在DNA物理图谱构建原则：后再以切点较多的酶，逐步构建成包括多种限制性内切酶切点相对排列位置的物质图谱。第七章核酸一级结构的序列分析及全基因组分析1.DNADNA（2）Maxam-GilbertDNA,b,c,d(3)DNASBHDNAaDNAbc第九章DNA重组技术-重要基因的鉴别与表达DNA（1）DNA2）选择合适的克隆载体（3）DNA（4）DNA（5）DNA产生特定的DNA片段。A.限制性内切酶降解（全部降解，部分降解；b.机械剪刀；ccDNA；d.人cDNA3.基因组文库：整套基因组片段插入克隆载体所获得的所有的分子克隆的汇集。基因组文库的构建：aDNAbDNA；c.体外连接与包装；d.染大肠杆菌；e.基因组文库的鉴定与扩增。cDNA是由细胞全部mRNAcDNAcDNAa.mRNA；bcDNA；cDNA；d.cDNAecDNA克隆载体：DNA的起点，可以自主复制，是一个复制子。理想载体具备的条件：a.具有自主复制的能力；bDNA；c内切酶的单一识别序列；d.携带易于筛选的选择性标记；e.使用安全。shuttlevectors（穿梭载体）:通常是指那些既能在真核细胞中繁殖又能在原核细胞中繁殖的载体。DNA（1）（2）点穿孔/3）（4）微注射。transformation(转化)：细菌或细胞质吸收质粒DNA细菌或细胞吸收噬菌体DNA基因不能随着靶细胞基因组的复制而复制。基因的稳定表达：外源基因以某种形式整合在靶细胞的基因组中，随着靶细胞基因组的复制而复制。13利用核酸链间互补的性质，选择适当的探针与重组体中的DNA进行DNA-DNADNA-RNADNA基本步骤：a膜或尼龙膜上；b.用NaOHDN