临床血液学检验技术-第四章-第三节-叶酸、维生素B12测定-课件

第一章造血及造血调控第一节造血器官与造血微环境临床血液学检验技术第四章红细胞检验技术第三节叶酸、维生素B12测定血清和红细胞叶酸测定血清维生素B12测定血清维生素B12吸收试验血清内因子阻断抗体测定目录重点提示叶酸、维生素B12测定项目叶酸、维生素B12测定的临床价值一、血清和红细胞叶酸测定1.放射免疫分析法【实验原理】放射性竞争性蛋白结合法原理是向受检者血清中加入一定量的结合蛋白和放射标记的叶酸，使受检血清中的叶酸与放射标记的叶酸竞争性地与结合蛋白结合，用吸附剂去除游离的标记叶酸后，检测其放射活性。其活性与受检血清（红细胞）叶酸含量成反比，与已知标准管对照，计算出叶酸含量。【参考区间】血清叶酸：成年男性8.61～23.8nmol/L；女性7.93～20.4nmol/L。红细胞叶酸：成人340～1020nmol/L。（放射免疫分析法）2.化学发光免疫分析法【实验原理】待测叶酸与叶酸结合蛋白（FBP）-抗叶酸结合蛋白偶联物中的FBP结合，形成一种带负电荷的聚阴离子FBP复合物。将此复合物移至纤维杯中，纤维杯表面带正电荷的玻璃纤维静电捕获带负电荷的FBP复合物，再于纤维杯中加入蝶酸-碱性磷酸酶共轭体与复合物中未被占据的FBP位点结合，洗涤后加入底物4-甲基伞花基磷酸钠，底物被碱性磷酸酶水解掉磷酸基而发出荧光，通过光学装置检测该荧光产物，进而检测叶酸的含量。【参考区间】血清叶酸：5.3～14.4μg/L；红细胞叶酸：192.1～577.1μg/L。（化学发光免疫分析法）一、血清和红细胞叶酸测定【临床意义】1.叶酸缺乏最早的实验室表现为血清叶酸降低；红细胞叶酸的水平能反映机体叶酸的总体水平及组织的叶酸水平。2.叶酸减低见于：叶酸缺乏引起的巨幼细胞贫血；也可见于红细胞过度增生；叶酸吸收障碍，如慢性腹泻、乳糜泻、小肠切除、服用抗癫痫药等；叶酸利用增加的疾病，如溶血性贫血、骨髓增殖性疾病、甲状腺功能亢进、恶性肿瘤等。一、血清和红细胞叶酸测定【应用评价】叶酸测定常用的方法有ELISA法、RIA法和化学发光法等。1.ELISA法简便易行、经济，但易受温度、酸碱度变化的影响。2.RIA法可靠、快速、精确，且可同时检测维生素B12，但存在试剂有效期短和辐射污染等问题。3.化学发光免疫分析法灵敏性高，特异性好，检测快速，同时克服了放免法试剂有效期短和辐射污染问题。但需要全自动发光免疫分析仪及与仪器配套的试剂，检测成本较高。一、血清和红细胞叶酸测定二、血清维生素B12测定1.放射免疫分析法【实验原理】抗氧化剂和氰化钾在碱性环境下（pH＞12），将人血清中的维生素B12从载体蛋白中释放出来，与加入的57Co标记的维生素B12竞争结合固定在微晶纤维颗粒上的维生素B12结合物，去除未结合的标记维生素B12，检测其放射活性，对照标准曲线，即可检测血清中维生素B12的含量。【参考区间】成人（60岁以下）：148～660pmol/L；60岁以上（包括60岁）：81～590pmol/L。（放射免疫分析法）2.化学发光免疫分析法【实验原理】待检血清中的维生素B12与内因子（IF）包被的微粒相结合，形成维生素B12-IF-微粒复合物。当复合物被转移到纤维杯上时，复合物中的微粒可结合到纤维杯表面的玻璃纤维上，并与再加入的维生素B12-碱性磷酸酶共轭体结合，形成维生素B12-IF-微粒-共轭体复合物。洗去未结合的游离物质，加入发光底物4-甲基伞花基磷酸钠，底物被碱性磷酸酶水解掉磷酸基而发出荧光，通过MEIA光学装置检测该荧光产物，进而检测维生素B12的含量。【参考区间】187～1059ng/L，＜157ng/L时为维生素B12缺乏。（化学发光免疫分析法）二、血清维生素B12测定【临床意义】1.血清维生素B12减低对巨幼细胞贫血诊断及病因分析有重要价值。2.血清维生素B12增高可见于白血病、真性红细胞增多症、某些恶性肿瘤和肝细胞损伤等。【应用评价】测定血清维生素B12的方法包括放射免疫法和化学发光免疫分析（CLIA）。临床多应用化学发光免疫分析方法检测。根据标记物的不同，CLIA可分为直接化学发光免疫分析、化学发光酶免疫分析和电化学发光免疫分析三类。化学发光酶免疫分析技术（CLEIA）对血清维生素B12进行测定，具有灵敏度高、线性范围宽、安全性好、分析方法简便快速、结果稳定性高等优点。二、血清维生素B12测定三、血清维生素B12吸收试验【实验原理】血清维生素B12吸收试验（又称Schilling试验）。原理是给受检者口服放射性核素57Co标记的维生素B120.5μg，2小时后肌注未标记的维生素B121mg，收集24小时尿测定57Co排出量。尿排泄低于正常者应再另外服用动物源性的内因子并重复上述试验，以确定吸收不良能否被纠正。【参考区间】吸收正常者尿排泄的放射性活性为7%以上。（核素标记法）第三节叶酸、维生素B12测定第三节叶酸、维生素B12测定通过尿排泄方法推测维生素B12缺乏的病因。三、血清维生素B12吸收试验【临床意义】巨幼细胞贫血＜7%，恶性贫血＜5%。若恶性贫血患者补充内因子后维生素B12重吸收得到恢复，表明维生素B12缺乏是由于内因子缺乏引起的，而不是肠道因素。【应用评价】本试验主要可对维生素B12缺乏的病因进行分析，而不是诊断是否存在维生素B12缺乏。该试验是目前检测维生素B12吸收的“金标准”。由于该试验费用高、放射性废物处置以及动物源性组织应用于人体等问题，目前已很少应用。第三节叶酸、维生素B12测定三、血清维生素B12吸收试验四、血清内因子阻断抗体测定【实验原理】维生素B12要与胃壁细胞分泌的内因子形成复合物后才能被吸收。血清内因子阻断抗体(intrinsicfactorblockingantibody，IFBA)通过阻断IF与维生素B12的结合而影响维生素B12的吸收。用57Co标记的维生素B12与血清中的IF结合，形成57Co维生素B12-IF复合物；当存在内因子抗体时，形成的复合物量减少。检测其放射活性，与阳性对照管进行比较，可检测内因子抗体。【参考区间】健康人为阴性，比值≤1.00±0.10。比值≥阳性对照血清比值±0.10为阳性。（放射免疫法）第三节叶酸、维生素B12测定【临床意义】