方法的选择和建立

第一页，共四十七页，编辑于2023年，星期六3.1分析质量控制3.1.1标准物质和标准分析方法(1)标准分类1988年《中华人民共和国标准化法》\国家标准行业标准地方标准企业标准第二页，共四十七页，编辑于2023年，星期六（2）标准物质是一种或多种经确定了高稳定性的物理、化学和计量学特性，并经正式批准可作为标准使用，以便用来校准测量仪器、评价方法或给材料赋值的物质或材料。标准物质的作用校准仪器分析标准验证方法分析质量控制第三页，共四十七页，编辑于2023年，星期六标准物质分类基准标准物质ultimatestandard标准参考物质standardreferencematerail第四页，共四十七页，编辑于2023年，星期六(3)标准方法权威机构审批和发布我国的国标法第五页，共四十七页，编辑于2023年，星期六3.1.2分析质量控制把分析误差控制在允许范围内，保证分析结果的准确性和精确性实验室内部质量控制（1）空白实验:纯水代替试液，其他步骤一样。（2）标准曲线:计算标准曲线的直线回归方程和相关系数第六页，共四十七页，编辑于2023年，星期六（3）质量控制图精密度控制图上、下警告限上、下控制限准确度控制图：利用回收率及其标准偏差进行计算x±2Sx±3S第七页，共四十七页，编辑于2023年，星期六3.2计量认证（略）

为社会提供公正数据的产品检验机构，必须经省级以上人民政府计量行政部门对其计量检定、测试能力和可靠性考核合格。第八页，共四十七页，编辑于2023年，星期六3.3药物分析方法的选择和建立了解被测组分的性质，查阅文献、参考书现有的科研条件选择适当的方法试验方案的确定和试验准备试验的开展和试验方案的修正试验数据的整理论文的形成第九页，共四十七页，编辑于2023年，星期六方法分析方法免疫学方法液质联用气相色谱高效液相色谱气质联用第十页，共四十七页，编辑于2023年，星期六3.4药物分析方法的验证和质量控制确定药物或其代谢产物的方法必须具备以下特点:灵敏度精确性特异性准确性第十一页，共四十七页，编辑于2023年，星期六灵敏度检测方法能够定量的最小药物浓度必须大于药物在体内最大浓度的10%.

最小定量值(LOQ):1/10最大浓度(Cmax)第十二页，共四十七页，编辑于2023年，星期六特异性检测方法必须能将检测物和同时服用的其他混合物区分开第十三页，共四十七页，编辑于2023年，星期六3.4.1药物分析方法的验证与质量控制特异性检出限(LOD)定量限(LOQ)线性相关检测范围精确性准确性稳定性第十四页，共四十七页，编辑于2023年，星期六1、验证-特异性特异性研究应该在化验分析阶段展开必须清楚的阐述特异性过程特异性必须用结构近似的对照物加以验证结果的选择是基于科学的判断第十五页，共四十七页，编辑于2023年，星期六验证-特异性第十六页，共四十七页，编辑于2023年，星期六2、验证-检出限(LOD)（三）检测限（limitofdetection，LOD）检测限系指试样在确定的实验条件下，被测物能被检测出的最低浓度或含量。是限度检验效能指标，无需定量测定，只要指出高于或低于该规定浓度即可。第十七页，共四十七页，编辑于2023年，星期六2、验证-检出限(LOD)各种可能的方法感官评价被测物可被可靠检测出的最低限度信噪比3:1可以接受斜率和回应值标准偏差

LOD=3.3σ/S

σ=回应值标准偏差S=标定曲线斜率第十八页，共四十七页，编辑于2023年，星期六3、验证-最小定量值(LOQ)根据信噪比可信的定量信噪比为10:1根据回应值和斜率LOQ=10σ/S

σ=回应值标准偏差S=标定曲线斜率第十九页，共四十七页，编辑于2023年，星期六验证-LOD/LOQ 推荐数据:LOD,LOQ和确定LOQ的方法都应该被说明各种限值的确定必须建立是在适当的受试样本数量的基础上得出第二十页，共四十七页，编辑于2023年，星期六验证-LOD第二十一页，共四十七页，编辑于2023年，星期六LOQ,LOD和SNR定量限

(LOQ)检出限(LOD)信噪比(SNR)干扰线值峰A

LOD峰B

LOQ基线验证第二十二页，共四十七页，编辑于2023年，星期六4、验证-线性应该在研究阶段,通过所期望的浓度范围来评价至少应该在浓度范围内选择5组浓度进行试验相关系数,y-回归斜率和偏差平方和必须准确得出分析回归线偏差得到线性相关第二十三页，共四十七页，编辑于2023年，星期六验证-线性第二十四页，共四十七页，编辑于2023年，星期六5、验证-范围指达到一定精密度、准确度和线性的条件下，测试方法适用的高、低限浓度或量的区间。在线性研究中得到特异性范围,此范围应该含盖某些研究中可能出现的特殊数值范围应该在科学准确的信息指导下进行划分范围的确定可因测定项目不同而有不同要求：含量测定范围为80%-120%；含量均匀度范围为70%-130%；杂质测定应为被测杂质限度的50%-120%；溶出度应为测定范围的±20%。第二十五页，共四十七页，编辑于2023年，星期六6、验证-精确性（precision）

精密度是指在规定条件下，同一个均匀样品，经多次取样测定所得结果之间的接近程度。用偏差（d）、标准偏差(SD)、相对标准偏差(RSD)（变异系数，CV）表示。

通过定量受试物样品峰值来评价试验的精确度精确性必须在至少3组试验浓度下进行验证(高/中/低)根据试验样品数量和可信区间,精确度应该以回收百分率的形式报出第二十六页，共四十七页，编辑于2023年，星期六偏差（d）：测量值与平均值之差

允许差：容量分析（中和法、非水滴定法、银量法、络合滴定法、重氮化法、氧化还原法）≤0.3%；重量法≤0.5%；氧瓶燃烧法≤0.5%；仪器分析≤3%、凯氏定氮法≤1%（A-平均值）/平均值×100%相对偏差＝第二十七页，共四十七页，编辑于2023年，星期六标准（偏）差（SD或S）相对标准（偏）差（RSD），也称变异系数（CV）第二十八页，共四十七页，编辑于2023年，星期六验证-精确性LQCMQCHQC第二十九页，共四十七页，编辑于2023年，星期六7、验证-准确性可重复性浓度含盖了特异性范围试验中各参与要素的准确性如日期,受试物,设备可重现性判断其分析是否发生在特定的时期数据提供标准,偏差系数和可信区间等数据都应该和准确度附在一起第三十页，共四十七页，编辑于2023年，星期六准确度（accuracy）准确度是指用该方法测定的结果与真实值或参考值接近的程度，用百分回收率表示。测定回收率R（recovery）的具体方法可采用“回收试验法”和“加样回收试验法”。回收试验空白+已知量A的对照品（或标准品）测定，测定值为M

第三十一页，共四十七页，编辑于2023年，星期六

加样回收试验已准确测定药物含量P的真实样品+已知量A的对照品（或标准品）测定，测定值为M第三十二页，共四十七页，编辑于2023年，星期六

数据要求规定的范围内，至少用9次测定结果评价，如制备高、中、低三个不同浓度样品各测三次。

原料药可用已知纯度的对照品或样品进行测定，或用本法所得结果与已建立准确度的另一方法测定的结果进行比较。第三十三页，共四十七页，编辑于2023年，星期六

制剂可用含己知量被测物的各组分混合物进行测定，即采用在空白辅料中加入原料药对照品的方法。如不能得到制剂的全部组分，可向制剂中加入已知量的被测物进行测定，或与另一个已建立准确度的方法比较结果。中药分析的准确度一般用加样回收试验衡量。中药回收率一般要求在95～105%范围内，有些方法操作步骤繁多时，可要求在90～110%范围内。RSD一般在2%以内。第三十四页，共四十七页，编辑于2023年，星期六验证-精确性/准确性精确性/准确性:第三十五页，共四十七页，编辑于2023年，星期六验证-精确性/准确性1天内:天:第三十六页，共四十七页，编辑于2023年，星期六验证-精确性/准确性精确性/准确性校准因素:第三十七页，共四十七页，编辑于2023年，星期六验证-精确性/准确性FDA精确性同一试验不同试验间正常:<15%最低定量限:<20%准确性同一试验不同试验间正常:<15%最低定量限:<20%第三十八页，共四十七页，编辑于2023年，星期六8、验证-可靠性可靠性必须在动态试验条件中得到验证在参数变化时,能够显示出其分析方法的可靠性当发生某种改变时,试验应可以被有效控制,这种控制必须得到充分的验证第三十九页，共四十七页，编辑于2023年，星期六验证-可靠性实例:分析溶液的可靠性流动相PH值变化的影响流动相组分变化的影响温度和流速的影响提取条件pH和提取时间第四十页，共四十七页，编辑于2023年，星期六验证-可靠性第四十一页，共四十七页，编辑于2023年，星期六验证-回收率回收率:提取效率分析方法一致准确性可重现回收率:80%75%91%97%65%73%平均:81.1%变异系数:14.7%回收率:15%16%13%15%16%14%平均:14.8%变异系数:7.9%第四十二页，共四十七页，编辑于2023年，星期六9、验证-稳定性所需数据凝固和融化稳定性短期温度稳定性长期稳定性母液稳定性制剂稳定性样品分析前的稳定性评估第四十三页，共四十七页，编辑于2023年，星期六3.4.2各种含量测定方法对效能指标的要求1.容量分析法：用原料药精制品(含量>99.5％)或对照品考察方法的精密度，相对标准差一般应不大于0.2％；进行回收率试验。回收率一般在99.7～100.3％之间。

第四十四页，共四十七页，编辑于2023年，星期六

2.UV法：用适当浓度的精制品进行测定，其RSD一般不大于1％。制剂的测定，回收率一般应在98％～102％之间。线性：吸光度A一般在0.2～0.7，浓度点n＝5。用浓度c对A作线性回归处理，得一直线方程，r应达到0.9999(n＝5)，方程的截距应近于零。第四十五页，共四十七页，编辑于2023年，星期六

3.HPLC法：