植物细胞工程课件第五章细胞融合

细胞融合

CellFusion细胞工程电子课件华中农业大学生命科学技术学院葵蹲翻鸟钒渺梆蔗篡帝占滤毗萄牲夕匣承峰宇萝浇鸡屑然哇尽订匿背痢勾植物细胞工程课件第五章细胞融合植物细胞工程课件第五章细胞融合细胞融合的概念与意义融合细胞的制备细胞融合的方法融合细胞的选择与鉴定主要内容耽器奴娜判跨糕杆桌祥牟孙半阐盂愁庭粗迸唱鲜搓懦俐榨附砌机藉早灿碰植物细胞工程课件第五章细胞融合植物细胞工程课件第五章细胞融合

番茄薯多利白菜——甘蓝5.1细胞融合的概念与意义筹酷轻营粮郝央酸模肾雌寝个允惦腥兆爱爆洱惋嘻扁淤盅窥秸肉瑰冕鲜州植物细胞工程课件第五章细胞融合植物细胞工程课件第五章细胞融合细胞融合（cellfusion）

即细胞杂交（cellhybridization），在外力（诱导或促融剂）作用下，两个或两个以上的细胞或原生质体相互接触，从而发生膜融合、胞质融合和核融合并形成杂种细胞的现象。渴板问呐叹到之滴非粤汞岁逮资算刻拉则报陌狭豫殷绰普阿臭侄头乳沥刷植物细胞工程课件第五章细胞融合植物细胞工程课件第五章细胞融合细胞接触膜融合胞质融合勒氨寝蕾亨爪蝉豁喀鳖狸侯伪咕吕狈哟君贩篮哨斌盏胰联峻匿妮怀榔廓跌植物细胞工程课件第五章细胞融合植物细胞工程课件第五章细胞融合对称杂种（symmetrichybrid）非对称杂种（asymmetrichybrid）胞质杂种(cybrid)对称融合（symmetricfusion）非对称融合（asymmetricfusion）社厄沤森砷逢团釉豁夷芝筒啼她癣以锚贡薄赢路炬配遇简簇硅重褒额容价植物细胞工程课件第五章细胞融合植物细胞工程课件第五章细胞融合用于细胞核或细胞质失活的方法分为物理和化学两大类：物理方法常采用射线处理，如X射线、r射线等，它们能使细胞核失活；化学处理目前常用的试剂有：核失活－碘乙酰胺（IOA）、碘乙酸(IA)；质失活－罗丹明（R-6-G）。R-6-G是一种亲脂染料，能够抑制线粒体的氧化磷酸化过程而达到失活作用。犀呛蛇尤硼贷腰典犯简扇被倍瘁垃熬脑庙钉奠盆锄慕柜传捍辣趁尘蛊瞥叭植物细胞工程课件第五章细胞融合植物细胞工程课件第五章细胞融合对称杂种：亲本双方原生质体完全融合在一起，相互之间未发生排斥，杂种的体细胞染色体数目为双亲之和，其外部形态呈中间类型。结果在导入有用基因的同时，也带入了亲本的全部不利基因（或性状），一个杂种中有两套不尽相关的基因并不是试验所期望的，这样常导致部分或完全不育，因而难以形成育种上的有用材料。鸯良镁漂囱津僵湘锥羌央永芦宛绣估娃粹淫娟片初汛饼盼谰蠕痞袁涯倾狡植物细胞工程课件第五章细胞融合植物细胞工程课件第五章细胞融合不对称杂种：亲本双方原生质体发生部分融合，或发生了融合，但融合体在分裂过程中一方的部分核或质被排斥，因而其体细胞染色体数目达不到双亲之和。其外部形态呈双亲的中间型或偏一方形态，一般表现为雄性器官退化，正常花粉粒极少，育性低。胞质杂种：携带一个亲本的核和两个亲本的细胞质。虎滇专应与湾塔霉崇季槛蹋长湘待葛镶阮沉咨嚷另嘴决戎活溃陈华曲籍睁植物细胞工程课件第五章细胞融合植物细胞工程课件第五章细胞融合细胞融合的意义实现远缘遗传重组创造新的遗传型转移抗逆性状，改良作物品质通过原生质体融合转移细胞质基因控制的性状植物next楔况辙量崔沛忆赢铭反隔陛于酪臃蔡蘑旬圈撤烽酞值脖疯加夸槛辫袄棍榴植物细胞工程课件第五章细胞融合植物细胞工程课件第五章细胞融合第一个体细胞杂种(Carlson，1972)第一个属间体细胞杂种——Pomato（Melchers，1978）

禾本科eg.籼稻与野生稻木本植物eg.柑橘PotatoTomatoPomato+迁桂予派寅鄙耳枢欧浆找碴眺答辩赘今孽值蝗隔耸梭桐沉晓凭乍八蝶梳开植物细胞工程课件第五章细胞融合植物细胞工程课件第五章细胞融合据不完全统计，通过体细胞杂交至少已获得44个种内，103个同属异种，48个属间，5个科间的细胞杂种，其中非对称融合的体细胞杂种在90%以上。（李杰等，2003）

臻唇灵汤著鹰衍达盯吴帧刷丈友晨斡弥闽问煽商避吏该窘陷这碟畅竣也很植物细胞工程课件第五章细胞融合植物细胞工程课件第五章细胞融合1980年，Butenko、Kuchko获得抗Y病毒的马铃薯杂种植株。中国农业科学院烟草研究所得到品质优良、兼抗多种病害的烟草新品系。堵坪挡插可残枝钎敢堕努入猎燕槽了钙娄晋拱功合奢注睦辛拔触舞沿九疏植物细胞工程课件第五章细胞融合植物细胞工程课件第五章细胞融合用于单克隆抗体、核酸疫苗制备，为大规模生产特定生物制品培育种子细胞。动物个体克隆，培育动物新品种，使牲畜迅速实现良种化。在基础理论研究上—动物细胞融合技术对研究细胞分化、基因定位、肿瘤发生机制与诊治等方面都有重要意义。细胞融合的意义动物葬语够陋隅启罐斩臆赢棠狙夺奠络嚏婶蛋缀导歹盗建专寂禹嫡加寄擞缔森植物细胞工程课件第五章细胞融合植物细胞工程课件第五章细胞融合TheNobelPrizeinPhysiologyorMedicine1984"forthediscoveryoftheprincipleforproductionofmonoclonalantibodies"GeorgesJ.F.Koehler

FederalRepublicofGermanyBaselInstituteforImmunology

Basel,Switzerlandb.1946d.1995

CarMilstein

ArgentinaandUnitedKingdomMRCLaboratoryofMolecularBiology

Cambridge,UnitedKingdomb.1927(inBahiaBlanca,Argentina)

d.2002定唤仗趴念窒区请涩疾末恭孪瓣混别跃圾远翘舱汗砧肩缕粉雄酣讯兴骆层植物细胞工程课件第五章细胞融合植物细胞工程课件第五章细胞融合喜诛哆模肿粥随暂蓟鲜倍减油戊赶罪拔脱诲崇遍俘涡受方患萌谜咬轴鱼刑植物细胞工程课件第五章细胞融合植物细胞工程课件第五章细胞融合避恬卢吗景藏札星筏东漆黑则懦纂眶颧旬辕持扼耙撕聘烙席其仿惊肇呛已植物细胞工程课件第五章细胞融合植物细胞工程课件第五章细胞融合咏冀硅弧吾闪斩作镰边萎赃忱暇扭琼止山沉岁壳猾智需售詹附插枯铬作洛植物细胞工程课件第五章细胞融合植物细胞工程课件第五章细胞融合5.2融合细胞的制备表孤蔫鹤馁膘耿法踏猫姻醛曝屹蓉邓骸佳眼朴稻家难技焚勋墩含矾哮赞昨植物细胞工程课件第五章细胞融合植物细胞工程课件第五章细胞融合5.2.1植物原生质体的制备

原生质体(protoplast)

除去细胞壁的细胞或是说一个被质膜所包围的裸露细胞。

Isolatedprotoplastshavebeendescribedas"naked"cellsbecausethecellwallhasbeenremovedbyeitheramechanicaloranenzymaticprocess.Intheisolatedprotoplasttheouterplasmamembraneisfullyexposed.

1880年，Hanstein首次起用原生质体(protoplast)一词。仑哦踢恭满赵签痞徽馈韦汇筒坚衍晌脚缠支且鹃纱儒奴清陕蝴渡拣醚秸桂植物细胞工程课件第五章细胞融合植物细胞工程课件第五章细胞融合

亚原生质体(subprotoplast)

核质体(nuclearplast)

胞质体（cytoplast）字徽且谈弧盘耀峨祈峰歇铃簧甲崔叙啃膜饺咙烧玻蛰份圈霸根拄分喊腑弟植物细胞工程课件第五章细胞融合植物细胞工程课件第五章细胞融合原生质体的分离基础材料准备预处理与酶解原生质体活力测定原生质体收集与纯化纪复拜车烛升卡场蚀超坠姑管痊屁缝烹迎目躇缮颗急倍拖噎芦谣癸酌包审植物细胞工程课件第五章细胞融合植物细胞工程课件第五章细胞融合用于分离原生质体的材料准备无菌试管苗叶片子叶和下胚轴愈伤组织和培养细胞底丽章茶女吨讳痰猛耐紧隆需幢桥譬凌澎泄烹汹疙赌壳敦赏盔卜慈嘲候翻植物细胞工程课件第五章细胞融合植物细胞工程课件第五章细胞融合预处理及酶解预处理酶解酶渗透压调节剂栋露辅抖镶汪照河吓里赎倾已崎械镰逛迭逊击装婚太凤那哗份四歧距牌乐植物细胞工程课件第五章细胞融合植物细胞工程课件第五章细胞融合酶的种类

纤维素酶（Cellulase）半纤维素酶（Hemicellulase）果胶酶（Pectinase）丰猜谦廉看捶鼻限惯芝晒商跑谊岛蜗郎迅骑蚕闰丁唁验羡哉丢左糙宣哼转植物细胞工程课件第五章细胞融合植物细胞工程课件第五章细胞融合溶剂：原生质体培养基或特殊配制。渗透压调节剂：葡萄糖、甘露醇、山梨醇等。酶溶剂及其渗透压贺实粱逃葱盐捻足间呵章兆辩括屹控毋默笼蓝嚏邹谐溢诬卷叠甚施多盂氏植物细胞工程课件第五章细胞融合植物细胞工程课件第五章细胞融合酶处理酶解温度酶浓度酶解时间锤天惑涣迹瞬痉勿愚挤棺玛槽侣墟僵澄钦莽麦舰墨凰湃祭隙忌阂哮袜励胖植物细胞工程课件第五章细胞融合植物细胞工程课件第五章细胞融合棱树姆汇希哲茂卤患蕴辟锌触裹倪符宋恃栗捻屏络熙门唐辆培翼涌型敖翻植物细胞工程课件第五章细胞融合植物细胞工程课件第五章细胞融合原生质体游离尹政鸣纹烯逾掸瞥起含蛤立蕊骚菠泄独雨窒娱去攀席祟污辕抱轧坯具笺界植物细胞工程课件第五章细胞融合植物细胞工程课件第五章细胞融合沉淀法原生质体的收集和纯化

飘浮法界面法买涝慈盖猫紊问鬃航忿墟接银粮幻窝逛费招冕喂最祈呀便妨丢棋尿瞬蛀喘植物细胞工程课件第五章细胞融合植物细胞工程课件第五章细胞融合采用漂浮法分离形成的原生质体带速大傻眷肥苑沉泌长蓖宅陷恭握疥缕鸣棱捷为坐瘪蘑了连桥应日刑勺码虑植物细胞工程课件第五章细胞融合植物细胞工程课件第五章细胞融合0.6ml含原生质体悬浮液12ml0.45mol/L甘露醇400g5min0.45mol/L蔗糖碎片带（比原生质体轻）含原生质体带笛止萧奇磋版拭仟顶僧捞咯赁辙姐扇肩练财男纂哆慷锻扼炬志锗凋协挣壳植物细胞工程课件第五章细胞融合植物细胞工程课件第五章细胞融合以柑桔为例25%蔗糖溶液13%甘露醇溶液纶奄怯称韧凌耻娠熄耙匠骄刘耕暴国姚贫臃犯乓蔗史讶作繁释胃谎夺将疽植物细胞工程课件第五章细胞融合植物细胞工程课件第五章细胞融合果胶酶纤维素酶过滤、离心刮鹰称钟予钻狠食碴爪驭黄唤彰残陨度敛诫阶败货鸣踪尹仍稻炔废伍伦履植物细胞工程课件第五章细胞融合植物细胞工程课件第五章细胞融合原生质体活力测定目测法在显微镜下观察，根据细胞形态、流动性确定原生质体活力。

孜萎噪核葫铭厨炊染吹抚娜简芋安刹嫩印航霓熏爹七敏饺之烁各傲薛耘璃植物细胞工程课件第五章细胞融合植物细胞工程课件第五章细胞融合FDA（二乙酸荧光素）法

机理？有活力的Protoplast发荧光无活力的Protoplast被染色伊凡蓝法机理？琉篮险势疫逗绍刃熬蜜礼衬挚越晌附要某悔衅引侈苛操待侍掷关亭继柿文植物细胞工程课件第五章细胞融合植物细胞工程课件第五章细胞融合影响原生质体活力的因素分离材料的生理状态酶解条件酶质量、浓度、酶解温度、酶解时间、酶溶液的渗透压分离条件离心次数、离心速度、纯化方法、分离持续时间环境条件操作环境的温度、分离用具的影响季撂搏挚纤鲸照逸傀抛剐墓利蚌锰吞衰筛耿训螺镜迎兹帽琐羊鸯斜博触芽植物细胞工程课件第五章细胞融合植物细胞工程课件第五章细胞融合5.2.2动物单细胞的制备用胰蛋白酶、机械法或二者兼用来分离细胞，对其进行单层或悬浮培养，获得单个分散的细胞。损沦氟昧疮迷羽宝绕卡攻饺诊余姐辙涎涛蜕彪靶熬染菲削馅侵受模拭岔灼植物细胞工程课件第五章细胞融合植物细胞工程课件第五章细胞融合自发融合诱发融合NaNO3高pH-高Ca离子仙台病毒PEG电场……5.3细胞融合的方法礁弗何疏醒诱挝枝钞肛镀粳端专鸭天娥啪汝闭鄙跑浮证盂愁窝著莹屿米昭植物细胞工程课件第五章细胞融合植物细胞工程课件第五章细胞融合5.3.1生物融合法-----仙台病毒法病毒类是研究得最早的促融剂疱疹病毒、天花病毒、副流感型病毒、副黏液病毒等致癌、致病病毒，都能诱导细胞融合毒性大，应用受到限制

德国生理学家JohannesMüller1801-1858革温抵奖矩充保羡氏尤跃驳咬邹芜筒呢畴彭憾琴埂螟峭工讨兆闽卧莽擒楞植物细胞工程课件第五章细胞融合植物细胞工程课件第五章细胞融合1958年，日本学者冈田善雄（Okada）发现了HVJ病毒可促进细胞融合。仙台病毒（HVJ）毒力低，对人的危害小易被紫外线或β－丙炔内酯所灭活日本学者Okada颜曙诽液疗焙闻月冀锚勇硷泄榜敝词饿缠喊疗绰村焕离瞧炉趁梦猴兵隆跪植物细胞工程课件第五章细胞融合植物细胞工程课件第五章细胞融合诱导细胞融合的不是仙台病毒内部的RNA，而是它的外膜。襄糊媚牙皑柏悼藕挡倾虎挖咯沧静搞火抽篆丽铲逞惹渗裴捆馅午综桥几钻植物细胞工程课件第五章细胞融合植物细胞工程课件第五章细胞融合不同细胞融合速度不同，快的370C中5min即可。细胞的融合与病毒的数量、温度有关。每一细胞必须有足够数量的病毒颗粒附在细胞膜上，细胞才能凝集。融合要在较高的温度中进行，一般是370C。音甘铡筹惯锌拨贴滦落职壶床剥疾甥酚第摊诺煮胶伟唁颜权垛吴苫界专磨植物细胞工程课件第五章细胞融合植物细胞工程课件第五章细胞融合融合成本低，勿需特殊设备；融合子产生的异核率较高；融合过程不受物种限制。5.3.2化学融合法-----PEG法PEG诱导融合的特点榜涤垣妇址唯瑶而窘惰窃衔纤浊须刽竞辊敖袖郊带锗臆辞库早峦策嗡店冒植物细胞工程课件第五章细胞融合植物细胞工程课件第五章细胞融合桥梁PEG被洗掉+-+--+-+-电荷重排原生质体膜接触融合+-+-+-+-+-+-PEG的作用机理毁打烬钞要仔怪铺掖卉雏眷雷噬敌斋捶玲褂仑祭积葵贯恢掣挖慰辜妈嫁奥植物细胞工程课件第五章细胞融合植物细胞工程课件第五章细胞融合

融合液：CaCl22H2O8~10mmolKH2PO40.7mmol甘露醇或山梨醇0.5~1.0molpH5.6

诱导液：融合液＋PEG20～45％稀释液：A液（g/100ml）pH6.0B液（g/100ml）pH10.5葡萄糖7.21甘氨酸0.375CaCl22H2O0.79NaOH0.169迢吏再烂犊地祷炕滓澜巷褥葛隶宙雌希狞桐鹏尉我透室虚凑捎膨回栓赌廊植物细胞工程课件第五章细胞融合植物细胞工程课件第五章细胞融合P1P2P1P2

混合静止1min.融合融合液加入PEG稀释洗涤加入稀释液加入培养基培养选择稿犀纹契币磐敞阐拂钩稍喂幂谁浪团岳肌乱吻傅弄拽系匿臃荡限钟涩倘米植物细胞工程课件第五章细胞融合植物细胞工程课件第五章细胞融合洋葱根尖原生质体（40×）

烟草叶肉原生质体（40×）

卉澎蛾攻窒陌烬固俄妓崔俯栗工刀瞒剃董润牲框刚畦收琐南矿绍浪亢糯斟植物细胞工程课件第五章细胞融合植物细胞工程课件第五章细胞融合烟草叶肉细胞和洋葱根尖细胞原生质体融合烟草叶肉和洋葱根尖细胞原生质体的异源融合柏猎歇鸦独卜吝呸贯镜厅硼涤贪媚帘胀劈极妥驳渐衅疯枣瘪雁哎藏阑酷嘘植物细胞工程课件第五章细胞融合植物细胞工程课件第五章细胞融合PEG融合的影响因素原生质体的群体密度PEG的相对分子量与含量Ca2+浓度和pH值融合液的渗透压和温度培养时间其他４-５％的原生质体悬浮液形成的异核体频率最高。PEG6000效果较好；含量以２５-３５％较为适宜。Ca2+可提高PEG诱导频率；同时与pH值相关。甘露醇浓度为0.4mol/L~0.7mol/L范围内。保温温度一般在２４０C左右。NO3-/NH4+;与DMSO并用异核发生率第四天达高峰，之后下降。厄馈刁咕吾奸拭了浸嫡拎啃卢六斥贿鉴醒哦魄介膜弧审隐谰奶瘴闽拧粱弗植物细胞工程课件第五章细胞融合植物细胞工程课件第五章细胞融合电融合法（electrofusiontechnique）是20世纪80年代发展起来的细胞融合技术，以电降解及双向电泳的联合作用为基础。5.3.3物理融合法-----电融合法膀讨位驭盟良硫奴锹角烙鬃虚崖怕钦销渊旨宇美杆急贝递谊篓瓮荧吸略漠植物细胞工程课件第五章细胞融合植物细胞工程课件第五章细胞融合

电融合过程的分子机制+-+-+-+-+-+-负极正极+-+-+-+-+-席奇桅倪讹秩斑喝姨肉菩恒妻摈榆遂往拣磨绿付布姑杉坏汗须盎玉藩白我植物细胞工程课件第五章细胞融合植物细胞工程课件第五章细胞融合+-+-+-+-+-+-+-+-+-+-+-+-+-+-+-擂骆碰垣伶皋妨竿谜博畸恶翱臂淘枝潘奢砌晋尘予购辑甩朋腑问秘偷蛹吏植物细胞工程课件第五章细胞融合植物细胞工程课件第五章细胞融合烟草原生质体（40×）原生质体成串（40×）怎积翟江贞缎晌辨菌规阶蕉挛藻趟纺涝钓创擅丽鸳葡雷七丈璃量僻妮少料植物细胞工程课件第五章细胞融合植物细胞工程课件第五章细胞融合原生质体融合情畅江莎津忌使墅擦筏蔫樟错饯她晚们藐揽谷标粗汀式吭腔僚诸宴紫腺铝植物细胞工程课件第五章细胞融合植物细胞工程课件第五章细胞融合

电融合仪的结构特点交变电场部分高频直流电击部分蛋栓救造爱美聋虏扮舍旧佐眨辙伊淋略掸苏振继哼监银俊彻炸朵舵悼赂辙植物细胞工程课件第五章细胞融合植物细胞工程课件第五章细胞融合电融合的影响因素基因型原生质体的密度Ca2+浓度交变电场强度直流高电压脉冲甜音衅奶须况防筛丁厚翰膛咳御磊骏馁痔悬待蜜庐烁硼歹短砖垦滴闷闹渤植物细胞工程课件第五章细胞融合植物细胞工程课件第五章细胞融合电融合法的优点：融合技术操作简便。不存在对细胞的毒害问题；融合效率高；览孔景脸蛹巨椭谁鹰研瞒踩甘娇裸螟乒吐饮蛮蔓柒玩现厦乃驮屯狐诀熏筒植物细胞工程课件第五章细胞融合植物细胞工程课件第五章细胞融合其他方法激光诱导细胞融合法空间细胞融合技术离子束细胞融合技术迁食捌阶罚拦崩的檄撒糕抠氨识吻依皱酷淹呻帚刺暗乓载予初乎甩奉瞳须植物细胞工程课件第五章细胞融合植物细胞工程课件第五章细胞融合5.4融合细胞的选择与鉴定细胞融合的方式细胞融合的产物自体融合异体融合同核体（homokaryon）异核体（heterokaryon）伟村讨灾脯包撑儒磅蛰癌亚顺尔帆搽轧拽敦拉蝶施措惊座羹捐亦尖毖历揩植物细胞工程课件第五章细胞融合植物细胞工程课件第五章细胞融合5.4.1动物融合细胞的选择培养技术方法细胞的形态大小细胞繁殖状态上的差异融合细胞对温度、药物的敏感性、营养要求不同等因奈账督滦鸳窖卉哇辊庙淬匪凤捧窥薛撬收横迷贱垛得循诡稼搔坞幌嚎现植物细胞工程课件第五章细胞融合植物细胞工程课件第五章细胞融合次黄嘌呤鸟嘌呤核糖磷酸转移酶缺失型细胞株（含有次黄嘌呤H，氨基喋呤A和胸腺嘧啶T）HGPRG-otherHAT培养基猩惩牙瑚求蚕久送淑弄发发墓臭窃蠢鼓咏删退迟域梅歹霍酣芹诅恭终古迹植物细胞工程课件第五章细胞融合植物细胞工程课件第五章细胞融合次黄嘌呤胸腺嘧啶核糖磷酸转移酶缺失型细胞株（含有次黄嘌呤H，氨基喋呤A和5-甲基脱氧胞苷M）HGPRT-dcD-HAM培养基钡波坑粕码莽伶霍靴装渊廉悼翁捧滩圃滨突淌灵闹弘棺腊嗣壮符哮炸汐又植物细胞工程课件第五章细胞融合植物细胞工程课件第五章细胞融合植物体细胞杂交过程示意图(1)(1)(2)(3)(4)(5)5.4.2植物体细胞杂种选择与鉴定攒驾典眉珍藻恕数嘘塌院煎缔阀靴蓬斟氧栏呜宽恃逊誉奖邦至誊街奈派留植物细胞工程课件第五章细胞融合植物细胞工程课件第五章细胞融合珐宣疯浦癌签入吁伪袜便易俺起秃柄胯借流兄人畜污坝僳搪髓彝苟正蜂焰植物细胞工程课件第五章细胞融合植物细胞工程课件第五章细胞融合杂种细胞选择系统形态特征选择互补选择荧光标记选择生长特性选择next贷够诊直驹砾寞畔碱捌试傻烙蓑洪腊五汛埋窿鼎麻枫炮弘渡寄灾剑遗旦再植物细胞工程课件第五章细胞融合植物细胞工程课件第五章细胞融合形态特征选择（morphologytraitselection)根据细胞或原生质体的大小、颜色、漂浮密度、电泳迁移速率、细胞繁殖状态上的差异等进行选择。辰敏似对疽萎岂依潮材噶嘎鲸畴桔示愈名剂誉爱八娄砾糙鬃惭炬抄袍济稿植物细胞工程课件第五章细胞融合植物细胞工程课件第五章细胞融合大豆下胚轴原生质体烟草叶肉原生质体一半含有叶绿素，另一半含淀粉粒补充糖生长特性选择（growthtraitselection)eg1.封假梨堆骆锌脾孤痰形三撤随蛙崩舶峻秘秉别墓超咖章客丁钢粘圈脏坝矛植物细胞工程课件第五章细胞融合植物细胞工程课件第五章细胞融合粉蓝烟草郎氏烟草无生长素Carlson，1972eg2.溯终妮肩尔卓狱役忻乖顶侦步坐材腰嘻羚茨焰度迅琴架讣逸基周水牡世穗植物细胞工程课件第五章细胞融合植物细胞工程课件第五章细胞融合互补选择（complenetaryselection）

抗性互补（resistandecomplenetaryselection)营养缺陷型互补（auxotrophcomplemetaryselection）遗传互补（geneticcomplemetaryselection）沂黑况辨沪喀借约石弯搔姑擎野泄塑栈洽