五指毛桃组织培养育苗技术规程

五指毛桃组织培养育苗技术规程范围本文件规定了五指毛桃（FicushirtaVahl）组织培养的外植体、瓶苗培育、瓶苗移植、档案管理等内容。本文件适用于五指毛桃组培苗培育。规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。LY/T1770桉树无性系组培快繁技术规程LY/T1882林木组织培养育苗技术规程LY/T2752林木轻基质无纺布容器育苗技术规程术语与定义LY/T1770和LY/T1882界定的及下列术语和定义适用于本文件。五指毛桃FicushirtaVahl为桑科（Moraceae）榕属（Ficus）粗叶榕（FicushirtaVahl）中五裂叶型的植株，俗名五指毛桃、掌叶榕、五指牛奶等，其干燥根味甘、辛，性平，有去红肿，祛风湿，益气固表等功效。外植体采集选取无病虫害、健壮的当年生嫩枝为外植体。需在连续3d晴天后采集。预处理切取长约2cm～3cm带顶芽茎段，置入干净玻璃瓶中，注入适量洗涤剂和水清洗茎段表面，用自来水反复冲洗干净。灭菌在超净工作台上用75％乙醇浸泡10s～15s，无菌水冲洗1次～2次，然后用添加1滴～2滴吐温80的0.1%HgCl2浸泡并不断摇动，灭菌14min，用无菌水冲洗4次～6次。瓶苗培育培养基配制初代培养基为MS+6-BA1.0mg/L+IBA（0.1mg/L～0.5mg/L）+蔗糖30g/L，增殖培养基为MS+6-BA（0.5mg/L～1.5mg/L）+IBA（0.1mg/L～0.5mg/L）+蔗糖30g/L，生根培养基为1/4MS（大量元素1/4）+IBA（1.0mg/L～2.0mg/L）+NAA（0.1mg/L～0.5mg/L）+AC0.5g/L+蔗糖20g/L，添加卡拉胶均为6.5g/L，pH值调至5.8～6.2。灭菌和存放参照LY/T1770和LY/T1882相关条款执行。培养条件培养室温度26℃±2℃，相对湿度65%～70%，光照强度1000lx～2000lx，每天光照时长10h～12h。及时发现并清除污染材料，定期清洁培养室。初代培养在超净工作台上将消毒好的带顶芽茎段接种在初代培养基中，每瓶接种1段，培养30d～40d，可诱导顶芽萌发，形成单芽或丛芽。增殖培养在超净工作台上将初代培养诱导出的幼芽接种在增殖培养基中培养，每瓶接种4（个或丛）～5（个或丛），培养周期30d～35d。从外植体开始，培养时间超过4年，或继代培养超过40代，宜重新采集外植体更新培养材料。生根培养在超净工作台上从增殖培养获得的芽苗中，切取具3片以上舒展叶片、高2.5cm～3.5cm的芽苗，接种在生根培养基中培养，培养周期为25d～30d。瓶苗移植基质与容器采用轻型基质（基质成分参照LY/T2752相关条款执行）或黄心土作基质，以塑料薄膜袋或无纺布袋为容器，规格为8cm×10cm。移植前2d用50%的多菌灵可湿性粉剂1000倍液淋透基质杀菌。瓶苗炼苗当瓶苗生根率达80%～90%，根长0.5cm～1.5cm时，可在炼苗棚内进行炼苗，炼苗10d～15d，后将瓶盖拧开再炼苗3d～5d。洗苗将经过炼苗的瓶苗和培养基一起倒入清水中，洗净培养基，不要损伤幼苗。选择生长正常、叶片舒展、根系完整、根茎结合处无愈伤组织的芽苗备用。移植移植时先在基质中掘个小孔，将芽苗植入，用基质完全覆盖小苗根部，不要按压基质，以防压断幼根，避免夏季高温时移植。苗期管理遮荫移植后用透光度25%的遮阳网遮荫，阴天可不遮盖，30d后可移除遮阳网水分移植完成后即淋透水，以后做到见干见水，保持基质湿润。养分小苗移植10d左右开始长新叶，可以薄施肥，用1g·L-1的复XX（N-P2O5-K2O=15-15-15）水溶液淋施，7d～10d一次；移植30d后，逐渐增加到用3g·L-1的复XX（N-P2O5-K2O=15-15-15）水溶液淋施，10d～15d一次。除草以“除早、除小、除了”为原则，及时连根拔除杂草。苗木出圃苗高≥20cm，地径≥0.3cm，生长正常，无损伤，无病虫害的苗木可以出圃。有害生物防治病害苗期偶有炭疽病危害，发病后应及时清除病叶，集中焚烧，