腹泻病例病原菌检测结果报告

腹泻病例病原菌检测结果报告了解江苏省仪征市腹泻发病及致病菌感染、菌型分布、可疑食物等情况，掌握食源性疾病流行特征、确定危险因素及防治重点，提高对食源性疾病的预警、预防和控制能力。方法对2010年辖区内监测点医院肠道门诊就诊的腹泻患者进行登记，对有明确可疑食物史的患者采集粪便标本，检测沙门菌、副溶血性弧菌、志贺菌、霍乱弧菌，并进行统计分析。结果2010-04/11共监测肠道门诊腹泻患者粪便样115人，在115份粪便标本中，分离培养出14株副溶血性弧菌,志贺菌1株（宋内志贺菌），沙门菌1株（阿贡纳沙门菌）共有16份标本检出致病菌。结论2010年仪征市监测点医院115例腹泻患者病原菌主要为副溶血性弧菌。腹泻是常见的临床症状之一，而且引起腹泻的原因繁多，其中以感染性腹泻最常见，病原微生物种类很多引起该病的病原很多,其中以细菌引起腹泻者占比例最大［1］。感染性腹泻病仍然是当今全球性重要公共卫生问题之一，尤其在发展中国家，其发病率高，危害大,是影响人类身体健康，特别是青少年、儿童生长发育的疾病之一。我国腹泻病发病率很高，感染性腹泻的发病率居传染病之首位。食源性致病菌是食物中毒和食源性疾病暴发的重要因素是食品安全的重要风险隐患［2］，现将仪征市115例腹泻病原菌检测结果报告如下。1材料与方法1.1材料1.1.1标本来源仪征市监测医院2010-04/2010-11肠道门诊就诊的急性腹泻患者（未使用药物）粪便115份，做细菌学鉴定。1.1.2培养基C-B运送培养基、碱性蛋白胨水、GN增菌液、氯化钠结晶紫增菌液、MAC琼脂、SS琼脂、庆大霉素琼脂、氯化钠蔗糖琼脂、营养琼脂、三糖铁琼脂、氯化钠三糖铁琼脂、MH琼脂，以上培养基为杭州天和生物技术有限公司产品且均在有效期内。1.1.3诊断血清霍乱弧菌01群多价诊断血清及0139诊断血清为兰州生物制品研究所产品;志贺菌属诊断血清、沙门菌属诊断血清为浙江天润生物制品有限公司产品;侵袭性大肠埃希氏菌诊断血清、致病性大肠埃希菌诊断血清、大肠埃希菌O157诊断血清为兰州生物制品研究所产品。且各种诊断血清均在有效期内使用。1.2检验方法志贺菌按照GB16002-1995GB16002-1995细菌性痢疾、阿米巴痢疾诊断标准及处理原则；沙门菌、致泻性大肠埃希菌、副溶血性弧菌按照GB17012-1997感染性腹泻的诊断标准及处理原则;霍乱弧菌按照GB15984-1995霍乱诊断标准及处理原则。1.2.1增菌和分离培养将标本分别接种于碱性蛋白胨水、GN增菌液、氯化钠结晶紫增菌液中经37°C18〜24h培养,分别转种于庆大霉素琼脂、SS琼脂、氯化钠蔗糖琼脂、麦康凯琼脂经37C18〜24h培养。1.2.2挑选可疑菌落在庆大霉素琼脂、SS琼脂上无可疑霍乱弧菌生长。在SS琼脂上挑取可疑志贺菌的无色透明或半透明的小菌落以及可疑沙门菌的无色透明或半透明的小菌落有的中心带黑色的菌落做革兰染色为革兰阴性杆菌，接种于三糖铁琼脂37C18〜24h培养;在氯化钠蔗糖琼脂上挑取可疑副溶血性弧菌的圆形隆起、光滑湿润浅蓝色的菌落接种于3.5%氯化钠三糖铁琼脂再经37C18〜24h培养做生化试验；麦康凯琼脂上挑取3~5个乳糖发酵或不发酵的氧化酶阴性和革兰染色阴性的菌落接种于三塘铁琼脂37C18〜24h培养。1.2.3生化试验各个选择性培养基中挑取的可疑菌落根据37C18〜24h培养后的三糖铁反应，做生化试验（表1〜表4）。副溶血性弧菌的动力阳性，用霍乱弧菌血清凝集为阴性,排除霍乱弧菌。做嗜盐性试验,接种于不同浓度的盐胨水中，37C24h培养后观察生长情况，在无盐及11%盐胨水中不生长，在7%盐胨水中生长旺盛。表4大肠埃希菌生化试验生化项目结果生化项目结果硫化氢-赖氨酸-PH7.2尿素-靛基质+氰化钾-三糖铁底层+1.2.4血清学试验生化反应符合沙门菌、志贺菌及大肠埃希菌的相应用沙门菌、志贺菌、侵袭性大肠埃希菌、致病性大肠埃希菌、大肠埃希菌0157抗血清与三糖铁斜面上生长的菌苔进行玻片凝集试验，同时做生理盐水对照。2结果在115份粪便标本中符合上述生化和血清学实验的共有16份标本，其中分离培养出副溶血性弧菌14株,志贺菌1株（宋内志贺菌）,沙门菌1株（阿贡纳沙门菌），其余标本均未检出沙门、志贺、副溶血性弧菌、霍乱弧菌、以及侵袭性大肠埃希菌、致病性大肠埃希菌、大肠埃希菌0157。3讨论在115份腹泻便标本中有16份标本检出病原菌,99份便标本均未检出常见的肠道致病菌，经分析，可能原因为：①引起某些患者腹泻的病原菌是某些（种）能引起类似痢疾腹泻症状的非常规检测的细菌或该次实验的非目标菌（如除霍乱和副溶血性弧菌之外的其他致病性弧菌）。有些引起腹泻的非常规检测的细菌由于处于非可培养状态（例如空肠弯曲菌用血平皿、SS平板就培养不出来）或本实验室现有的培养基与培养技术、培养条件不适合这种微生物生长（例如小肠结肠炎耶尔森氏菌等），或者其生长需要苛刻的条件,都会导致现阶段分离培养不出该病原菌。②实验室人员在做便培养时，应该用接种环挑取便标本的黏液或脓血部分，否则由于菌量少，病原菌培养不出来，阳性率降低，这也是分离步骤中很重要的一环。③在对可疑菌进行试探性玻片凝集时，血清和细菌的比例应适当。如果血清量相对较少，细菌溶在其中而形成的高浓度的菌液很容易掩盖凝集反应，在分离产毒性大肠埃希菌08:K40K47这株菌时由于细菌的抗原性不强，微弱的凝集反应就很容易被忽略，从而易造成假阴性的判断。④便标本中由于普通大肠埃希菌是优势菌,所以在分离培养时会受到它的干扰。将增菌后的便标本划线接种在SS平板上培养，会发现大量的发酵乳糖的粉红色菌落,同时将SS培养基染成粉红色，而志贺菌在SS上则是圆形、光滑、湿润、无色透明、针尖样大小的菌落如果志贺菌不是优势菌，甚至数量很少的话，它散布在这些干扰菌中，不仔细观察，很容易漏掉，故阳性率容易降低。致泻性大肠埃希菌是（DiagrrheagenicEscherichiacoli，DEC）是引起人体以腹泻症状为主的全球性疾病的常见病原菌，按目前国际上的分类主要包括6类,即肠致病性大肠埃希菌（EPEC）、肠产肠毒素大肠埃希菌（ETEC）、肠侵袭性大肠埃希菌（EIEC）、肠出血性大肠埃希菌（EHEC）和肠集聚性大肠埃希菌（EAEC）以及近来发现的肠产志贺样毒素且具有侵袭力的大肠埃希菌（ESIES）［3〜6］。EPEC是引起全球婴幼儿急、慢性腹泻和成年人散发腹泻的一类重要病原菌，亦可导致幼儿营养不良［7］。该菌的生化反应很不典型［8］对于那些致病菌含量很低且生化特征与普通大肠埃希氏菌相似的病原体，直接划线培养很难挑出目的菌；当增菌再分离培养时，增菌虽能增殖目的菌，但杂菌增长速度过快反而会掩盖目的菌的检测；在挑选可疑菌落时，如果经验不足，也可导致无法正确识别可疑菌菌落。因此该方法对致泻性大肠埃希菌尤其是生化非典型的菌株进行细菌鉴定时误检率和漏检率较高［9,10］。⑤鉴于99份便标本均未检出常见的肠道致病菌,分析推断不排除是由于某些消化道病毒、原虫或寄生虫等原因引起的腹泻。最近几十年来，引起腹泻的病原菌种类发生了很大的变化，而且仍然处在继续变化中，以往腹泻常是由外源性的致病微生物（如志贺菌属、沙门菌属等）感染了健康、无免疫力的宿主而引起的。仪征市115份腹泻便标本中检出志贺菌、沙门菌、副溶血性弧菌共16株,阳性率为13.9%(16/115)。志贺菌1株,占6.25%;副溶血性弧菌14株,占87.5%;沙门菌1株占6.25%。从中可以看出该市主要以副溶血性弧菌引起的腹泻为主，符合以往的食物中毒资料，导致食源性疾病的风险较高［11］。随着人民生活水平的提高，在夏秋季，海产品在人们饮食中所占比例越来越高，加之年轻人外出宵夜也日渐增多，在海鲜食品与宵夜食品加工过程中,普遍存在加热时间短、灭菌不彻底等问题，当食用污染的海产品与宵夜食品时即可造成由副溶血性弧菌引起的腹泻。可致本菌食物中毒的传染媒介主要为海蜇、黄鱼、带鱼等海产品，以及鲫鱼、鲤鱼等淡水鱼；其次是肉、咸蛋类等。一般在进食带有副溶血性弧菌的食物后，急起腹痛、腹泻、头痛、发热，重者常有脱水，全身痉挛，神志