动物细胞融合与单克隆抗体的制备(共38张)

知识回顾？？？？再分化？植物细胞杂交技术利用什么原理？用什么方法可以诱导植物细胞融合？一、原理：细胞膜具有流动性细胞的全能性二、诱导方法：电刺激、聚乙二醇植物细胞杂交技术有什么用途？三、用途：获得杂种植株脱分化当前第1页\共有38页\编于星期五\18点动物细胞融合和单克隆抗体当前第2页\共有38页\编于星期五\18点一、动物细胞融合有些细胞的融合是正常的生命活动。如精子与卵细胞的结合。

两个细胞正在融合

受精作用当前第3页\共有38页\编于星期五\18点(一)动物细胞融合的概念

动物细胞融合也称细胞杂交,是指两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的过程。（二）动物细胞融合的过程与植物原生质体融合原理相同，方法类似。杂交细胞:融合后形成的具有原来两个或多个细胞遗传信息的单核细胞。当前第4页\共有38页\编于星期五\18点⑴.原理：1、动物细胞融合的基本原理是什么？2、动物细胞融合的诱导方式是什么？与植物细胞融合的诱导方式有什么不同？

与植物原生质体融合的基本原理相同，即细胞膜的流动性。⑵.诱导方式：物理法：电激、振动、离心化学法：聚乙二醇（PEG）生物法：灭活的病毒例如：仙台病毒当前第5页\共有38页\编于星期五\18点仙台病毒紫外线丧失感染性（不感染细胞）保留融合活性（诱导细胞融合）当前第6页\共有38页\编于星期五\18点细胞A细胞B杂交细胞灭活的病毒物理法化学法当前第7页\共有38页\编于星期五\18点灭活的病毒颗粒黏附于细胞表面细胞膜被病毒颗粒穿通细胞膜连接细胞融合，形成杂交细胞（细胞膜具有一定的流动性）当前第8页\共有38页\编于星期五\18点(三)动物细胞融合的应用1.突破有性杂交方法的局限,使远缘杂交成为可能。2.成为研究细胞遗传、细胞免疫、肿瘤和生物新品种培育等的重要手段。鼠—鸡、鼠—兔、鼠—猴、人—鼠、人—兔、人—鸡、人—蛙、酵母菌—鸡、人—胡萝卜等3、重要用途：制备单克隆抗体。当前第9页\共有38页\编于星期五\18点植物体细胞杂交、动物细胞融合的比较探究点一.细胞工程比较主要用于制备单克隆抗体获得杂种植株意义物理、化学法（同左）灭活的病毒物理（离心、振荡、电刺激）化学（聚乙二醇）诱导方法使细胞分散后诱导细胞融合去除细胞壁后诱导原生质体融合细胞融合的方法细胞膜流动性细胞增殖细胞膜的流动性、植物细胞全能性原理动物细胞融合植物体细胞杂交比较项目克服远缘杂交不亲和性的障碍当前第10页\共有38页\编于星期五\18点思考与探究1.植物体细胞杂交技术与动物细胞融合技术有什么不同？植物体细胞杂交技术与动物细胞融合技术基本相同，不同的是植物体细胞融合前需去掉细胞壁，然后再融合；动物细胞融合是两个体细胞直接融合。诱导融合方法不同：动物细胞诱导融合所用的方法比植物体细胞杂交多一类灭活的病毒诱导；结果不同：植物体细胞杂交培养成了杂种植株，而动物细胞融合只培养出了杂交细胞。当前第11页\共有38页\编于星期五\18点探究点二、单克隆抗体的制备

什么是抗体？

抗体是机体受抗原刺激后产生的、并能与该抗原发生特异性结合的具有免疫功能的球蛋白。

当前第12页\共有38页\编于星期五\18点1、获得抗体的传统方法把某种抗原反复注射到动物体内，然后从动物血清中分离出所需的抗体。缺点：产量低，纯度低，特异性差。当前第13页\共有38页\编于星期五\18点三、单克隆抗体2、抗体是如何产生的？B淋巴细胞抗原增殖分化成浆细胞3、B淋巴细胞有何特点？一种B淋巴细胞能产生一种抗体。当前第14页\共有38页\编于星期五\18点思考：1、在体外培养的条件下，一个B淋巴细胞有没有可能无限增殖？不可能2、我们学过的什么细胞具有这样的能力？癌细胞3、有什么办法让B淋巴细胞也具有这样的能力？细胞融合当前第15页\共有38页\编于星期五\18点人们发现，在动物发生免疫反应的过程中，体内的B淋巴细胞可以产生多达百万种以上的特异性抗体，但是每一个B细胞只分泌一种特异性抗体。要想获得大量的单一抗体，必须克隆单一的B淋巴细胞，形成细胞群。1、请从以上文字资料中找出单克隆抗体的概念用单个B淋巴细胞进行（无性繁殖）克隆，得到的基因型相同的细胞群能够分泌一种化学性质单一、特异性强的抗体，这种抗体就叫做单克隆抗体。当前第16页\共有38页\编于星期五\18点一个B淋巴细胞只分泌一种特异性抗体骨髓瘤细胞（癌细胞）能无限增殖杂种细胞动物细胞培养技术２、实验原理：动物细胞融合创始人：米尔斯坦单克隆抗体既能产生特异性抗体，又能大量繁殖柯勒当前第17页\共有38页\编于星期五\18点如何大量生产单克隆抗体？利用B淋巴细胞产生抗体的功能。利用肿瘤细胞无限增殖的特性。利用细胞融合的技术将两种细胞融合获得具有B淋巴细胞和肿瘤细胞特性的杂交瘤细胞。利用动物细胞培养技术大量培养杂交瘤细胞。当前第18页\共有38页\编于星期五\18点探究三：单克隆抗体的制备过程过程①免疫动物注射抗原的目的是什么？获得能产生相应抗体的B淋巴细胞（浆细胞）诱导细胞融合常用方法是什么？灭活的仙台病毒如何进行筛选？具有筛选作用的培养基（HAT培养基）？种BB、B瘤、瘤瘤、杂交细胞如何获得大量的单克隆抗体？②免疫B细胞和骨髓瘤细胞的制备③细胞融合④杂交瘤细胞的选择培养⑤杂交瘤细胞的筛选⑥分泌单克隆抗体杂交瘤细胞系的建立⑦单克隆抗体的大量制备当前第19页\共有38页\编于星期五\18点

？

？

抗原效应B细胞筛选筛选（AA型、BB型）AB型杂交瘤细胞能产生所需抗体的细胞当前第20页\共有38页\编于星期五\18点过程：抗原小鼠效应B细胞骨髓瘤细胞杂交瘤细胞细胞融合、筛选多孔培养板单个细胞培养，筛选能产生特定抗体的细胞群体外培养体内培养提取出单克隆抗体当前第21页\共有38页\编于星期五\18点考考你！1.在制备单克隆抗体的过程中，选用哪两种细胞进行融合？为什么选择这两种细胞？浆细胞和骨髓瘤细胞浆细胞能产生单一抗体，但不能无限增殖；骨髓瘤细胞能无限增殖，但不能产生单一抗体。当前第22页\共有38页\编于星期五\18点考考你！2、在这过程中进行了几次筛选？分别在哪个步骤进行筛选？两次筛选。第一次在B细胞和骨髓瘤细胞融合以后筛选出杂交瘤细胞；第二次在杂交瘤细胞中筛选出能产生所需抗体的杂交瘤细胞。当前第23页\共有38页\编于星期五\18点知识拓展如何进行杂交瘤细胞的抗体检测及克隆化培养？融合后的细胞经选择性培养基培养后，能存活的细胞就是杂交瘤细胞。但这些杂交瘤细胞并非都是能分泌所需抗体的细胞，通常用“有限稀释法”来选择。将杂交瘤细胞稀释，用多孔细胞培养板培养，使每孔细胞不超过一个，通过培养让其增殖。然后检测各孔上清液中细胞分泌的抗体（常用酶联免疫吸附试验法），那些上清液可与特定抗原结合的培养孔为阳性孔。阳性孔中的细胞还不能保证是来自单个细胞，挑选阳性孔的细胞继续进行有限稀释，一般需进行3～4次，直至确信每个孔中增殖的细胞为单克隆细胞。该过程即为杂交瘤细胞的克隆化培养。当前第24页\共有38页\编于星期五\18点探究四、单克隆抗体的应用

请同学们根据自己所收集的资料，谈谈单克隆抗体的应用。１可用于作为诊断试剂：有准确，高效，快速的优点２可用于疾病治疗３可用于运载药物（作为运载对应疾病的药物的“生物导弹“。）“生物导弹”＝单克隆抗体＋药物当前第25页\共有38页\编于星期五\18点小结当前第26页\共有38页\编于星期五\18点

细胞骨髓瘤细胞细胞融合

浆筛选

瘤细胞

杂交细胞培养选出能产生特定抗体的细胞群继续培养体外培养

体内培养从培养液或小鼠腹水中取出

单克隆抗体当前第27页\共有38页\编于星期五\18点练习：1、动物细胞融合和植物原生质体融合比较，在动物细胞融合中有特殊性的是（）A、融合的原理B、融合的优点C、融合的诱导手段D、融合的过程当前第28页\共有38页\编于星期五\18点练习：2、动物细胞融合的目的中最重要的是（）A、克服远缘杂交不亲和B、制备单克隆抗体C、培育新物种D、生产杂种细胞当前第29页\共有38页\编于星期五\18点练习：3、科学家用小鼠骨髓瘤细胞与某种细胞融合，得到杂交细胞，经培养可产生大量的单克隆抗体，与骨髓瘤细胞融合的是（）

A、经过免疫的B淋巴细胞

B、不经过免疫的T淋巴细胞

C、经过免疫的T淋巴细胞

D、不经过免疫的B淋巴细胞当前第30页\共有38页\编于星期五\18点练习：4.单克隆抗体制备过程中，骨髓瘤细胞和B淋巴细胞诱导融合后，要用特定培养基筛选出杂交瘤细胞，在这种培养基上不能存活增殖的细胞是（）①淋巴细胞②小鼠骨髓瘤细胞③B淋巴细胞自身融合细胞④小鼠骨髓瘤细胞自身融合细胞⑤杂交瘤细胞

A．②④B．①③⑤

C．①②③④D．②③当前第31页\共有38页\编于星期五\18点练习：5、研究单克隆抗体治疗癌症的思路是（）A．利用单克隆抗体特异性地对抗癌细胞B．以单克隆抗体作抗癌药物杀死癌细胞C．抗癌物质在克隆细胞中大量合成D．单克隆抗体携带抗癌药物特异性地与癌细胞结合当前第32页\共有38页\编于星期五\18点练习：6．只能使动物细胞融合的常用诱导方法（）

A．PEG

B．灭活的病毒

C．电刺激D．离心7、“生物导弹”是指（）

A.单克隆抗体B.杂交瘤细胞

C.产生特定抗体的B淋巴细胞

D.在单抗上连接抗癌药物当前第33页\共有38页\编于星期五\18点练习：8、下列关于单克隆抗体的制备和应用的叙述中，不正确的是（）A．B淋巴细胞与骨髓瘤细胞的融合，一般不

需要灭活的仙台病毒或聚乙二醇诱导B．融合后形成的杂交瘤细胞既能无限增殖，又

能产生单克隆抗体C．体外培养时，一个效应B淋巴细胞可以产生

抗体，但不能无限增殖D．单克隆抗体与常规抗体相比，特异性强，灵

敏度高，优越性明显A当前第34页\共有38页\编于星期五\18点在多孔培养板上，在每孔只有一个杂交瘤细胞的情况下，培养得到的细胞群是单个杂交瘤细胞克隆得来的，所以产生的抗体必然是化学性质单一的，特异性强的单克隆抗体。这里的单克隆确有单个细胞克隆的含义，只不过克隆的不是B淋巴细胞，而是杂交瘤细胞。杂交瘤细胞既能迅速大量繁殖，又能产生专一抗体。当前第35页\共有38页\编于星期五\18点2.制备单克隆抗体时，为什么要选用B淋巴细胞和骨髓瘤细胞融合形成杂交瘤细胞？哺乳动物感染抗原后，其体内会形成相应的B淋巴细胞，B淋巴细胞能分泌相应的抗体凝聚或杀死这些抗原。动物在免疫反应的过程中，每一种B淋巴细胞能分泌一种特异性抗体，要想获得大量的特异性抗体，必须使能分泌该单一抗体的B淋巴细胞大量增殖。B淋巴细胞具有产生单一抗体的能力，但不能在体外增殖；骨髓瘤细胞是一种癌细胞，它能在体外培养条件下无限增殖，但不能产生抗体。因此，把一种B淋巴细胞与骨髓瘤细胞进行细胞融合，产生杂交瘤细胞，它会兼有两个亲本细胞的特性──在体外培养条件下能不断增殖，同时能产生出某种特异性的抗体。当前第36页\共有38页\编于星期五\18点知识拓展3.为什么不只用两个而要用多个细胞进行动物细胞间的融合？就目前常用的细胞融合方法来看，不管是用物理的、化学的方法，还是生物的方法，其融合率都不可能是100%。仅用两个细胞融合，其效率太低，不一定能得到融合细胞。更重要的