项目3黄色短杆菌培养基的制备灭菌和优化课件

制药微生物发酵技术----课件项目1项目2项目3项目4项目5制药微生物发酵技术1-2黄色短杆菌培养基的制备、灭菌和优化1黄色短杆菌培养基的制备与灭菌2最佳黄色短杆菌培养基的确定

制药微生物发酵技术告知：

制药微生物发酵技术

1.学会一般培养基的制备原理、方法。

2.掌握培养基及器皿的灭菌方法。引入（任务项目）

？制药微生物发酵技术谷氨酸的产量，第二关键取决于菌种的生长？菌种的生长依靠于?操练

制药微生物发酵技术提出培养基概念→提出流程→称量→溶解→pH→灭菌

制药微生物发酵技术训练项目11黄色短杆菌培养基的制备与灭菌

培养基是根据微生物生长繁殖的营养需要，用人工方法配制而成的基质,其中含有水、碳源、氮源、无机盐及各种生长因子。培养基可为微生物的生长提供能源、组成菌体的原料，调节代谢活动。

不同微生物对营养物质的要求各不相同。因此，配制培养基要根据微生物的营养特点。一般，培养细菌常用牛肉膏蛋白胨培养基，培养放线菌常用淀粉培养基，培养霉菌常用马铃薯培养基，培养酵母菌常用麦芽汁培养基(或麦芽糖、蛋白胨培养基)。制药微生物发酵技术训练项目11黄色短杆菌培养基的制备与灭菌培养基除了要满足微生物生长所要求的各种营养物质外，还应保证微生物所需要的其他生活条件，如适宜的酸碱度，渗透压等，因此，根据不同种类微生物的要求，应将培养基调节到一定的pH范围，如细菌培养基中性偏碱，放线菌培养基偏碱，霉菌、酵母菌培养基偏酸。训练项目1制药微生物发酵技术

根据研究的不同，可以将培养基制成固体、半固体和液体三种形式，固体培养基的成分与液体培养基相同，仅在液体培养基中加入凝固剂作支持物，通常加入1.5～2.0％的琼脂，半固体培养基加入0.3～0.5％琼脂作支持物，有时也可用明胶或硅胶作为凝固剂。1黄色短杆菌培养基的制备与灭菌训练项目1制药微生物发酵技术1黄色短杆菌培养基的制备与灭菌

1.材料马铃薯、蔗糖、牛肉膏、蛋白胨、可溶性淀粉、琼脂、K2HP04、MgS04·7H2O、FeS04·7H20、NaOH、HCl。

2.用具试管、三角烧瓶、漏斗、量筒、吸管、烧杯、纱布、棉花、玻璃棒、pH试纸、铁架台、漏斗架、止水夹、电炉、台秤、硫酸纸、药匙、牛皮纸、线绳、标签纸、剪刀、解剖刀、镊子、白瓷盘、(比色盘)铁丝筐。一、材料和用具训练项目1制药微生物发酵技术1黄色短杆菌培养基的制备与灭菌

1.培养基的制作方法

(1)称量按照培养基的配方，准确称取各成分于烧杯中。

(2)溶解、加热向上述烧杯中加入所需要水量，搅动，然后加热使其溶解。用马铃薯、豆芽等配制的培养基，须先将马铃薯或豆芽按其配方的浓度加热煮沸0.5h(马铃薯须先削皮)并用纱布过滤，然后加入其他成分继续加热使其溶化，补足水量，如果配方中含有淀粉，则需先将淀粉加热煮融，再加人其他药品，并补足水量。

二、方法训练项目1制药微生物发酵技术1黄色短杆菌培养基的制备与灭菌

(3)调节pH值初制备好的培养基往往不能符合所要求的pH值，故需用酸度计，pH试纸或用氢离子浓度比色计来矫正，用0.1mol/LNaOH或lmol/LHCl调至合适的范围。

(4)过滤用滤纸或双层纱布(中间夹一层脱脂棉花)趁热过滤。

(5)分装根据不同的需要，可将制好的培养基分装入试管或三角烧瓶内，管(瓶)口塞上棉塞(或硅胶泡沫塞)，用牛皮纸包扎管(瓶)口。训练项目1制药微生物发酵技术1黄色短杆菌培养基的制备与灭菌

培养基的分装

训练项目1制药微生物发酵技术1黄色短杆菌培养基的制备与灭菌①液体培养基：分装高度以试管高度的1/4左右为宜。②固体培养基：分装试管，每管装液量为管高的1/5，灭菌后制成斜面。分装三角烧瓶的量以不超过1/2为宜；倒平板的培养基每管装15～20mL。③半固体培养基：分装试管一般以管高度1/3为宜，灭菌后制成斜面或垂直待凝成半固体深层琼脂。训练项目1制药微生物发酵技术1黄色短杆菌培养基的制备与灭菌训练项目1制药微生物发酵技术1黄色短杆菌培养基的制备与灭菌(6)灭菌高压蒸汽灭菌，一般培养基0.1MPa，20-30min，含糖培养基为0.05MPa，30min。三、内容训练项目1制药微生物发酵技术1黄色短杆菌培养基的制备与灭菌（一）根据配制培养基的步骤,按下列培养基配方配制培养基。

1.肉膏蛋白培养基(W/V)(培养细菌用)

牛肉膏0.3g琼脂2.0g

蛋白胨1.0g蒸馏水100ML

NaCl0.5gpH7.2-7.4训练项目1制药微生物发酵技术1黄色短杆菌培养基的制备与灭菌

2.马铃薯(PDA)培养基(W/V)(培养霉菌用)

马铃薯20g蒸馏水100mL

蔗糖2.0gpH自然琼脂2.0g

马铃薯汁制备：将马铃薯去皮，称量所需重量，切成小块,加水煮沸30min,纱布过滤，补足水量。制药微生物发酵技术训练项目11黄色短杆菌培养基的制备与灭菌3.高氏1号(W/V)(培养放线菌用)

可溶性淀粉2.0gFeSO40.001gK2HP040.05g琼脂2.0gMgS04·7H200.05g蒸馏水100mLKNO30.1gpH7.6-7.8

NaCl0.05g

配制时，先用少量蒸馏水将可溶性淀粉调成糊状，在沸水浴中搅拌，煮融，再加入其他成分，补足水量，0.1MPa压力，灭菌20min.制药微生物发酵技术训练项目11黄色短杆菌培养基的制备与灭菌（二）培养基制作注意事项

1.加热溶化过程中，要不断搅拌，以免琼脂或其他固体物质粘在烧杯底上烧焦，造成烧杯破裂，加热过程中所蒸发的水分应补足。

2.pH值必须按各种不同培养基的要求准确测定。

3.所用器皿要洁净，勿用铜质和铁质器皿。保证容器外壁无水。制药微生物发酵技术1黄色短杆菌培养基的制备与灭菌训练项目14.分装培养塞时，注意不得使培养基在瓶口或管壁上端沾染，以免引起杂菌污染。5.培养基的灭菌时间和温度，需按照各种培养基的规定进行，以保证杀菌效果和不损失培养基的必要成分，培养基灭菌后，必须放在37ºC温箱培育24h．无菌生长方可使用。制药微生物发酵技术1黄色短杆菌培养基的制备与灭菌训练项目1（三）棉塞制作

棉塞可过滤空气，防止杂菌侵入并可减缓培养基水分的蒸发，所以正确地制备棉塞是培养基制备中重要的一环。正确的棉塞是形状大小，松紧应与试管(或三角烧瓶)完全适合。过紧时妨碍空气流通，操作不便；过松时，空气会毫无障碍地进入试管(或三角烧瓶)中，达不到过滤杂菌的目的。棉塞过小往往易掉进试管内。正确的棉塞头较大，约有1/3在外，2/3在试管内。制药微生物发酵技术1黄色短杆菌培养基的制备与灭菌训练项目1制药微生物发酵技术1黄色短杆菌培养基的制备与灭菌训练项目1目前，有条件的实验室已使用.塑料试管帽、金属试管帽、硅胶泡沫塞替代棉塞，此处介绍棉塞的制作，以备不时之需。制药微生物发酵技术（四）灭菌

1.培养基的高压蒸汽灭菌①需灭菌的物品(分装在试管、三角烧瓶中的固、液体培养基)，棉塞、硅胶泡沫塞等用防潮纸包好(防止锅内水汽把棉塞淋湿)，放人灭菌锅内的套筒中。摆放要疏松，不可太挤，否则阻碍蒸汽流通，影响灭菌效果。训练项目11黄色短杆菌培养基的制备与灭菌②将灭菌锅盖的排气管插入套筒侧壁的凹槽内，关闭灭菌锅盖旋紧螺栓，切勿漏气。

③打开放气阀，加热，热蒸汽上升，以排除锅内冷空气，排气约5～10min，关闭放气阀。训练项目11黄色短杆菌培养基的制备与灭菌制药微生物发酵技术④关闭放气阀后，整个灭菌锅成为密闭状态，而蒸汽又不断增多，这时压力和温度都上升，当温度升至121ºC，压力达0.1MPa时，保持20～

30min，即达到灭菌目的。⑤灭菌完毕，待压力自然降至“0”时，打开放气阀，注意不能打开过早，否则突然降压致使培养基冲腾，使棉塞、硅胶泡沫塞沾污，甚至冲出容器以外。⑥打开灭菌锅盖，取出已灭菌的器皿及培养基。

训练项目11黄色短杆菌培养基的制备与灭菌制药微生物发酵技术2.干热灭菌法常用于空玻璃器皿的灭菌，但凡带有橡胶或塑料的物品、液体及固体培养基等，都不能用于干热法灭菌。进行灭菌时，先将要灭菌器皿(培养皿、吸管的包装方法见示范)包好，放入电热烘箱内，调节温度至160～170ºC，维持1～2h(当温度升至80ºC以上切勿打开烤箱，以免引起玻璃器皿破裂和火灾)。灭菌后，当温度降至30～40ºC时，打开箱门，取出灭菌器皿。训练项目11黄色短杆菌培养基的制备与灭菌制药微生物发酵技术（五）实验步骤

1.按教师指定的小组，每一小组制一种培养基300mL，其中200ml分装于2～

3个锥形瓶中，另外l00mL分装入试管每管5～7mL，灭菌后制成斜面。

2.每一小组制备无菌水1瓶(100mL三角烧瓶中加水99mL，内装少许玻璃珠)，制备无菌水试管4支(每支试管加水9mL)灭菌。

3.每一小组准备lmL塑料吸嘴5支(湿热蒸汽灭菌)，培养皿12套(干热灭菌）。训练项目11黄色短杆菌培养基的制备与灭菌制药微生物发酵技术

写出你所制备的培养基的配方，并分析其中所含物质对微生物生命活动所起的作用。

四、报告训练项目11黄色短杆菌培养基的制备与灭菌制药微生物发酵技术

生物量的测定方法有比浊法和直接称重法等。由于酵母在液体深层通气发酵过程中是以均一混浊液的状态存在的，所以可以采用比浊法（直接比色法）进行测定。用分光光度计测定菌液的OD值，OD值以0.2～0.6为宜(OD值过高，加大稀释倍数；过低，降低稀释倍数)。正交试验是一种最常用的发酵条件优化方法，它可以较少的试验次数得到准确的结果，从而节约大量的人力物力。制药微生物发酵技术⒈菌种黄色短杆菌⒉材料葡萄糖、蛋白胨、牛肉膏、NaCl⒊用具恒温摇床、分光光度计、SBA-40C多功能葡萄糖-谷氨酸分析仪、天平、电炉、三角烧瓶、漏斗、量筒、吸管、烧杯、纱布、棉花、玻璃棒、硫酸纸、药匙、牛皮纸、线绳、标签纸、剪刀制药微生物发酵技术

⒈培养基的配制表

正交表试验设计/g•100mL-1

因素水平葡萄糖(A)蛋白胨(B)牛肉膏(C)NaCl（D）(1)1.00.00.50.5(2)2.01.01.01.0(3)3.02.02.02.0制药微生物发酵技术编号葡萄糖(A)蛋白胨(B)牛肉膏(C)NaCl(D)生物量（OD）0h12h24h36h48h60h1(1)(1)(1)(1)2(1)(2)(2)(2)3(1)(3)(3)(3)4(2)(1)(2)(3)5(2)(2)(3)(1)6(2)(3)(1)(2)7(3)(1)(3)(2)8(3)(2)(1)(3)9(3)(3)(2)(1)制药微生物发酵技术⒉将上述培养基配制好以后，每个250mL三角瓶中装入培养基25mL