肝纤维化的研究进展教学提纲课件

肝纤维化的研究进展急性肝损伤炎症反应有限的ECM沉积肝实质细胞再生取代坏死或凋亡的细胞慢性肝病持续或反复的炎症坏死ECM大量增生降解活性相对或绝对不足肝纤维化形成肝小叶结构改建、假小叶和结节形成肝硬化肝纤维化是可逆的“谁将阻止或延缓肝纤维化的发生，谁就将治愈大多数慢性肝病！”

——世界著名肝病权威HansPopper教授肝星状细胞（HSC）的活化上皮-间充质细胞转化(epithelial-mesenchymaltransition，EMT)细胞外基质（ECM）的合成与降解失衡相关的细胞因子及信号传导通路Cellularandmolecularmechanisms肝纤维化发生的基本机制HSC的活化HSCScottL.friedman,HepaticStellateCells:Protean,Multifunctional,andEnigmaticCellsoftheLiver.PhysialRev88:125-172,2008.

HSC活化MFBECM生成过量Ⅰ型胶原沉积形成纤维间隔肝小叶结构破坏Ⅳ型胶原酶大量合成释放肝窦功能性基底膜的结构破坏肝窦毛细血管化肝纤维化OlavAGressneretal,Evolvingconceptsofliverfibrogensisprovidenewdiagnosticandtherapeuticoptions,ComparativeHepatology2007,6:7MFB是一种多起源的异质性细胞,呈梭形,特征介于成纤维细胞和平滑肌细胞之间表达平滑肌肌动蛋白(α-SMA),其胞质内有大量平行的肌丝而具有收缩和迁移的能力是组织纤维化过程中产生过量ECM的主要来源细胞

肌成纤维细胞（MFB）上皮-间充质细胞转化(epithelial-mesenchymaltransition，EMT)

纤维增生ECM合成增加“净效应”动态过程纤维分解ECM的降解

ECM的变化肝纤维化的发生、发展和转归参与肝纤维化的关键细胞因子及其信号传导途径候选基因—2003年Bataller等—肝纤维化动物模型促进肝纤维化者:瘦素及其受体、Smad3、TIMP-1、IGF-1、Fas。抑制作用者:纤溶酶原、端粒酶、IFNγ、IL-10、诱导性NO合酶。作用不确定或未知者:TNF、IL-6、IL-13。候选基因——人类肝纤维化促肝纤维化形成的基因IL-10、IL-1β、IL-1受体、TNF-α、MnSOD、免疫应答相关因子(CTL-4、TADP2)、CD14(脂多糖受体)——酒精性肝病TGF-β1、血管紧张素源、TNF-α、微粒体环氧化物水解酶,血色素沉着病基因、ApoE——丙型肝炎肝纤维化Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅵ型胶原、IGFBP-7、Lumican、MMP-7,SPARC——胆道闭锁性(BA)肝病抑制肝纤维化形成的基因Cingulin和MMP-2——胆道闭锁性(BA)肝病宿主遗传因素影响肝纤维化发生单核苷酸基因多态性（SNP）对肝纤维化的影响：干扰素信号转导通路上的基因多态性影响干扰素应答效果Th1及Th2类细胞因子基因多态性影响机体对病毒清除的免疫反应Toll样受体-4、DDX5、TGF-β1、TIMP-1、MMP等参与纤维化发生的重要因子，其基因多态性可能影响纤维化反应多个SNP标志物可建立纤维化危险积分，可用于慢性丙型肝炎患者肝硬化发生危险的预测参与肝纤维化的信号转导通路TGFβ-Smad信号通路Rho-ROCK信号通路

PI-3K信号通路ERK/MAPK信号通路：Ras/ERK信号通路

JAK/sTAT信号通路Wnt信号通路NF-κB信号通路TGFβ/BMP信号传导通路与其它信号通路的Cross-talk

XingGuo,Xiao-FanWang,Signalingcross-talkbetweenTGFβ/BMPandotherpathways,CellResearch(2009)19:71-88

小结肝纤维化的治疗控制原发病因、治疗原发疾病阻断HSC活化抑制减少HSC增殖、分化促进HSC凋亡促进疤痕纤维的降解中医药治疗肝纤维化针对病因治疗阻断HSC活化

减轻炎症损伤J.Poniachiletal,:J.Lzb.Clin,Med.1999;133:342-8050100150200250012345678[甲基-3H]-胸腺嘧啶(DOM/ngDNA,means+SEDLPC=双亚油酰磷脂酰胆碱·

17mM

酒精

·

µMDLPC*+17mM

酒精

······易善复抑制肝星形细胞的增殖

27肝硬化间隔纤维化静脉周围纤维化脂肪正常++++++++++++++++++01234567年Lieber,C.S.etal.:Gastroenterology1994;106:152-9酒精+正常饮食喂养7年的狒狒中

酒精性肝损伤的发展过程2801234567肝硬化间隔纤维化静脉周围纤维化脂肪正常++++++++++++++++++年酒精+易善复饮食喂养的狒狒中

酒精性肝损伤的发展过程

Lieber,C.S.etal.:Gastroenterology1994;106:152-929我们曾经所做的工作（1）和加拿大美尼托巴大学的各位同仁应用大鼠HSC研究了Smad1基因的表达和调控情况，发现Smad1的表达和磷酸化是通过BMP受体调控的，并在HSC活化时增加。并且TGFβ呈时间和剂量依赖性的显著的抑制了HSC中Smad1的表达。此外虽然TGFβ1和BMP2都可以激活HSC，却对HSC的增殖影响的效应却不一样。HongShen,YongpingChen,YuewenGongetcal,Transforminggrowthfactor-β1downregulationofSmad1geneexpressioninrathepaticstellatecells,AmJPhysiolGastrointestLiverPhysiol285:539-546,2003我们曾经所做的工作（2）成功构建将TGFβ1抗原表位基因与HBcAg编码基因融合，并经原核表达，制备成融合蛋白的重组疫苗。经动物实验证明可诱导肝纤维化大鼠产生抗TGFβ1抗体，TGFβ1mRNA表达水平明显下降，TIMP-2的表达显著下降，肝组织纤维化分级明显改善。陈永平，巩跃文等，转化生长因子β1与乙型肝炎病毒核心抗原融合基因的表达和鉴定，ChinJInfectDis,October2005,Vol23,No5卢明芹、陈永平等，转化生长因子β1疫苗对肝纤维化大鼠基质金属蛋白酶-2及基质金属蛋白酶组织抑制因子-2表达的影响，ChinJHepatol,September2006,Vol14,NO.9我们正在做的工作（1）CD4+CD25+调节性T细胞在肝纤维化免疫发病机制中的作用的研究（2）BMP7在肝纤维化中的作用的研究abcabAB

HSC与CD4+CD25+Treg共培养(a)96孔板直接接触性共培养A：HSCB：CD4+CD25+treg(b)Transwell培养小室非直接接触性共培养，生长在膜上的HSC(c)Transwell培养小室非直接接触性共培养，培养在膜下层的CD4+CD25+tregABUNPUBLISEDDATECCK-8法测定不同比例CD4+CD25+Treg与HSC混合之HSC生长增殖曲线--400bp

--500bpBMP7

417bpactin-β452bp---500bp---400bpBMP7mRNA在大鼠肝纤维化模型中的动态变化1234567M注：模型组各时间点与对照组比较：

aP<0.05，bP>0.05

图对照组与模型组各时间点BMP7mRNA水平变化

abbbaa肝纤维化是机体对慢性损伤的主动性修复反应，以肝脏ECM增生与沉积为特征；只有