药剂学课件-01-灭菌法和无菌操作法

第十章灭菌制剂与无菌制剂1第一节灭菌法和无菌操作法第二节注射剂第三节输液第四节注射用无菌粉末第五节眼用液体制剂第十章灭菌制剂与无菌制剂2提高药物制剂的安全性保护制剂的稳定性保证制剂的临床疗效目的：第一节灭菌法和无菌操作法3概念灭菌与灭菌法:灭菌（sterilization）是指用物理或化学等方法杀灭或除去所有致病和非致病微生物繁殖体和芽胞的手段。灭菌法（thetechniqueofsterilization）是指杀灭或除去所有致病和非致病微生物繁殖体和芽胞的方法或技术。第一节灭菌法和无菌操作法4无菌与无菌操作法无菌（sterrility）指任一指定物体、介质或环境中，不得存在任何活的微生物。无菌操作法（aseptictechnique）在整个操作过程中利用或控制一定条件，使产品避免被微生物污染的一种操作方法或技术。

第一节灭菌法和无菌操作法5防腐与消毒：防腐(antisepsis)

指用物理或化学方法抑制微生物的生长与繁殖的手段，亦称抑菌。对微生物的生长与繁殖具有抑制作用的物质称抑菌剂/防腐剂。消毒（disinfection）指用物理或化学方法杀灭或除去病原微生物的手段。对病原微生物具有杀灭或除去作用的物质称消毒剂。第一节灭菌法和无菌操作法6灭菌制剂和无菌制剂灭菌制剂：系指采用某一物理、化学方法杀灭或除去所有活的微生物繁殖体和芽孢的一类药物制剂。无菌制剂：系指在无菌环境中采用无菌操作法或无菌技术制备的不含任何活的微生物繁殖体和芽孢的一类药物制剂。第一节灭菌法和无菌操作法7药物制剂规定无菌制剂：

不得检出活菌。非规定无菌制剂（限菌制剂）：

限定染菌的种类与数量。8无菌制剂注射用制剂眼用制剂植入型制剂创伤用制剂手术用制剂注射剂、输液、注射粉针植入片溃疡、烧伤及外伤用溶剂止血海棉、骨蜡滴眼剂、眼用膜剂、软膏剂、凝胶剂9物理灭菌法化学灭菌法洁净技术与无菌操作法灭菌的验证第一节灭菌法和无菌操作法10物理灭菌法化学灭菌法干热灭菌法湿热灭菌法紫外线照射辐射灭菌法过滤灭菌法气体灭菌法药液消毒法第一节灭菌法和无菌操作法高温灭菌法11物理灭菌法原理：利用蛋白质与核酸具有遇热、射线不稳定的特性，采用加热、射线和过滤方法，杀灭或除去微生物。12物理灭菌法干热灭菌法湿热灭菌法紫外线照射辐射灭菌法过滤灭菌法热力灭菌法13高温可破坏蛋白质和核酸中的氢键，导致核酸破坏，蛋白质变性或凝固，酶失去活性，致使微生物死亡。物理灭菌法热力灭菌原理：思考：在同一温度下，湿热灭菌与干热灭菌的效力对比？14细菌在湿热下，菌体吸收水分，蛋白质较易凝固，由于凝固蛋白质所需要的温度与蛋白质含水量有关，蛋白质含水量增加，凝固的温度降低。湿热的穿透力比干热大。湿热灭菌时，水蒸气与物品接触而凝结成水，因而放出潜热（汽化热），加速细菌的死亡。物理灭菌法湿热灭菌的效力大于干热灭菌的原因：15物理灭菌法16火焰灭菌法干热空气灭菌法物理灭菌法干热灭菌法17特点：最迅速、可靠、简便、应急的灭菌法。适用：火焰不易损坏的物品，如药刀、镊子、铂丝、玻棒、玻片等。方法：灭菌物品在火焰中加热20秒钟以上、迅速通过火焰3-4次。火焰灭菌法18干热空气灭菌法灭菌条件：135-145℃灭菌3-5h；160-170℃灭菌2-4h；180-200℃灭菌0.5-1h。适应物品：耐高温的玻璃、金属或陶瓷制品、不允许湿气穿透的油脂类、耐高温的药物，如磺胺类药物、白陶土、滑石粉。优点：可破坏细菌内毒素（热原）；设备简单。缺点：热空气穿透力弱，不均匀、时间长、温度高，不适于橡胶、塑料及大部分药品。注意事项：计时须由灭菌物品全部达到该温度算起。19物理灭菌法干热灭菌法湿热灭菌法紫外线照射辐射灭菌法过滤灭菌法20热压灭菌流通蒸汽灭菌煮沸灭菌低温间歇灭菌物理灭菌法湿热灭菌法特点：蒸气潜热大，穿透力强，易使蛋白质变性，作用可靠，操作简便。缺点：不适于对湿热敏感的药物。21方法：在密闭的热压灭菌器内，利用高压的饱和水蒸气进行灭菌。特点：水蒸气比热大、穿透力强，易使蛋白质变性，灭菌效果好，简单、易推广。适应物品：耐热药物及其水溶液，玻璃、金属、瓷器、橡胶塞、滤膜过滤器等。

不适物品：不耐热压的药品，密度高的固体，半固体（脂肪、植物油等）热压灭菌22手提式热压灭菌器卧式热压灭菌柜水封式热压灭菌塔热压灭菌热压灭菌器种类:共同点：排气口、安全阀、压力表和温度计。不同点：加热方式——煤气、电热、木炭。23热压灭菌2425热压灭菌26方法：于流通的水蒸气中，加热30-60分钟。适应物品：能耐受100℃而不能耐受更高温度的药物制剂的灭菌。缺点：不能保证杀灭所有的耐热芽孢，如破伤风杆菌。所用抑菌剂：甲酚、氯甲酚、苯酚。流通蒸汽灭菌煮沸灭菌27方法：于60-80℃加热60-90min，间隔24h后，再用同法灭菌60-90min，间隔24h再灭菌一次或以上。缺点：费时、工效低、效果差，加入适量抑菌剂可提高灭菌效率。适用药品：必须用热法灭菌但又不耐高温的物料或药品。低温间隙灭菌法28微生物的种类和数量：种类不同，耐热性不同；繁殖期比衰老期的强；数量越少灭菌时间越短。注射液的性质：营养成分糖、蛋白质，可保护微生物；pH中性时细菌耐受力最大，碱性次之、酸性最弱。蒸气的性质：饱和蒸气>湿饱和蒸气>过热水蒸气。灭菌温度和时间：选择最佳条件，保证药液稳定。药物稳定性：稳定性高时可升高温度或延长时间，稳定性低时，可向药液中加入稳定剂或抑菌剂。影响湿热灭菌的因素：29物理灭菌法干热灭菌法湿热灭菌法紫外线照射辐射灭菌法过滤灭菌法30灭菌用波长：200-300nm，灭菌力最强的波长254nm。特点：直线传播，强度与距离平方正反比，易被反射；穿透力弱；对人体有害。适应物品：空气灭菌，表面灭菌。3、紫外线灭菌法31物理灭菌法干热灭菌法湿热灭菌法紫外线照射辐射灭菌法过滤灭菌法32方法：r或β射线，由同位素如Co60产生。适应物品：热敏药物；较厚样品。特点：不升高产品的温度；穿透力强；缺点：设备费用高。灭菌机制：电离辐射直接作用于生命体中的大分子，如蛋白质、核酸、酶等，产生电离、激发或化学键断裂，引起分子发生变化。4、辐射灭菌法334、辐射灭菌法34方法：微波（频率300MHz~300kMHz)照射产生的热能杀灭微生物和芽孢。适合物料：液体和固体物料的灭菌。特点：穿透力强，物料表里热均匀；升温迅速，灭菌时间短。缺点：破损率高；药液品种不同，灭菌效果不同。微波灭菌法35物理灭菌法干热灭菌法湿热灭菌法紫外线照射辐射灭菌法过滤灭菌法365、过滤除菌法方法：用微孔滤器除去微生物。常用器材及举例：微孔滤膜过滤器，孔径0.22μm以下，如CoA，胰岛素溶液。垂熔玻璃漏斗G6，石棉板滤器，白陶土滤柱，适应药品：很不耐热的药物。37方法：风速为30-80m/s，190℃。特点：对小剂量安瓶效果好灭菌时间短，药物降解程度低。其他灭菌法高速热风灭菌法38物理灭菌法化学灭菌法洁净技术与无菌操作法灭菌的验证第一节灭菌法和无菌操作法39方法：用化学药品直接作用于微生物而将其杀灭。目的：减少微生物的数目，控制一定的无菌状态。

化学灭菌法气体灭菌法药液消毒法40气体灭菌法适合物品：适用于环境消毒和不耐热的医用器具、设备和设施等的消毒，亦用于粉末注射剂的消毒。常用的气态杀菌剂：环氧乙烷、甲醛、过氧化氢、臭氧。化学灭菌法41药液灭菌法适合物品：常作为其他灭菌法的辅助措施，适用于皮肤、无菌器具和设备的消毒。常用消毒液：75%乙醇、1%聚维酮碘溶液、0.1~0.2%新洁尔灭溶液、酚或煤酚皂溶液等。化学灭菌法42物理灭菌法化学灭菌法洁净技术与无菌操作法灭菌的验证第一节灭菌法和无菌操作法43对洁净生产厂房的要求空气净化系统无菌操作法洁净技术与无菌操作法44对洁净生产厂房的要求生产区、控制区、洁净区、无菌区洁净技术与无菌操作法药品品种不同、生产工艺不同，对环境的洁净度有不同要求45洁净室的净化度标准洁净度级别尘粒最大允许数/m3(动态)微生物最大允许数

≥0.5μm≥5μm浮游菌/m3沉降菌/皿A1003,5001<1<1B100350,0002,000105C10万3,500,00020,00010050D30万------20010046药品类别100级10000级10万级30万备注无菌药品最终灭菌药品1.大容量注射剂灌封注射剂:稀配,滤过小容量注剂：灌封内包材料：最终处理（精洗等）1.注射剂：浓配、稀配（采用密闭系统的）100级洁净区或10000级背景下的局部100级以下均同含放射性药品和中药制剂非最终灭菌药品1.药液配制(灌装前不需除菌滤过的);2.注射剂：灌封、分装、压塞；3.内包材料最终处理后的暴露环境1.药液配制（灌装前需除菌滤过的）轧盖；内包最后一次精洗的最低要求含放射性药品和中药制剂其他供角膜创伤、手术用滴眼剂的配制、灌装含放射性药品和中药制剂47药品类别100级万级10万级30万级备注非无菌药品非最终灭菌口服液；深部组织创伤外用药品眼用药品腔道用药(直肠用药除外)1.最终灭菌口服液2.口服液固体药品3.表皮外用药品4,直肠用药5.放射免疫分析药盒1.标注在100000级或300000级的各剂型均为生产中暴露工序的最低要求2.含放射性质药品和中药制剂原料药标准中列有无菌检查项目的原料药生产其他原料药的生产暴露环境的最低要求含放射性药品和中药制剂48药品100级10000级10万级30万备注生物制品灌装前不经除菌滤过的制品：配制、合并、灌装、冻干、加塞、添加稳定剂、佐料、灭活剂等1.灌装前经除菌滤过的制品：配制、合并、精制，添加稳定剂、佐剂、灭活剂、除菌过滤、超滤等；2.体外免疫诊断试剂阳性血清分装，抗原-抗体分装1．原料血浆的合并，非低温提取，分装前的巴氏消毒、轧盖及制品最终容量的清洗；2.口服制剂；3.发酵培养密闭系统环境，暴露部分需无菌操作；4.酶联免疫吸附试剂：包装、配液、分装、干燥；5.胶体金试剂、聚合酶链反应试剂(PCR)、纸片法试剂等体外免疫试制6.深部组织创伤用制品，大面积体表创面用制品，大面积体表创面用制品：配制、灌装各类制品生产过程中涉及高危致病因子的操作，其空气净化系统等设施还应符合特殊规定49空气净化系统洁净技术与无菌操作法目的：创造洁净空气。分类：工业净化和生物净化。50方法：空气过滤法空气净化系统过滤方式与机制：表面过滤——拦截作用深层过滤——吸附作用51空气过滤器52中效折叠式空气过滤器53净化空调系统的基本流程54洁净室的设计要求：人员物料内部结构人流、物流和空气流的流向洁净度从高→低。55洁净室的设计56水平层流气流方式示意图57垂直层流气流方式示意图58层流示意图5960无菌操作法方法：整个过程控制在无菌条件下进行。适用范围：不耐热药物的注射液、眼用制剂、皮试液、海绵剂和创伤制剂的制备。步骤：无菌操作室的灭菌和无菌操作。61

无菌操作室的灭菌常采用紫外线、液体和气体灭菌法对无菌操作室环境进行灭菌。常用甲醛溶液加热熏蒸法。气体发生装置（蒸气加热夹层锅）液态甲醛甲醛蒸气鼓风机无菌室关闭熏蒸12~24h湿度﹥60%温度﹥25℃25%氨水除气62甲醛溶液加热熏蒸法的传统气体发生装置63物理灭菌法化学灭菌法洁净技术与无菌操作法灭菌的验证第一节灭菌法和无菌操作法64D值Z值F值F0值灭菌的验证65D值意义：D值为降低被灭菌物品中微生物数至原来1/10或降低一个对数单位（lg100降至lg10）所需的时间。在一定温度下，杀灭90%微生物（或残存率为10%）所需的灭菌时间。lgN0–lgNt=kt/2.303微生物死亡的速度:D=t=(lg100-lg10)*2.303/k66不同灭菌法不同微生物的D值灭菌方法微生物温度介质或样品D值（min）蒸气灭菌嗜热脂肪芽孢杆菌1055％葡萄糖水溶液87.8蒸气灭菌嗜热脂肪芽孢杆菌1215％葡萄糖水溶液2.4蒸气灭菌嗜热脂肪芽孢杆菌121注射用水3.0蒸气灭菌产芽胞梭状芽孢杆菌1055％葡萄糖水溶液1.3干热灭菌枯草芽胞杆菌135纸16.6红外线灭菌枯草芽胞杆菌160玻璃板18秒67Z值

降低一个lgD值所需升高的温度，即灭菌时间减少到原来的1/10所需升高的温度。或在相同灭菌时间内，杀灭90%的微生物所需提