修改要求你标注

三黄鸡NLRP3基因组织表达和分布研究导师：宁章勇教授研究生：叶锦辉Ppt模板的背景色有点深，是够可以浅一些！下面是不是要有时间！实验目的与意义实验技术路线结果讨论总结致谢汇报提纲目的与意义NLRP3炎性复合体作用1.天然免疫应答

天然免疫应答是机体抵御病原生物入侵的第一道防线。宿主天然免疫细胞胞浆内存在的NLRP3炎性复合体可识别胞内感染的病原微生物及其产物并激活NLRP3炎性复合体，启动机体免疫防御反应。2.参与炎症反应

NLRP3炎性复合体参与多种细菌、病毒、内源性危险信号的炎症反应。目的与意义不能完全照抄你师兄的，尤其是后面那张图片，你自己再找一张机制图吧！目的与意义NLRP3炎性复合体的激活机制这张图一定要更换，这是你志强师兄用过的图片！目的与意义实验目的多种细菌、病毒可激活NLRP3炎性复合体，引起炎症反应三黄鸡是华南地区最重要的优质肉鸡品种

通过实时荧光定量PCR和免疫组化，确定了NLRP3炎性复合体在三黄鸡各个组织中NLRP3的mRNA相对表达水平及NLRP3蛋白的组织分布，这有助于阐明不同组织中的NLRP3在鸡炎症性疾病中的作用，也为NLRP3在不同物种的功能和进化研究提供了基础数据实验技术路线1.三黄鸡NLRP3基因的克隆三黄鸡的肝脏液氮研磨提取RNART-PCR获得cDNAPCR获得三黄鸡NLRP3基因完整CDS区与克隆载体连接转化、培养质粒提取PCR或酶切鉴定

测序，软件分析实验技术路线2.Real-timePCR检测三黄鸡NLRP3基因mRNA水平三黄鸡8个组织液氮研磨提取RNART-PCR获得cDNA利用相对定量的方法，采用Real-timePCR检测三黄鸡NLRP3基因mRNA水平实验技术路线3.三黄鸡NLRP3基因的克隆PCR扩增含酶切位点的片段PET32α（+）-NLRP3质粒构建PET32α（+）-NLRP3质粒PCR鉴定质粒PET32α（+）-NLRP3的双酶切鉴定重组质粒测序及分析NLRP3蛋白的诱导表达SDSWesternBlotting免疫印迹检测NLRP3重组蛋白的纯化NLRP3蛋白多克隆抗体的制备WeSTernblotting检测抗体特异性实验技术路线4.三黄鸡NLRP3蛋白免疫组织化学检测组织固定切片制作灭活内源性酶

高压修复孵育一抗、二抗DAB显色苏木素复染脱水封片镜检拍照结果1.1三黄鸡NLRP3基因的克隆和质粒鉴定结果1.2

三黄鸡NLRP3基因序列分析NLRP3基因的同源性比较NLRP3基因的系统进化树结果NLRP3蛋白的疏水性分析NLRP3蛋白信号肽的预测分析结果NLRP3蛋白的保守结构域分析NLRP3蛋白的二级结构分析结果2.1NLRP3片段和β-actin片段的鉴定荧光定量三黄鸡NLRP3基因和β-actin基因PCR结果结果2.2NLRP3和β-actin基因荧光定量PCR的溶解曲线NLRP3溶解曲线β-actin溶解曲线结果2.3

NLRP3和β-actin基因荧光定量PCR的扩增曲线NLRP3扩增曲线β-actin扩增曲线结果NLRP3基因的标准曲线方程为：y=-2.758973x+29.080881(R2=0.999497)2.4NLRP3基因的标准曲线结果2.5β-actin基因的标准曲线β-actin基因的标准曲线方程为：y=-2.758807x+22.635201(R2=0.999815)结果2.6NLRP3基因在各个组织的相对表达水平结果3.1原核表达载体构建建议下面这个图用文本框，不要直接粘贴过来。结果3.2三黄鸡NLRP3蛋白的诱导表达及纯化对各个数字代表的条带进行说明。抗体是如何制备的？如何检测的？免疫兔子的程序和Elisa检测结果结果3.3His标签单克隆抗体检测NLRP3的表达3.4纯化蛋白SDS蛋白凝胶电泳检测文字太小。结果3.5纯化蛋白WB检测3.6抗血清特异性检测文字太小。结果

4.三黄鸡NLRP3蛋白的免疫组织化学检测

A气管B肺脏建议把组织学的图片弄的大一些，一张ppt上面只有一张图片就可以了。

C心脏D大脑F法氏囊E脾脏

H肾脏G肝脏讨论1.

NLRP3作为最重要的病原感受器之一，对于调控炎性复合体的激活，避免其由于过度活化而造成不良结果，具有非常显著的作用。NLRP3蛋白组织学特异性的表达和分布与各个组织器官在相应炎症中发挥的作用密切相关。2.哺乳类动物和禽类之间的同源性非常低，说明哺乳动物和禽类宿主炎症反应机制可能相异。关于鸡NLRP3基因与其他物种同源性的分析结果，将会为哺乳类和禽类之间的物种进化研究提供新的数据信息。文字适当放大一些。讨论3.所制备的鸡NLRP3多克隆抗体有助于对NLRP3炎性复合体相关信号通路的深入研究，从而进一步探究哺乳类和禽类炎症反应机制的差异。4..三黄鸡的NLRP3mRNA在肺脏和气管中的表达量远远高于其他器官，气管和肺脏是鸡呼吸道系统疾病发生的靶器官，对宿主有着重要的影响作用。有研究证实禽流感病毒的感染可激活NLRP3炎性复合体，改变下游因子IL-1β的表达量。文字适当放大一些。讨论5.本研究NLRP3蛋白免疫组织化学分析结果显示，气管和肺脏上皮细胞均呈现出强阳性反应。这个结果与Mansson等关于NALP3mRNA和蛋白存在于鼻息肉和正常的上呼吸道鼻粘膜的研究结果一致。6.本研究NLRP3蛋白免疫组织化学分析结果显示，法氏囊中的皮质和髓质淋巴细胞则呈现强阳性，法氏囊是禽类相比于哺乳类动物所特有的免疫器官，在鸡对抗病原体感染中扮演着重要的角色，从该试验结果可推测，NLRP3可能是该免疫器官发生炎症反应的重要分子。文字适当放大一些。讨论7.BALB/c小鼠NLRP3蛋白表达的免疫组织化学结果显示，只有极少量的肝细胞呈现中至强阳性反应，但是本试验中三黄鸡大部分肝细胞呈现中至强阳性反应。三黄鸡大脑皮层神经元细胞呈现阳性反应，但在胶质细胞中却没有出现，这与之前报道人类的胶质细胞分泌IL-1β结果相异。这些结果说明，NLRP3组织分布在不同的物种间有显著的差异。文字适当放大一些。总结1.本实验成功克隆出三黄鸡NLRP3基因2.重组原核表达纯化蛋白制备出多克隆抗体3.获得了三黄鸡NLRP3基因在多个器官的基因表达数据4.从蛋白水平验证了三黄鸡NLRP3蛋白在各组织的分布获奖与发表的论文1.获奖情况

2014年6月被评为华南农业大学兽医学院模范共产党员

连续两年获得华南农业大学优秀硕士研究生一等奖

华南农业大学2015年优秀毕业研究生2.发表论文情况（1）JinhuiYe,MengYu,KaizhaoZhang,JianxinLiu,QingnanWang,PanTao,KunJia,MingLiao,ZhangyongNing.Tissue-specificexpressionpatternanddistributionofNLRP3inChineseYellowChicken.Gene,2015.（underreview）（2）叶锦辉，张凯照，于梦，王晴楠，刘健新，陶攀，宁章勇.波尔山羊线粒体融合蛋白2基因的克隆及序列分析.中国畜牧兽医,2015（已经录用，待刊出）.（3）张凯照,叶锦辉，于梦，王晴楠，刘健新，陶攀，亓文宝，宁章勇.